bisulfite sequence# Biology - 生物学
i*u
1 楼
地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
c*s
2 楼
开玩笑而已，学生党员很多，而且都宣誓永远跟党走的，如果把这部分EB排除掉，其他
非党员的进度是不是快几倍？
LOL
非党员的进度是不是快几倍？
LOL
q*n
3 楼
大家好，知道这里有很多牛人，现在请教几个关于Bisulfite sequence 的问题。先谢
谢了。
现在我做的一个拟南芥突变体，图位克隆发现一个候选基因，该基因表达量下降，但
是测序后发现该基因序列没有任何突变，所以怀疑是否有甲基化修饰。
问题如下：
1，在甲基化测序时候，我应该测该基因得整个DNA区，还是只集中测该基因得启动子区？
2，我用MethPrimer软件设计引物时候， 大部分区域设计不出来合适的引物，我该如何
设计引物来覆盖整个基因？
3，部分区域虽然设计出了引物，但是PCR 效果很差， 很少有PCR产物。我该如何优化
PCR条件？
谢谢
谢了。
现在我做的一个拟南芥突变体，图位克隆发现一个候选基因，该基因表达量下降，但
是测序后发现该基因序列没有任何突变，所以怀疑是否有甲基化修饰。
问题如下：
1，在甲基化测序时候，我应该测该基因得整个DNA区，还是只集中测该基因得启动子区？
2，我用MethPrimer软件设计引物时候， 大部分区域设计不出来合适的引物，我该如何
设计引物来覆盖整个基因？
3，部分区域虽然设计出了引物，但是PCR 效果很差， 很少有PCR产物。我该如何优化
PCR条件？
谢谢
b*a
4 楼
恭喜！
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
O*U
5 楼
多？俺们一个班才仨还都在国内为社会主义墙角做贡献呢。
【在 c*******s 的大作中提到】
: 开玩笑而已，学生党员很多，而且都宣誓永远跟党走的，如果把这部分EB排除掉，其他
: 非党员的进度是不是快几倍？
: LOL
【在 c*******s 的大作中提到】
: 开玩笑而已，学生党员很多，而且都宣誓永远跟党走的，如果把这部分EB排除掉，其他
: 非党员的进度是不是快几倍？
: LOL
B*d
6 楼
Please do nested PCR to increase PCR yield.
Examine the promoters first.
You can design your own primers using the same principle from meth primer.
区？
【在 q*****n 的大作中提到】
: 大家好，知道这里有很多牛人，现在请教几个关于Bisulfite sequence 的问题。先谢
: 谢了。
: 现在我做的一个拟南芥突变体，图位克隆发现一个候选基因，该基因表达量下降，但
: 是测序后发现该基因序列没有任何突变，所以怀疑是否有甲基化修饰。
: 问题如下：
: 1，在甲基化测序时候，我应该测该基因得整个DNA区，还是只集中测该基因得启动子区？
: 2，我用MethPrimer软件设计引物时候， 大部分区域设计不出来合适的引物，我该如何
: 设计引物来覆盖整个基因？
: 3，部分区域虽然设计出了引物，但是PCR 效果很差， 很少有PCR产物。我该如何优化
: PCR条件？
Examine the promoters first.
You can design your own primers using the same principle from meth primer.
区？
【在 q*****n 的大作中提到】
: 大家好，知道这里有很多牛人，现在请教几个关于Bisulfite sequence 的问题。先谢
: 谢了。
: 现在我做的一个拟南芥突变体，图位克隆发现一个候选基因，该基因表达量下降，但
: 是测序后发现该基因序列没有任何突变，所以怀疑是否有甲基化修饰。
: 问题如下：
: 1，在甲基化测序时候，我应该测该基因得整个DNA区，还是只集中测该基因得启动子区？
: 2，我用MethPrimer软件设计引物时候， 大部分区域设计不出来合适的引物，我该如何
: 设计引物来覆盖整个基因？
: 3，部分区域虽然设计出了引物，但是PCR 效果很差， 很少有PCR产物。我该如何优化
: PCR条件？
z*r
7 楼
cong.
c*s
8 楼
你们班要求进步的不多啊？看报道现在经常都是突击入党，感觉入党人数很多啊。
【在 O***U 的大作中提到】
: 多？俺们一个班才仨还都在国内为社会主义墙角做贡献呢。
【在 O***U 的大作中提到】
: 多？俺们一个班才仨还都在国内为社会主义墙角做贡献呢。
e*r
9 楼
what kind of mutagen did you use? Why do you think there is something
changed in methylation?
changed in methylation?
