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western提蛋白的困惑:多次离心vortex会不会降解蛋白
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western提蛋白的困惑:多次离心vortex会不会降解蛋白# Biology - 生物学
h*e
1
我的怎么都不涨
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i*t
2
DS2019上面写的computer engineering,那么将来可以转到mechanical engineer或其它的electrical engineering或xx工程或医学系么?毕竟薄厚是交叉学科,将来转到别的系是肯定可能的。不知道这个叫不叫跨专业?J1能转过去么?
多谢。
另一个问题,DS2019只有1年的J1能豁免么?来得及么?
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y*a
3
【 以下文字转载自 TrustInJesus 讨论区 】
发信人: jym2307 (罪魁), 信区: TrustInJesus
标 题: Re: 蓄意反基,何患无辞?
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 7 17:49:17 2010, 美东)
那就回到现实中吧
要么你在belief呆着,爱干什么干什么,反正没人管你
要么你去申请基督版版主,这样你爱干什么就可以干什么了
否则,在本版,PA会被封,干扰版面秩序会被封,刷屏炸版会被封
自重
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s*0
4
今天从bestbuy花了199买了3g版的nook,外加50刀的BN的GC。
特来炫耀,大家要想要的快去Bestbuy抢啊
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a*e
5
最近一次做western,用NEPER kit提取胞浆里的ERK和p38蛋白。因为用划伤组织做刺激
,脱落不少细胞,我就把medium离心得到这些脱落的细胞。同时在培养皿里加冰PBS,
在冰PBS里刮下剩余的细胞放进脱落的细胞里再次离心。然后用kit里CER lysis buffer
裂解(已加入inhibitor cocktail)。
裂解的时候我vortex两次,每次15sec。NEPER protocol要求vortext一次,15sec即可。
结果照片洗出来什么都没有,连EGF刺激的positive control都没出来。
以前只用过一次NEPER,erk出来band,而且结果可信。不同点在于没有收集脱落的细胞。另外,这次实验煮沸变性的时间长了,用了15min。
所以我考虑是不是多次离心、vortex是蛋白降解,也可能是收集脱落细胞的时候medium
和细胞都没有冷却到ice cold,磷酸酶还在起作用。煮沸时间长我不确定会不会对实验有影响。
另外,p38一直没做出来过。用超声裂解细胞也好,用NEPER vortex裂解也好都没出过
band。
请高手指点,同行探讨。谢谢。
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w*e
6
银行

【在 h*e 的大作中提到】
: 我的怎么都不涨
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r*y
7
半年就可以豁免了

其它的electrical engineering或xx工程或医学系么?毕竟薄厚是交叉学科,将来转到
别的系是肯定可能的。不知道这个叫不叫跨专业?J1能转过去么?

【在 i*****t 的大作中提到】
: DS2019上面写的computer engineering,那么将来可以转到mechanical engineer或其它的electrical engineering或xx工程或医学系么?毕竟薄厚是交叉学科,将来转到别的系是肯定可能的。不知道这个叫不叫跨专业?J1能转过去么?
: 多谢。
: 另一个问题,DS2019只有1年的J1能豁免么?来得及么?

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y*a
8
要么你去申请基督版版主,这样你爱干什么就可以干什么了
这厮还真坦白,这么豪壮的表白圣诞老人要不要收录?
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c*g
9
只看得懂bestbuy,GC,还有3g。
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e*s
10
这个NEPER提取MAPK的原理是什么?
Western是来检测不是提取的吧?
看完有些糊涂。
Vortex多少次什么的有没有影响取决于结合强弱,既然Protocol里有这一步,你多一次
应该不是决定性的因素。但有时候Binding较弱确实容易解离。

buffer
可。
胞。另外,这次实验煮沸变性的时间长了,用了15min。
medium
验有影响。

【在 a********e 的大作中提到】
: 最近一次做western,用NEPER kit提取胞浆里的ERK和p38蛋白。因为用划伤组织做刺激
: ,脱落不少细胞,我就把medium离心得到这些脱落的细胞。同时在培养皿里加冰PBS,
: 在冰PBS里刮下剩余的细胞放进脱落的细胞里再次离心。然后用kit里CER lysis buffer
: 裂解(已加入inhibitor cocktail)。
: 裂解的时候我vortex两次,每次15sec。NEPER protocol要求vortext一次,15sec即可。
: 结果照片洗出来什么都没有,连EGF刺激的positive control都没出来。
: 以前只用过一次NEPER,erk出来band,而且结果可信。不同点在于没有收集脱落的细胞。另外,这次实验煮沸变性的时间长了,用了15min。
: 所以我考虑是不是多次离心、vortex是蛋白降解,也可能是收集脱落细胞的时候medium
: 和细胞都没有冷却到ice cold,磷酸酶还在起作用。煮沸时间长我不确定会不会对实验有影响。
: 另外,p38一直没做出来过。用超声裂解细胞也好,用NEPER vortex裂解也好都没出过

