蛋白电泳问题请教 - 未名空间MITBBS历史存档

n*d2017-01-06 08:01

1 楼

傍晚, 硅谷南湾, 太平洋吹来阿拉斯加寒流造就的习习凉风. 白天的气温并不高,但昼
夜温差大却正是增加西瓜甜度的有利条件. 又到了胖纸们最为纠结的季节, 有道是一年
好景君须记, 最是瓜香肚圆时.
西瓜，大自然给人们最好的馈赠, 清爽解渴，味道甘味多汁，是盛夏佳果，除不含脂肪
和胆固醇外，含有大量葡萄糖、苹果酸、果糖、蛋白氨基酸、番茄素及丰富的维生素C
等物质，是一种富有很高的营养、纯净、食用安全食品。现代社会强大的物流, 可以使
人们在超市买到应有尽有的西瓜. 在熙熙攘攘的扣死扣(costco), 5刀一个大西瓜, 人
们似乎都会依买买提花版匆匆过客之老张的方法左拍右拍上拍下拍挑上三两个,便欢欢
喜喜的回家去米西米西.
扣死扣的蔬菜瓜果自然是入不了北木的法眼,曾经被西兰花放冰箱存一个月竟完好如初
搞怕了. 此刻他正在后院挑选晚餐的食材. 他绞尽脑汁种上了五色五味的各种有机瓜果
蔬菜,日复一日的轮流采摘.
北木家的虽还远远没到味蕾审美疲劳, 却也总觉得少了点什么.
看到尚未长足的嫩冬瓜, 北木想起瓜王趴上那厚厚的西瓜皮, 计上心头. 西瓜常有,
然瓜皮能做菜的西瓜却不常有,象冬瓜一样可以红烧的那更是可遇而不可求. 这个瓜兄
瓜弟加起来几乎100磅的品种, 却是极好.
不出北木所料, 这缺了那双臭鞋, 竟真显不出这瓜兄瓜弟的实际大小.
冬瓜,是穷人的肥肉. 好好保存可以长达半年之久. 寻常人家饮食再寡淡,有了红烧冬瓜
, 都会让肠胃温暖起来,那是妈妈的味道, 那是家乡的味道. 它就象一个味觉定位系统,
一头锁定飘泊的北木, 另一头永远牵绊着记忆深处的家乡.
以楚地古法烹制的红烧冬瓜, 必是密密的在皮面打上十字花刀,切成肉方状, 每面都煎
到好处, 淋上一点老抽上色, 竟与沪菜的浓油赤酱不谋而合. 稍加清水, 配上红椒碎粒
, 浏阳豆豉,耐心的焖到酥烂, 出锅时撒盐少许,略烧干汤汁,再切些青葱, 此时不光味
觉如火山般爆发, 在视觉上也是一道多彩的盛宴.
北木将瓜瓤切成方块做饭后水果, 表皮削去一层, 留下若肥瘦相间的五花肉一般的瓜皮
. 遵循先祖的规矩,细心烧制.
“出锅咯”, 看上去与红烧冬瓜竟几可乱真, 在清甜的口味上更胜一酬, 余香侵心. 如
此一瓜二吃, 岂不快哉, 一天的疲累, 竟然瞬间消逝.
“明天还要吃!!!”
“好!!!还能连吃一星期!!!”
//倒...

d*f2017-01-06 08:01

2 楼

【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
发信人: fredrichk (fredrichk), 信区: WaterWorld
标题: Re: 各位多少岁的时候性能力开始下降？
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 25 01:53:20 2011, 美东)
没人回答吧.
我是33岁.
32岁那年,和最后一个婚外女朋友分开,开始了老婆孩子的单调生活,一开始感觉还好,一
年多后,发现技战术和体能都是不磨练就退步了.前一年平均每星期三次,有时候一天两
次,第二年变成一周一两次,到了34岁基本上一月两三次.
后来老婆又怀孕了,最后这半年一共就3次.问题是我还天天晨举.

m*n2017-01-06 08:01

3 楼

目标蛋白大概60 kd
phospho-MS显示在C端有2个aa会被磷酸化。
没有phopspho-specific抗体
现在想看看磷酸化后在SDS-PAGE胶上会不会有shift
试了不同浓度的胶(8%,10%,12%,4-20%)，都没看到shift
想请教版上的各路大牛，这种大小的蛋白磷酸化之后会shift吗？
如果会shift的话，需要什么样的条件才能detect到？