D*M
10 楼
我面试完了回来也病了。唉，真是体力活啊
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
O*U
11 楼
你以为现在人傻啊，突击入党都是为社会主义墙角着想的。
【在 c*******s 的大作中提到】
: 你们班要求进步的不多啊？看报道现在经常都是突击入党，感觉入党人数很多啊。
【在 c*******s 的大作中提到】
: 你们班要求进步的不多啊？看报道现在经常都是突击入党，感觉入党人数很多啊。
s*s
12 楼
一般promotor先做，序列短点（200－400bp），长的不好批。
35－40cycle, 68C延伸，尽量用好酶，比如plantium hifi taq
区？
【在 q*****n 的大作中提到】
: 大家好，知道这里有很多牛人，现在请教几个关于Bisulfite sequence 的问题。先谢
: 谢了。
: 现在我做的一个拟南芥突变体，图位克隆发现一个候选基因，该基因表达量下降，但
: 是测序后发现该基因序列没有任何突变，所以怀疑是否有甲基化修饰。
: 问题如下：
: 1，在甲基化测序时候，我应该测该基因得整个DNA区，还是只集中测该基因得启动子区？
: 2，我用MethPrimer软件设计引物时候， 大部分区域设计不出来合适的引物，我该如何
: 设计引物来覆盖整个基因？
: 3，部分区域虽然设计出了引物，但是PCR 效果很差， 很少有PCR产物。我该如何优化
: PCR条件？
35－40cycle, 68C延伸，尽量用好酶，比如plantium hifi taq
区？
【在 q*****n 的大作中提到】
: 大家好，知道这里有很多牛人，现在请教几个关于Bisulfite sequence 的问题。先谢
: 谢了。
: 现在我做的一个拟南芥突变体，图位克隆发现一个候选基因，该基因表达量下降，但
: 是测序后发现该基因序列没有任何突变，所以怀疑是否有甲基化修饰。
: 问题如下：
: 1，在甲基化测序时候，我应该测该基因得整个DNA区，还是只集中测该基因得启动子区？
: 2，我用MethPrimer软件设计引物时候， 大部分区域设计不出来合适的引物，我该如何
: 设计引物来覆盖整个基因？
: 3，部分区域虽然设计出了引物，但是PCR 效果很差， 很少有PCR产物。我该如何优化
: PCR条件？
C*S
13 楼
感谢上帝,这个版终于可以消停了.
c*s
14 楼
那来美国的EB里面党员比例怎么都有个1/5吧，从我身边的小样本来看
【在 O***U 的大作中提到】
: 你以为现在人傻啊，突击入党都是为社会主义墙角着想的。
【在 O***U 的大作中提到】
: 你以为现在人傻啊，突击入党都是为社会主义墙角着想的。
q*n
15 楼
所以我需要重新订购一对引物？是否可以用同一引物作两次PCR？
【在 B*******d 的大作中提到】
: Please do nested PCR to increase PCR yield.
: Examine the promoters first.
: You can design your own primers using the same principle from meth primer.
:
: 区？
i*u
16 楼
找工作是个十分折磨人的事，发考题更是如此。
其间有一些神经质，抑郁症，多疑，甚至狂躁等症状，都感谢各位的包容和体谅！
彼此帮助，共同成长是我们的最终目标。
其间有一些神经质，抑郁症，多疑，甚至狂躁等症状，都感谢各位的包容和体谅！
彼此帮助，共同成长是我们的最终目标。
a*w
17 楼
如果再把河南人去掉岂不更快？
【在 c*******s 的大作中提到】
: 那来美国的EB里面党员比例怎么都有个1/5吧，从我身边的小样本来看
【在 c*******s 的大作中提到】
: 那来美国的EB里面党员比例怎么都有个1/5吧，从我身边的小样本来看
q*n
18 楼
突变体是EMS诱变得到的。
因为测序基因没有突变，所以我怀疑是甲基化，我并不知道其他可能原因。
【在 e*r 的大作中提到】
: what kind of mutagen did you use? Why do you think there is something
: changed in methylation?
因为测序基因没有突变，所以我怀疑是甲基化，我并不知道其他可能原因。
【在 e*r 的大作中提到】
: what kind of mutagen did you use? Why do you think there is something
: changed in methylation?
