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请教一下关于Lentivirus Packaging

请教一下关于Lentivirus Packaging# Biology - 生物学

t*n2010-05-12 07:05

1 楼

自家的，大概三百颗，都是雕成各种形态的把玩件，还有少量原石，都不是特高级的那
种（国内市场也就是3000-8000人民币不等），要报关吗？一般要交多少钱？带过来是
自己的项目用的，不是卖的。哪位了解的，先谢谢。
我前年随身带过几十颗，没什么事。

K*o2010-05-12 07:05

2 楼

我正在做Lentivirus，但是在Packaging的时候总是遇到问题。我用的是CellBio Labs
公司的Plat-A细胞，他们公司介绍上说是Stably expressing packaging gene的293细
胞。
我的做法是：第一天把细胞种上。第二天早上细胞贴壁贴的很好，然后转染，我直接把
Fugene和DNA的mix加到Media里。第三天早上换新鲜的Media。问题是我每次
Transfection以后，第二天这些细胞都会漂起来。看上去那些细胞并没死，但是就黏在
一起然后漂在Media里。几次了都这样。转染3天后，我把所有的液体收集起来后离心，
然后用上清infect breast cancer cells，效果很差。我觉得应该是Transfection的问
题。版上有人碰过类此的问题么？这到底是怎么回事呀？为什么我的细胞总是转染后漂
起来呢？平常传代的时候它们看着都挺正常的。
有没有其他的办法？或者大家用什么细胞或Reagent做Lentivirus Packaging效果好的
，分享一下？

d*i2010-05-12 07:05

3 楼

你是说总价值3000-8000人民币还是3000-8000一颗?
最安全就是如实申报.
你既然这么问就是想不申报.那总是有风险的,即使100个人告诉你他们没事,碰到你给海
关截了就有事了.

【在 t****n 的大作中提到】

: 自家的，大概三百颗，都是雕成各种形态的把玩件，还有少量原石，都不是特高级的那
: 种（国内市场也就是3000-8000人民币不等），要报关吗？一般要交多少钱？带过来是
: 自己的项目用的，不是卖的。哪位了解的，先谢谢。
: 我前年随身带过几十颗，没什么事。

h*n2010-05-12 07:05

4 楼

不要换medium，一换293就浮起来了

x*32010-05-12 07:05

5 楼

要求出口退税

a*d2010-05-12 07:05

6 楼

coat plate with gelatin, that may help

t*n2010-05-12 07:05

7 楼

谢谢楼上两位。
这出口退税是怎么回事？
进一步说明一下，玉石是单件 3000-8000人民币, 那是他们卖给别人的，成本比这少得
多，又因为是当年和人合伙用原石加工得来，都不知道该怎么算这成本。现在他们不
做这档次的玉石了，而我正想用来做个工艺文化作品，这不，又是自家人，就说让我回
国时自己把东西带来美国，我不用不出一分钱，而且用完后，除了我想留一点，其他的
我还会带回去给回他们。
这么一想，难道我进出都交税？按市价可是一两百万的东西，这怎得了，要是不按，又
该是怎样算合适？再说我是免费得来的，到时候还会还回去。

【在 x**3 的大作中提到】

: 要求出口退税

h*n2010-05-12 07:05

8 楼

polylysin 效果比这个好

【在 a****d 的大作中提到】

: coat plate with gelatin, that may help

K*o2010-05-12 07:05

9 楼

可我有时候没换，他们也浮起来了。这是不是很不正常？
你也是用293细胞么？我看到有些公司卖专门用来Packaging Lentivirus 的细胞，广告
上倒是写的不错，但也不知道到底好不好用。

K*o2010-05-12 07:05

10 楼

我倒是试过Gelatin coating，但好像效果差别不大。明天我去试试PolyLysine，希望
能成

a*n2010-05-12 07:05

11 楼

转染的时候细胞密度太大了

Labs

【在 K*o 的大作中提到】

: 我正在做Lentivirus，但是在Packaging的时候总是遇到问题。我用的是CellBio Labs
: 公司的Plat-A细胞，他们公司介绍上说是Stably expressing packaging gene的293细
: 胞。
: 我的做法是：第一天把细胞种上。第二天早上细胞贴壁贴的很好，然后转染，我直接把
: Fugene和DNA的mix加到Media里。第三天早上换新鲜的Media。问题是我每次
: Transfection以后，第二天这些细胞都会漂起来。看上去那些细胞并没死，但是就黏在
: 一起然后漂在Media里。几次了都这样。转染3天后，我把所有的液体收集起来后离心，
: 然后用上清infect breast cancer cells，效果很差。我觉得应该是Transfection的问
: 题。版上有人碰过类此的问题么？这到底是怎么回事呀？为什么我的细胞总是转染后漂
: 起来呢？平常传代的时候它们看着都挺正常的。