问个关于crispr/cas9的问题# Biology - 生物学
s*n
1 楼
很naive 的问题。cas9切了double strand DNA 后，留一个口，如果这个口是通过non-
homologous end joining连起来，不就又恢复到原样了? 怎么说会导致deletion/
insertion呢?
homologous end joining连起来，不就又恢复到原样了? 怎么说会导致deletion/
insertion呢?
N*e
2 楼
干这个活的酶，经常会加点减点吧？
不像T4 ligase一样吧？
不像T4 ligase一样吧？
x*6
3 楼
1. 野生型cas9切出来的break,不是平末端，有一个碱基的overhang。这种情况下，
NHEJ发生的频率在50%左右（？）。
2. 有人做了cas9突变子，只能切单链；那么联用两个切单链的cas9就能制造一个
overhang很长（>>1 bp）的break, 这总情况下NHEJ的频率~1%（?）。
https://www.addgene.org/crispr/nick/
NHEJ发生的频率在50%左右（？）。
2. 有人做了cas9突变子，只能切单链；那么联用两个切单链的cas9就能制造一个
overhang很长（>>1 bp）的break, 这总情况下NHEJ的频率~1%（?）。
https://www.addgene.org/crispr/nick/
H*0
4 楼
NHEJ是error prone的~~~~~
w*a
5 楼
肯定绝大部分修复都是恢复原样，
问题是恢复原样不就又被切了么？直到修复出错了才会停。
non-
【在 s******n 的大作中提到】
: 很naive 的问题。cas9切了double strand DNA 后，留一个口，如果这个口是通过non-
: homologous end joining连起来，不就又恢复到原样了? 怎么说会导致deletion/
: insertion呢?
问题是恢复原样不就又被切了么？直到修复出错了才会停。
non-
【在 s******n 的大作中提到】
: 很naive 的问题。cas9切了double strand DNA 后，留一个口，如果这个口是通过non-
: homologous end joining连起来，不就又恢复到原样了? 怎么说会导致deletion/
: insertion呢?
i*0
6 楼
正解。
【在 H***0 的大作中提到】
: NHEJ是error prone的~~~~~
【在 H***0 的大作中提到】
: NHEJ是error prone的~~~~~
i*0
7 楼
正解。
【在 H***0 的大作中提到】
: NHEJ是error prone的~~~~~
【在 H***0 的大作中提到】
: NHEJ是error prone的~~~~~
相关阅读
Analyze One's Own DNA at Home有人参加ASBMB-PTM Symposium么？这个猪大阳是不是蜢蟺毒的托，还是在蜢蟺毒工作，天天鼓吹吃转基因卖客阿色假天才奖评选委员会是一群伪善者，推荐immunology教材生物学领域是小农的天地有没有做病原菌真菌或线虫方向的前辈?HCV infectonpostdoc positions at harvard medical school我觉得Robert Geoffrey Edwards十年前就该得炸药奖了支持转基因的论据之一：没有peer review paper证明转基因粮食把自己review过的文章贴在自己主页里是不是违反职业道德的？外行请教一下cancer biologyAnother successful change of careerEqual variance or unequal variance.又有兩篇bullshit science文章在...老印postdoc阴谋破坏别人实验被抓best 15 place in US to do PostDocIs there any dye that stains ribosomes?上来吼一声