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请教基因克隆纯化蛋白后蛋白质分子量不对的问题。
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请教基因克隆纯化蛋白后蛋白质分子量不对的问题。# Biology - 生物学
R*k
1
周末,又到了说故事的时间。有个朋友,女的,高中毕业没有考上大学,所谓为了爱情
把,后来去到深圳,从最底层的工厂妹做起,后来爱情没了,伤心里去了北京。
自学财务,经过几年的努力,考了证件,做到财务经理,再后来再进一步。
算是成功的白领人士。
有钱的时候,家里负担挺大的,就给父母和弟弟一些钱,剩下的钱每月就投入到股市,
只买不卖。
后来经历07年牛市,赚的人都是晕乎乎的。这个时候弟弟要买房子,没办法,只好把股
市的钱拿了出来。
于是熊市来了,她避过了。
买的房子赚了,她发了。
每次说起这个,我都说,其实没什么,都是运气,因为要给家人买房子。
我都说,这是老天看你对父母和家人这么好,特意赏赐给你的。
她说也许把。我说的是真心话。我一直觉得,老天爷对好人不会亏待的,所以也努力尽
自己能力对身边的人好一点,一些不认识的,能帮的也帮。因为我经常做好事之后,股
票就会大涨。
几乎没有例外。所以我总是这样的愿意给人一些自己也不费力的帮助。
祝每个好心人都有幸运常伴。
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p*2
2
刚买的手机今天上班路上想上网,打开了3g和那个data啥,但是上网怎么那么慢啊!
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j*a
3
拿有我insert DNA的recombinant plasmid(pRSet A)去测序,100 % 符合。(我的
insert有1.0 kb),transform into BL21(DE3)pLysS Competent Cells 用His柱子纯
化蛋白. SDS-PAGE显示分子量20 kDa, 应该是35 kDa. 谢谢高手们回答。
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m*r
4
嗯。因缘,因果。
但最好做好事动机要‘纯’一点。
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g*4
5
There are lots of explanation for MW alteration, and you cannot verify any
explanation without sequencing your purified protein (actually do N-termianl
or C-terminal determination). Some proteins have apparent MW difference on
SDS-gel to calculated MW. Some proteins have beed degradated in cell or
during purification. Some proteins may be made from a inner initial codon (
ATG) if a SD sequence is appripriately placed.You can check the last
possibility by looking at your sequence (but even no SD
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R*k
6

我做事都是做力所能及,让自己很辛苦的帮忙是不会做的

【在 m****r 的大作中提到】
: 嗯。因缘,因果。
: 但最好做好事动机要‘纯’一点。

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C*m
7
SDS-PAGE不准,提出来之后打质谱

【在 j*****a 的大作中提到】
: 拿有我insert DNA的recombinant plasmid(pRSet A)去测序,100 % 符合。(我的
: insert有1.0 kb),transform into BL21(DE3)pLysS Competent Cells 用His柱子纯
: 化蛋白. SDS-PAGE显示分子量20 kDa, 应该是35 kDa. 谢谢高手们回答。

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s*n
8
一般而言SDS-PAGE不会差别这么大的,如果是N-His tag可能是翻译提前终止或降解,
如果是C-His tag可能是降解。
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