G*a2017-01-06 08:01

4 楼

哈哈，佳作欣赏！
瓜美，菜香，赞！

o*e2017-01-06 08:01

5 楼

ft...那是审美疲劳，不是下降。

g*n2017-01-06 08:01

6 楼

两个方法：1. 确定蛋白没有磷酸化，用磷酸酶处理。确定蛋白被磷酸化了，用激酶酶
处理。然后走胶比较。
2. 用phos-tag 胶。
如果有抗体，做western。

f*c2017-01-06 08:01

7 楼

好吃好吃好好吃
没有臭鞋就是好LOL

b*n2017-01-06 08:01

8 楼

晨举是性能力下降的标志。
以前从来没有，40后开始出现。

【在 d********f 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
: 发信人: fredrichk (fredrichk), 信区: WaterWorld
: 标题: Re: 各位多少岁的时候性能力开始下降？
: 发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 25 01:53:20 2011, 美东)
: 没人回答吧.
: 我是33岁.
: 32岁那年,和最后一个婚外女朋友分开,开始了老婆孩子的单调生活,一开始感觉还好,一
: 年多后,发现技战术和体能都是不磨练就退步了.前一年平均每星期三次,有时候一天两
: 次,第二年变成一周一两次,到了34岁基本上一月两三次.
: 后来老婆又怀孕了,最后这半年一共就3次.问题是我还天天晨举.

m*n2017-01-06 08:01

9 楼

只有目标蛋白的抗体，但是没有磷酸化特异性抗体。
样品在做phospho-MS时发现了这2个位点被磷酸化，
所以就做了western来看一下蛋白磷酸化之后有没有shift。
现在的问题是这个蛋白是不是太大了，所以1-2个位点的磷酸化并不太影响mobility
此外，多谢您的建议用phos-tag gel
以前没接触过这个，有没有比较好的reference?

【在 g*****n 的大作中提到】

: 两个方法：1. 确定蛋白没有磷酸化，用磷酸酶处理。确定蛋白被磷酸化了，用激酶酶
: 处理。然后走胶比较。
: 2. 用phos-tag 胶。
: 如果有抗体，做western。

o*r2017-01-06 08:01

10 楼

好文！

l*12017-01-06 08:01

11 楼

磷酸化后分子量基本不变，你可以试着做一个等电点的二维胶

T*m2017-01-06 08:01

12 楼

北木的西瓜，真是花版一绝啊！
我怎么觉得你在讽刺谁啊！我第一眼就看到了“习”，第二眼就看到了“胖”。

【在 n*******d 的大作中提到】

: 傍晚, 硅谷南湾, 太平洋吹来阿拉斯加寒流造就的习习凉风. 白天的气温并不高,但昼
: 夜温差大却正是增加西瓜甜度的有利条件. 又到了胖纸们最为纠结的季节, 有道是一年
: 好景君须记, 最是瓜香肚圆时.
: 西瓜，大自然给人们最好的馈赠, 清爽解渴，味道甘味多汁，是盛夏佳果，除不含脂肪
: 和胆固醇外，含有大量葡萄糖、苹果酸、果糖、蛋白氨基酸、番茄素及丰富的维生素C
: 等物质，是一种富有很高的营养、纯净、食用安全食品。现代社会强大的物流, 可以使
: 人们在超市买到应有尽有的西瓜. 在熙熙攘攘的扣死扣(costco), 5刀一个大西瓜, 人
: 们似乎都会依买买提花版匆匆过客之老张的方法左拍右拍上拍下拍挑上三两个,便欢欢
: 喜喜的回家去米西米西.
: 扣死扣的蔬菜瓜果自然是入不了北木的法眼,曾经被西兰花放冰箱存一个月竟完好如初

c*r2017-01-06 08:01

13 楼

同建议做2D-Gel，如果有抗体的话（不一定要识别磷酸化位点），在2D-western blot
上应该能看到磷酸化之后等电点变化。
给你看一个我之前实验室的图：

【在 m*****n 的大作中提到】

: 目标蛋白大概60 kd
: phospho-MS显示在C端有2个aa会被磷酸化。
: 没有phopspho-specific抗体
: 现在想看看磷酸化后在SDS-PAGE胶上会不会有shift
: 试了不同浓度的胶(8%,10%,12%,4-20%)，都没看到shift
: 想请教版上的各路大牛，这种大小的蛋白磷酸化之后会shift吗？
: 如果会shift的话，需要什么样的条件才能detect到？

