Re: Flag-tagged protein# Biology - 生物学
r*o
1 楼
Flag tag 最早来自于T7噬菌体十号基因表达产物11个氨基酸的前导序列。
现在公认的序列是：DYKDDDDK
这个标签的好处是一来比较小，二来比较亲水，所以一般不影响所标记蛋白
的活性。至於是在N还是C端，要看你蛋白的实际情况。比如有些蛋白N端或者C端要
经过蛋白酶切除，这种情况下FLAG显然不能加到要被切除的一端去。当然你也可以
两端都试试，加在哪端活性好，就用那端好了。
如果是N-terminus Flag，ATG应该加在FLAG前面，之前还应该有Kozak sequence,
以便翻译正确。不用隔太多氨基酸，用一两个glycine之类旋转比较灵活的氨基酸
隔开就行了。
如果你想省事，可以找商业化的有FLAG载体，比如Stratagene的
pCMV-Tag系列,既有N端FLAG的载体，又有C端FLAG的载体。又如SIGMA公司的pFLAG-CMV
系列，也是既有N端又有C端FLAG载体。SIGMA公司还提供一种特别的p3XFLAG-CMV系列，
加有三个串联的FLAG。如果你的蛋白做western检测起来信号很弱，加三个或者更多
FL
现在公认的序列是：DYKDDDDK
这个标签的好处是一来比较小，二来比较亲水，所以一般不影响所标记蛋白
的活性。至於是在N还是C端，要看你蛋白的实际情况。比如有些蛋白N端或者C端要
经过蛋白酶切除，这种情况下FLAG显然不能加到要被切除的一端去。当然你也可以
两端都试试，加在哪端活性好，就用那端好了。
如果是N-terminus Flag，ATG应该加在FLAG前面，之前还应该有Kozak sequence,
以便翻译正确。不用隔太多氨基酸，用一两个glycine之类旋转比较灵活的氨基酸
隔开就行了。
如果你想省事，可以找商业化的有FLAG载体，比如Stratagene的
pCMV-Tag系列,既有N端FLAG的载体，又有C端FLAG的载体。又如SIGMA公司的pFLAG-CMV
系列，也是既有N端又有C端FLAG载体。SIGMA公司还提供一种特别的p3XFLAG-CMV系列，
加有三个串联的FLAG。如果你的蛋白做western检测起来信号很弱，加三个或者更多
FL