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含KCl的蛋白跑SDSPAGE胶遇到沉淀怎么办？

含KCl的蛋白跑SDSPAGE胶遇到沉淀怎么办？# Biology - 生物学

s*r2010-10-10 07:10

1 楼

☆─────────────────────────────────────☆
papercat (tiger) 于 (Fri May 9 14:32:52 2008) 提到:
QQMJ现在BSO力度远不及小老虎和TMM，BSO QUEEN的头衔应该让出来了。
☆─────────────────────────────────────☆
qaz (得意的飘) 于 (Fri May 9 14:33:53 2008) 提到:
有么?
QQMJ的实力雄厚呀

☆─────────────────────────────────────☆
Salmonella (Sprout) 于 (Fri May 9 14:33:53 2008) 提到:
u should encourage competition. hehe
☆─────────────────────────────────────☆
washpost (我洗邮报) 于 (Fri May 9 14:35:08 2008) 提到:
yeah, TMM super strong these

l*r2010-10-10 07:10

2 楼

张傲月->杨帅！
不是说杨帅以前都是被托的吗？
也只有傲月能托起他！
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

h*y2010-10-10 07:10

3 楼

小逸飞照顾弟弟时可谓尽心尽意、欣欣而忙，俨然一副小大人的模样。给弟弟冲奶粉时
，小逸飞严格按照妈妈规定的奶粉、温水、开水的量，几乎丝毫不差；给弟弟洗尿片时
，小逸飞先用开水烫，再用刷子刷，几乎不用洗衣粉和香皂、肥皂；给弟弟擦屁屁时，
小逸飞总是先用用温水浸湿的纱布轻轻地擦拭之后，再用纸巾沾去遗留在屁屁上的小水
珠儿，然后小心翼翼地拍上爽身粉……
如果事情至此为止的话也就万事大吉了。可是，醉的养母在偷偷地、严密地观察了小逸
飞几天之后，情绪再一次失控，问题和麻烦也就无可避免地升级了。在冷眼观察了几
天之后，醉的养母惊异地发现，逸飞虽小，但做事严谨，滴水不漏，且能“忍辱负重”
，演戏的本领更是远远地超过了她的想象。单单以小逸飞洗尿片时的情景来说吧，她那
稚嫩的小手先是被热水烫得通红，再被毛刷那凌乱的刷毛扎出无数个小血点，接着被冷
水冰得肿胀起来。这些细节，醉的养母看在眼里疼在心里，几度欲夺下小逸飞手中的尿
片，自己来洗，几度欲抱起小逸飞，狠狠地亲上几口。可是，当醉的养母突然发现，还
没有满百天的小逸斌居然“咿咿呀呀”地和醉说话，且说得没完没了的时候，一股妒
火直接冲出了她的头骨和头皮，在她的头顶轰轰烈烈地燃烧起来。妒火烧起的同时，在
养母那里，小逸飞所做的一切都有了另外一种解释。
那天夜里，醉和她的弟弟都已熟睡后，她的养母神秘兮兮地对她的养父说：“我仔细地
观察过，小逸飞在干活的时候，从没有皱过一下鼻子，没有撇过一下嘴巴，没有表现
出一丝一毫的不满。你想想看，一个五岁的孩子，正是淘气、争宠、撒娇、耍赖的年龄
，怎么可能这么懂事？我同事家的孩子，包括王大姐家已经十几岁的女儿，一听说妈
妈要给他们生小弟弟小妹妹，就吵着闹着表示反对，坚决不允许别人来分享父母对他们
的爱。啧，啧，这小逸飞太不正常了。”
醉的养父疲惫地闭上了眼睛，叹息道：“你总是疑神疑鬼的，累不累啊？我们单位的小
张是少数民族，最近怀了二胎。她和大家说，她怀孕前征求过大孩子的意见，问他想
不想要小弟弟小妹妹。人家那大孩子也才六岁，还是个男孩呢，高兴得直拍手。那孩子
说，小弟弟小妹妹都好，一个也行，两个也行。还说，等小弟弟小妹妹出生后，他要
好好保护弟弟妹妹。要我说啊，那个孩子和小逸飞才是正常的，那些不要弟弟妹妹的孩
子都是自私的小气鬼，那是不正常的。”
“你知道什么呀？”醉的养母有些不耐烦了，提高了声音说，“我今天看到小逸斌和小
逸飞咿咿呀呀地说话，非常亲密的样子。小逸斌都没和我们说过话，怎么就和姐姐说