O*d2017-01-06 08:01

14 楼

我把西瓜皮都吃了。只加一点油，再加酱油和盐，在锅里反复搅动直到瓜皮变半透明
即可。

c*r2017-01-06 08:01

15 楼

我们做的这个蛋白有很多个磷酸化位点，所以看到有很多“点”。根据报道，这个蛋白
，只有在多个位点被heavily磷酸化之后才会在1D SDS-PAGE上有“分子量”/迁移率的
变化。

x*22017-01-06 08:01

16 楼

种的好，写的好，拍照的好，做吃的也做的好。赞！
北木西瓜王也是顶瓜瓜一帅大叔耶！！
瓜菜图该上版标。

w*u2017-01-06 08:01

17 楼

native gel 啊

【在 m*****n 的大作中提到】

: 目标蛋白大概60 kd
: phospho-MS显示在C端有2个aa会被磷酸化。
: 没有phopspho-specific抗体
: 现在想看看磷酸化后在SDS-PAGE胶上会不会有shift
: 试了不同浓度的胶(8%,10%,12%,4-20%)，都没看到shift
: 想请教版上的各路大牛，这种大小的蛋白磷酸化之后会shift吗？
: 如果会shift的话，需要什么样的条件才能detect到？

g*a2017-01-06 08:01

18 楼

羨慕死了，我種的太晚，現在才半大不小。但我種前先大翻土然後混入很多沙子和
Compost，希望有幫助，
最上面右邊數下來第二張的那顆品種為何，起看起是不是最甜的？
有沒有北京那種沙仁的種？

w*d2017-01-06 08:01

19 楼

为什么不用MS做呢？

n*d2017-01-06 08:01

20 楼

我还是喜欢有鞋的照片, :)

【在 f*****c 的大作中提到】

: 好吃好吃好好吃
: 没有臭鞋就是好LOL

s*12017-01-06 08:01

21 楼

试试这个小分子http://www.wako-chem.co.jp/english/labchem/product/life/Phos-tag/Acrylamide.htm

n*d2017-01-06 08:01

22 楼

习胖? 你家熟人吗? lol

【在 T*******m 的大作中提到】

: 北木的西瓜，真是花版一绝啊！
: 我怎么觉得你在讽刺谁啊！我第一眼就看到了“习”，第二眼就看到了“胖”。

K*S2017-01-06 08:01

23 楼

MS都有了还跑胶干什么?

【在 m*****n 的大作中提到】

: 目标蛋白大概60 kd
: phospho-MS显示在C端有2个aa会被磷酸化。
: 没有phopspho-specific抗体
: 现在想看看磷酸化后在SDS-PAGE胶上会不会有shift
: 试了不同浓度的胶(8%,10%,12%,4-20%)，都没看到shift
: 想请教版上的各路大牛，这种大小的蛋白磷酸化之后会shift吗？
: 如果会shift的话，需要什么样的条件才能detect到？

n*d2017-01-06 08:01

24 楼

嗯,确实和冬瓜一样

【在 O*******d 的大作中提到】

: 我把西瓜皮都吃了。只加一点油，再加酱油和盐，在锅里反复搅动直到瓜皮变半透明
: 即可。

l*12017-01-06 08:01

25 楼

这个贴不错，难得的学术贴，一个问题，多种答案

n*d2017-01-06 08:01

26 楼

惭愧惭愧, 楞是写不出蓝星那个味, 呵呵

【在 x******2 的大作中提到】

: 种的好，写的好，拍照的好，做吃的也做的好。赞！
: 北木西瓜王也是顶瓜瓜一帅大叔耶！！
: 瓜菜图该上版标。

g*n2017-01-06 08:01

27 楼

图很漂亮。你怎么确定这个等电点变化是磷酸化的结果, 而不是其它修饰的结果.

blot

【在 c*********r 的大作中提到】

: 同建议做2D-Gel，如果有抗体的话（不一定要识别磷酸化位点），在2D-western blot
: 上应该能看到磷酸化之后等电点变化。
: 给你看一个我之前实验室的图：

n*d2017-01-06 08:01

28 楼

别着急, 能收成的. 直接掺沙子不一定会有用,但compost总是好的.
最上面右邊數下來第二張是charleston grey. 要说沙瓤, 甜, 每一种都是. 我家的总
是说"哇, 这是我今年吃过的最好吃的瓜", 所以吃到现在都搞不清哪一种最好吃了

【在 g*******a 的大作中提到】

: 羨慕死了，我種的太晚，現在才半大不小。但我種前先大翻土然後混入很多沙子和
: Compost，希望有幫助，
: 最上面右邊數下來第二張的那顆品種為何，起看起是不是最甜的？
: 有沒有北京那種沙仁的種？

g*a2017-01-06 08:01

29 楼

我是從小西瓜大王，一有西瓜連飯都可以不吃。台灣當兵時是空降部隊，有次跳傘跳進
西瓜田裡，又熱又渴，那光景那管什麼秋毫無犯這一套，當場剖開一個，滿口生津，那
真是這輩子吃過最好吃的西瓜。當時的印象最深的就是那片西瓜田是一大片沙地，所以
我的夢就是搞塊沙地好種西瓜。
我也種了三種，但都是ＨＤ買現成苗，Burpee買過Million Buck Hybrid。確定沒有
Charleston Grey，記下了，Burpee下次一批買進。
或者我們可以交換些。大家省點銀子也順便交流一下？