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m*2
11
Bank!
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i*t
12
求教j1 transfter,如果院系学科不同可以转么?
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N*7
13
都劝你们不要去找没趣了,还去逗人家,这不是自找嘛。

【在 y****a 的大作中提到】
: 要么你去申请基督版版主,这样你爱干什么就可以干什么了
: 这厮还真坦白,这么豪壮的表白圣诞老人要不要收录?

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a*t
14
How? Please give details. Thanks

【在 s*****0 的大作中提到】
: 今天从bestbuy花了199买了3g版的nook,外加50刀的BN的GC。
: 特来炫耀,大家要想要的快去Bestbuy抢啊

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j*j
15
NEPER is for nuclear protein. That is why you can not find any signal.
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z*e
16
银行
其他都在砸
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l*a
17
我旁观

【在 N******7 的大作中提到】
: 都劝你们不要去找没趣了,还去逗人家,这不是自找嘛。
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n*2
18
Details please!!
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l*q
19
那该怎么办?
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y*u
20
200*(1.06 ~ 1.1)=$212-220 assuming 6-10% tax, so about $23-$31 more
expensive than $189 Kindle 2 from amazon with no tax. $50 B&N GC probably is
not worth $22-$30. so this deal is about the same as Kindle 2 at $189
unless you live in a state with no use tax or with tax on amazon purchase.
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z*e
21
看热闹
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n*2
22
The point of LZ is: Nook is now $199 for a 3G+WiFi and $149 for a WiFi,
while he/she got a deal, $199 for the 3G+WiFi as well as a $50 GC.
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a*s
23
跑路,明天搞不好下午就要跌哦

【在 l****q 的大作中提到】
: 那该怎么办?
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f*i
24
nook的操作和kindle比怎么样?
现在在用津科的v3,用了一年多了,不知道有没有必要更新一个。
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z*e
25
架势不太对,000423已出
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s*0
26

哈哈,thats my point
应大家要求给detail:
下午下班去了Bestbuy,发现他们有买Nook送50刀GC的活动,在Nook的柜台旁边有张海
报,注意,在这张海报上并没有写Nook的价格。但是店内的coupon book里的确有注明
Nook价格是265,然后送GC。然后问staff,这个50刀GC是不是用199(3g版,wifi版
bestbuy里还没有铺货)价格来买也可以拿,回答可以。
之后checkout,系统里并没有将50刀的GC减去,然后他叫manager过来,manager核对了
产品代码以后,发现系统里确实没有自动将GC的价格减去,我都已经做好了放弃的准备
了。然后令人惊奇的一幕发生了,manager在register上把nook的价格手动改成了149,
再加上50刀的GC,就199卖给我了。所以reciept上是nook 149, GC 50.
买Nook送GC的活动持续到7月2号,但是在一些老美的论坛上已经报告有部分因为Nook调
价,Bestbuy已经取消50GC的活动。但是我还是拿到了,所以大家尽快去Bestbuy里试试


【在 n*****2 的大作中提到】
: The point of LZ is: Nook is now $199 for a 3G+WiFi and $149 for a WiFi,
: while he/she got a deal, $199 for the 3G+WiFi as well as a $50 GC.

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m*s
27
银行、平安
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TX
28
津科的v3不错,就是不能上网

【在 f********i 的大作中提到】
: nook的操作和kindle比怎么样?
: 现在在用津科的v3,用了一年多了,不知道有没有必要更新一个。

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d*0
29
点进去一看,银行已经拉了好几天了,nnd
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f*i
30
其实有心想买一个能check email的ereader,然后把手机的data plan去掉再换个待机
半月的一般手机算了。省得手机总是担心没电,一堆功能都是摆设。

【在 TX 的大作中提到】
: 津科的v3不错,就是不能上网
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L*P
31
不会又要崩盘了吧?
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h*u
32
中石油,50ETF这两天都涨。
这是什么世道,28转换?
过去的几次疑似28转换最终都是拉指数诱空,不知这次如何

【在 d*******0 的大作中提到】
: 点进去一看,银行已经拉了好几天了,nnd
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t*3
33
黄在白下很多,要跌
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L*P
34
出货走人了。
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