话了呢？肯定是小孩子间有另外一种语言，小逸飞用小孩子的语言拉拢了小逸斌，没准
还说了我们的坏话呢。这个死丫头，太可怕了。小小的年龄，城府就这么深。我告诉
你啊，每当我盯着她看，总会觉得她就不是一个小孩子。”
“不是小孩子是什么？你越说越离谱了。快休息吧，别吵醒了孩子们。”醉的养父已经
疲惫至极，实在不想继续聊下去。
“是什么？难道你一点感觉也没有吗？”醉的养母忽地坐了起来，借着昏暗的灯光，瞄
了眼小逸飞，又看了看小逸斌。确定了两个孩子都在熟睡中，她才勒着嗓子说，“我
觉得小逸飞是被鬼魂附体了。鬼魂的目的可不是帮我们照顾儿子，她是想夺走我们的儿
子。你不记得王大姐也说过吗？她说小逸飞根本就不像乳臭未干的小孩子，她说小逸
飞就像一个小精灵，小天使，还说过小逸飞就不像这俗世间的孩子。”
“你越说越离奇了。”醉的养父嘴里这样说着，后背却冒起了凉风。他不相信醉是被鬼
魂附体了，但是他怀疑，自己的老婆中了邪。他定了定神，壮着胆子说，“你还没被王
大姐害够啊？如果不是她说话不加小心，也不会惹出后来这些事。你以后别和她在一起
，别听她妖言惑众。”
醉的养母一把抓住了丈夫的胳膊，吓得他猛地打了一个激灵，下意识地抽出了手臂，胆
颤心惊地说：“快睡吧。有话，等天亮再说。”
醉的养母直直地盯着丈夫，倒吸了一口冷气，恍然大悟地“噢”了一声，惊恐地说：“
你说得有道理！小逸飞就是从王大姐说出她是我们抱养的之后，才开始变化的。王大
姐就是妖魔！她多次说过，羡慕我们命好，有小逸飞这样乖巧的养女，又生了小逸斌这
样的大胖小子。她还说，也不知道我们积了多少德，好事儿都让我们家摊上了。”
醉的养母向丈夫身边挪了挪，眼睛里闪着诡异的光，轻轻地说：“肯定是王大姐把她身
上的妖魔派遣到了小逸飞的身上，借小逸飞的身体来离间我们一家人的关系，破坏我们
一家人的感情。咱们可不能让她得逞。”
醉的养父明明知道他的老婆在说胡话，但是他想，她能够把对小逸飞的猜疑转到王大姐
身上，从此以后也就不再和王大姐有密切往来了，这也算一桩好事。自从上次王大姐
失言后，他的心也一直悬着，生怕王大姐再惹出什么事来。看老婆对王大姐有所猜疑，
他就附和道：“就是。可不能让王大姐离间我们一家人的关系，破坏我们一家人的感
情。以后，你尽量少和她往来，以免她再搬弄是非。”
醉的养父没有想到，他对老婆的随声附和，不但没能帮她排除心理的重负，反而加重了
她内心的恐慌，也助燃了她要努力护护小逸斌、努力保护小逸飞、努力保卫这个幸福家
庭的热望。

K*e2010-10-10 07:10

4 楼

350 mM KCl的buffer里的蛋白，加了loading buffer，就生成SDS－K沉淀了。怎么上样
跑SDS PAGE胶啊？加热倒是能
溶解沉淀，但是刚刚吸起来，马上又沉淀了，加到上样孔都是沉淀。
会影响跑胶吗？怎么办呢？（不能加水稀释，因为样品体积就是30ul了，再加loading
buffer，刚刚好）

s*l2010-10-10 07:10

5 楼

张傲月奏是托举大帝啊，看他们大学同学对他的评价就是：喜欢举着人漫天跑。

【在 l********r 的大作中提到】

: 张傲月->杨帅！
: 不是说杨帅以前都是被托的吗？
: 也只有傲月能托起他！
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

h*y2010-10-10 07:10

6 楼

问好所有的朋友们。
提前祝大家元旦快乐，2013年事事吉顺，家人安康，生活幸福，收获多多！

h*92010-10-10 07:10

7 楼

这个不太可能吧？强酸强碱盐不可能沉淀。

y*e2010-10-10 07:10

8 楼

梦想被傲月哥哥托举一下，上去指定不下来的，高吖，
(不小心暴露一下坏思想)

b*n2010-10-10 07:10

9 楼

这个sds碰上钾离子沉淀是碱法抽质粒的基础之一

【在 h*****9 的大作中提到】

: 这个不太可能吧？强酸强碱盐不可能沉淀。

i*t2010-10-10 07:10

10 楼

就举一下就完了？？
。。。

【在 y*e 的大作中提到】

: 梦想被傲月哥哥托举一下，上去指定不下来的，高吖，
: (不小心暴露一下坏思想)