【在 n*******d 的大作中提到】

: 别着急, 能收成的. 直接掺沙子不一定会有用,但compost总是好的.
: 最上面右邊數下來第二張是charleston grey. 要说沙瓤, 甜, 每一种都是. 我家的总
: 是说"哇, 这是我今年吃过的最好吃的瓜", 所以吃到现在都搞不清哪一种最好吃了

l*u2017-01-06 08:01

30 楼

好像确实不应该掺沙子。西瓜也不一定要很沙的土。估计就多加compost就好。我去年
种西瓜的时候是攀在架子上的，瓜不大，但是香，甜。北木的这个巨无霸搞得偶又痒了。

【在 n*******d 的大作中提到】

: 别着急, 能收成的. 直接掺沙子不一定会有用,但compost总是好的.
: 最上面右邊數下來第二張是charleston grey. 要说沙瓤, 甜, 每一种都是. 我家的总
: 是说"哇, 这是我今年吃过的最好吃的瓜", 所以吃到现在都搞不清哪一种最好吃了

l*u2017-01-06 08:01

31 楼

赞大蚯蚓，居然是空军，威猛帅哥。

的总

【在 g*******a 的大作中提到】

: 我是從小西瓜大王，一有西瓜連飯都可以不吃。台灣當兵時是空降部隊，有次跳傘跳進
: 西瓜田裡，又熱又渴，那光景那管什麼秋毫無犯這一套，當場剖開一個，滿口生津，那
: 真是這輩子吃過最好吃的西瓜。當時的印象最深的就是那片西瓜田是一大片沙地，所以
: 我的夢就是搞塊沙地好種西瓜。
: 我也種了三種，但都是ＨＤ買現成苗，Burpee買過Million Buck Hybrid。確定沒有
: Charleston Grey，記下了，Burpee下次一批買進。
: 或者我們可以交換些。大家省點銀子也順便交流一下？

g*a2017-01-06 08:01

32 楼

不是空軍，空軍把我們載上天，然後一腳把我們踢下來。

【在 l*****u 的大作中提到】

: 赞大蚯蚓，居然是空军，威猛帅哥。
:
: 的总

l*u2017-01-06 08:01

33 楼

一样帅。你们空降部队属于陆军？
以前我去应征大陆的空军，教官问去台湾抓谁，我说林志玲，后来。。。。唉。。。

【在 g*******a 的大作中提到】

: 不是空軍，空軍把我們載上天，然後一腳把我們踢下來。

T*m2017-01-06 08:01

34 楼

习胖你不认识？花版的著名ID之一啊！LOL。

【在 n*******d 的大作中提到】

: 习胖? 你家熟人吗? lol

d*w2017-01-06 08:01

35 楼

俺家的西瓜太小，皮又太薄，木有办法红烧。
上周末到自由市场上买了一个有籽的长西瓜，明年也种个大的，皮红烧

n*d2017-01-06 08:01

36 楼

我种过的都还只是homedepot/lowes买的种子， charleston grey就是HD的。这两家买
的种子我唯一淘汰的只有sugar baby和black diamond, 其他的都不错。
时间上我是4月初育苗5月初下地，7月中开始收获。你在南加应该没问题

【在 g*******a 的大作中提到】

: 我是從小西瓜大王，一有西瓜連飯都可以不吃。台灣當兵時是空降部隊，有次跳傘跳進
: 西瓜田裡，又熱又渴，那光景那管什麼秋毫無犯這一套，當場剖開一個，滿口生津，那
: 真是這輩子吃過最好吃的西瓜。當時的印象最深的就是那片西瓜田是一大片沙地，所以
: 我的夢就是搞塊沙地好種西瓜。
: 我也種了三種，但都是ＨＤ買現成苗，Burpee買過Million Buck Hybrid。確定沒有
: Charleston Grey，記下了，Burpee下次一批買進。
: 或者我們可以交換些。大家省點銀子也順便交流一下？

