关于biological vs technical replicate# Biology - 生物学
f*n
1 楼
最近做luciferase assay,就是把含有疾病相关的snp的promoter跟luciferase连接在
一起,看snp对promoter的影响。假设snp的ref allele是A, 疾病相关的allele是B
我首先在hek293里做,用lipofectamine3000转染。铺板子(12-well)铺了10个孔,5
个用于allele-a, 5个用于allele-b。先把lipo和dna混合好,然后把mix分给每一个孔。
以上是第一次实验,过两天我会一模一样的重复上述实验。
我想请问这里的5个孔中的每一个孔算是biological replicate还是technical
replicate呢?
而这两次实验算是biological replicate还是technical replicate呢?
之所以问这个问题是因为后来面对转染neuron的实验。neuron比较难转染所以用的是
nucleofection,一次性用cuvette转染100万个细胞,然后分到12-well的3个孔中。
同样的实验过两天我也会一模一样的再重复一次。
对于neuron的转染,分到3个孔中的细胞是同一批的,也是同时经过electroporation,
然后同时同样条件贴壁,生长;我觉得这个是technical replicate;而过两天再重复
一次应该算是biological replicate?
那么这么说来,我之前的hek293一次实验中的5个孔,算不算technical replicate呢?
因为虽然lipo和dna是一起混的,但事先铺在板子里的细胞算是same sample吗?
一起,看snp对promoter的影响。假设snp的ref allele是A, 疾病相关的allele是B
我首先在hek293里做,用lipofectamine3000转染。铺板子(12-well)铺了10个孔,5
个用于allele-a, 5个用于allele-b。先把lipo和dna混合好,然后把mix分给每一个孔。
以上是第一次实验,过两天我会一模一样的重复上述实验。
我想请问这里的5个孔中的每一个孔算是biological replicate还是technical
replicate呢?
而这两次实验算是biological replicate还是technical replicate呢?
之所以问这个问题是因为后来面对转染neuron的实验。neuron比较难转染所以用的是
nucleofection,一次性用cuvette转染100万个细胞,然后分到12-well的3个孔中。
同样的实验过两天我也会一模一样的再重复一次。
对于neuron的转染,分到3个孔中的细胞是同一批的,也是同时经过electroporation,
然后同时同样条件贴壁,生长;我觉得这个是technical replicate;而过两天再重复
一次应该算是biological replicate?
那么这么说来,我之前的hek293一次实验中的5个孔,算不算technical replicate呢?
因为虽然lipo和dna是一起混的,但事先铺在板子里的细胞算是same sample吗?