K*e2010-10-10 07:10

11 楼

？？为什么不可能？
就是含有氯化钾的buffer，遇到loading buffer里面的SDS，生成SDS钾，就沉淀了。
会不会影响跑胶？

【在 h*****9 的大作中提到】

: 这个不太可能吧？强酸强碱盐不可能沉淀。

y*e2010-10-10 07:10

12 楼

嗯，也在想，接下来敢嘛？hahahaha,,,,

【在 i******t 的大作中提到】

: 就举一下就完了？？
: 。。。

K*e2010-10-10 07:10

13 楼

那用KCl溶液溶解的蛋白怎么跑胶呢？
我必须用KCl做buffer的盐

【在 b******n 的大作中提到】

: 这个sds碰上钾离子沉淀是碱法抽质粒的基础之一

s*l2010-10-10 07:10

14 楼

傲月咯咯真惨，本来以为离开海政了不用当举人机器了，现在看来，还得继续举下去。
LOL

【在 y*e 的大作中提到】

: 嗯，也在想，接下来敢嘛？hahahaha,,,,

h*92010-10-10 07:10

15 楼

哦，学习了。

【在 b******n 的大作中提到】

: 这个sds碰上钾离子沉淀是碱法抽质粒的基础之一

M*u2010-10-10 07:10

16 楼

傲月哥挺举三次，失败了。

【在 y*e 的大作中提到】

: 梦想被傲月哥哥托举一下，上去指定不下来的，高吖，
: (不小心暴露一下坏思想)

b*n2010-10-10 07:10

17 楼

试试看aceton precipitation(或者methanol precipitation)然后重新用1x loading
buff溶解吧

【在 K**********e 的大作中提到】

: 那用KCl溶液溶解的蛋白怎么跑胶呢？
: 我必须用KCl做buffer的盐

y*e2010-10-10 07:10

18 楼

昂，真的? 都说那几个肉女太重了，可毁了哥啦！

【在 M****u 的大作中提到】

: 傲月哥挺举三次，失败了。

K*e2010-10-10 07:10

19 楼

用丙酮沉淀，会不会把盐也搞下来呢？
会损失多少？

p*t2010-10-10 07:10

20 楼

抓举有成绩吗？有的话，至少不会空手而归

【在 M****u 的大作中提到】

: 傲月哥挺举三次，失败了。

h*n2010-10-10 07:10

21 楼

透析除盐呢？

p*t2010-10-10 07:10

22 楼

杠铃加上去，就没有回头路了

【在 y*e 的大作中提到】

: 昂，真的? 都说那几个肉女太重了，可毁了哥啦！

K*e2010-10-10 07:10

23 楼

一个样品就30ul

【在 h****n 的大作中提到】

: 透析除盐呢？

T*t2010-10-10 07:10

24 楼

用desalting column试试呢？
或者你把已经有沉淀的样品离心一下，取上清再加点SDS再跑胶。如果你之前加的
loading buffer里的SDS已经把K离子都沉淀下来了的话，应该后来加的SDS就不会沉淀了吧。
不过我不知道你的蛋白是不是也跟SDS一起沉淀了，还是先除盐比较保险。

【在 K**********e 的大作中提到】

: 一个样品就30ul

a*e2010-10-10 07:10

25 楼

heat up the sample for 5min at 95c
then load immediately

loading

【在 K**********e 的大作中提到】

: 350 mM KCl的buffer里的蛋白，加了loading buffer，就生成SDS－K沉淀了。怎么上样
: 跑SDS PAGE胶啊？加热倒是能
: 溶解沉淀，但是刚刚吸起来，马上又沉淀了，加到上样孔都是沉淀。
: 会影响跑胶吗？怎么办呢？（不能加水稀释，因为样品体积就是30ul了，再加loading
: buffer，刚刚好）