n*d2017-01-06 08:01

37 楼

我以为你说习大呢

【在 T*******m 的大作中提到】

: 习胖你不认识？花版的著名ID之一啊！LOL。

n*d2017-01-06 08:01

38 楼

对，种大的，多吃两口, lol

【在 d*****w 的大作中提到】

: 俺家的西瓜太小，皮又太薄，木有办法红烧。
: 上周末到自由市场上买了一个有籽的长西瓜，明年也种个大的，皮红烧

i*e2017-01-06 08:01

39 楼

太疯狂了，怎么能种出这么大的西瓜，，，

y*22017-01-06 08:01

40 楼

哇！又见北木大作，典型的舌尖体，这个＂一年好景君须记，最是瓜香肚圆时＂好像是
专门为北木写的啊！ 😄
这次回国，吃到了好多种当地产的甜西瓜，过了把西瓜瘾 😋

C

【在 n*******d 的大作中提到】

: 傍晚, 硅谷南湾, 太平洋吹来阿拉斯加寒流造就的习习凉风. 白天的气温并不高,但昼
: 夜温差大却正是增加西瓜甜度的有利条件. 又到了胖纸们最为纠结的季节, 有道是一年
: 好景君须记, 最是瓜香肚圆时.
: 西瓜，大自然给人们最好的馈赠, 清爽解渴，味道甘味多汁，是盛夏佳果，除不含脂肪
: 和胆固醇外，含有大量葡萄糖、苹果酸、果糖、蛋白氨基酸、番茄素及丰富的维生素C
: 等物质，是一种富有很高的营养、纯净、食用安全食品。现代社会强大的物流, 可以使
: 人们在超市买到应有尽有的西瓜. 在熙熙攘攘的扣死扣(costco), 5刀一个大西瓜, 人
: 们似乎都会依买买提花版匆匆过客之老张的方法左拍右拍上拍下拍挑上三两个,便欢欢
: 喜喜的回家去米西米西.
: 扣死扣的蔬菜瓜果自然是入不了北木的法眼,曾经被西兰花放冰箱存一个月竟完好如初

b*y2017-01-06 08:01

41 楼

北木不仅西瓜蔬菜种的好，皮肤也保养得好，厨艺也甚是了得啊，赞，LOL

g*i2017-01-06 08:01

42 楼

浏阳豆豉这边哪里有得买？

n*d2017-01-06 08:01

43 楼

大华, 黑豆豉

【在 g****i 的大作中提到】

: 浏阳豆豉这边哪里有得买？

n*d2017-01-06 08:01

44 楼

谢谢夸奖, 天天吃有机的蔬菜瓜果, 皮肤不好都不行啊 //吐

【在 b********y 的大作中提到】

: 北木不仅西瓜蔬菜种的好，皮肤也保养得好，厨艺也甚是了得啊，赞，LOL

n*d2017-01-06 08:01

45 楼

欢迎回来啊. 我应该请你捉刀, 一定更受欢迎!

【在 y****2 的大作中提到】

: 哇！又见北木大作，典型的舌尖体，这个＂一年好景君须记，最是瓜香肚圆时＂好像是
: 专门为北木写的啊！ 😄
: 这次回国，吃到了好多种当地产的甜西瓜，过了把西瓜瘾 😋
:
: C

y*82017-01-06 08:01

46 楼

文采真好啊
标题尤其有文采

傍晚, 硅谷南湾, 太平洋吹来阿拉斯加寒流造就的习习凉风. 白天的气温并不高,但昼
夜温差大却正是增加西瓜甜度的有利条件. 又到了胖纸们最为纠结的季节, 有道是一年
好景君须记, 最是瓜香肚圆时.

【在 n*******d 的大作中提到】

: 傍晚, 硅谷南湾, 太平洋吹来阿拉斯加寒流造就的习习凉风. 白天的气温并不高,但昼
: 夜温差大却正是增加西瓜甜度的有利条件. 又到了胖纸们最为纠结的季节, 有道是一年
: 好景君须记, 最是瓜香肚圆时.
: 西瓜，大自然给人们最好的馈赠, 清爽解渴，味道甘味多汁，是盛夏佳果，除不含脂肪
: 和胆固醇外，含有大量葡萄糖、苹果酸、果糖、蛋白氨基酸、番茄素及丰富的维生素C
: 等物质，是一种富有很高的营养、纯净、食用安全食品。现代社会强大的物流, 可以使
: 人们在超市买到应有尽有的西瓜. 在熙熙攘攘的扣死扣(costco), 5刀一个大西瓜, 人
: 们似乎都会依买买提花版匆匆过客之老张的方法左拍右拍上拍下拍挑上三两个,便欢欢
: 喜喜的回家去米西米西.
: 扣死扣的蔬菜瓜果自然是入不了北木的法眼,曾经被西兰花放冰箱存一个月竟完好如初