X*r
19 楼
期待大作
get well！
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
get well！
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
p*n
20 楼
填140/485的时候有问你是否河南人吗？
【在 a*w 的大作中提到】
: 如果再把河南人去掉岂不更快？
【在 a*w 的大作中提到】
: 如果再把河南人去掉岂不更快？
s*s
21 楼
你前后左右测序都测全了？
【在 q*****n 的大作中提到】
: 突变体是EMS诱变得到的。
: 因为测序基因没有突变，所以我怀疑是甲基化，我并不知道其他可能原因。
【在 q*****n 的大作中提到】
: 突变体是EMS诱变得到的。
: 因为测序基因没有突变，所以我怀疑是甲基化，我并不知道其他可能原因。
n*t
22 楼
一上飞机就病了是不是很有戏呢
j*g
23 楼
就算一半党员吧，你算算能快几倍？
就这么点本事，整天盯着中国人的小节。不如多花时间去盯着老印的fraud。那可是fbi
备了案底的。
【在 c*******s 的大作中提到】
: 开玩笑而已，学生党员很多，而且都宣誓永远跟党走的，如果把这部分EB排除掉，其他
: 非党员的进度是不是快几倍？
: LOL
就这么点本事，整天盯着中国人的小节。不如多花时间去盯着老印的fraud。那可是fbi
备了案底的。
【在 c*******s 的大作中提到】
: 开玩笑而已，学生党员很多，而且都宣誓永远跟党走的，如果把这部分EB排除掉，其他
: 非党员的进度是不是快几倍？
: LOL
i*m
24 楼
yes, you can. just higher primer dimer and non specificity
【在 q*****n 的大作中提到】
: 突变体是EMS诱变得到的。
: 因为测序基因没有突变，所以我怀疑是甲基化，我并不知道其他可能原因。
【在 q*****n 的大作中提到】
: 突变体是EMS诱变得到的。
: 因为测序基因没有突变，所以我怀疑是甲基化，我并不知道其他可能原因。
n*2
25 楼
恭喜恭喜
s*9
26 楼
许多党员配偶,父母,甚至兄弟姐妹也是共产党,要说名额追究起来废除的话,非党员的会
前进很多.如果美国出政策,把曾经拿绿卡的党员全部名额贡献出来给等排期的人,那么
也许所有非党员都立刻不用排期了.因为实在太多了.
这个就和中印捆绑一个道理,要是中国和印度平分名额,中国人高兴了,100%会说就应该
这样.而印度人会因此很多家庭多等几年,印度人会很愤怒.因为已经习惯了捆绑.
同样,照美国习惯,说了自己共党就可能被拒,这个几乎没什么例外的.要是美国严格追查
,那么很多家庭不能团圆(党员),许多家庭却也会尽早摆脱身份带来的麻烦(非党员).
这个世界没什么对错,都站在自己利益方面考虑.再说美国也没法查党员身份, 是个傻瓜
才承认呢.所以说美国问是党员,根本就没什么意义.
前进很多.如果美国出政策,把曾经拿绿卡的党员全部名额贡献出来给等排期的人,那么
也许所有非党员都立刻不用排期了.因为实在太多了.
这个就和中印捆绑一个道理,要是中国和印度平分名额,中国人高兴了,100%会说就应该
这样.而印度人会因此很多家庭多等几年,印度人会很愤怒.因为已经习惯了捆绑.
同样,照美国习惯,说了自己共党就可能被拒,这个几乎没什么例外的.要是美国严格追查
,那么很多家庭不能团圆(党员),许多家庭却也会尽早摆脱身份带来的麻烦(非党员).
这个世界没什么对错,都站在自己利益方面考虑.再说美国也没法查党员身份, 是个傻瓜
才承认呢.所以说美国问是党员,根本就没什么意义.
C*h
27 楼
How do you claim a reduced expression level of your candidate genes in your
mutant? by qPCR or another approach? what's the control?
What is the size between two flanking markers?
mutant? by qPCR or another approach? what's the control?
What is the size between two flanking markers?
j*o
28 楼
请楼主连载30天的面经，本版需要lz
【在 C*S 的大作中提到】
: 感谢上帝,这个版终于可以消停了.
【在 C*S 的大作中提到】
: 感谢上帝,这个版终于可以消停了.
a*v
29 楼
Re
fbi
【在 j*********g 的大作中提到】
: 就算一半党员吧，你算算能快几倍？
: 就这么点本事，整天盯着中国人的小节。不如多花时间去盯着老印的fraud。那可是fbi
: 备了案底的。
fbi
【在 j*********g 的大作中提到】
: 就算一半党员吧，你算算能快几倍？
: 就这么点本事，整天盯着中国人的小节。不如多花时间去盯着老印的fraud。那可是fbi
: 备了案底的。
q*n
30 楼
there are about 10 gene between two flanking marker. I did the RT-PCR and
qPCR to check the expression of candidate gene bewteen the mutant and wild
type.
your
【在 C*******h 的大作中提到】
: How do you claim a reduced expression level of your candidate genes in your
: mutant? by qPCR or another approach? what's the control?
: What is the size between two flanking markers?
qPCR to check the expression of candidate gene bewteen the mutant and wild
type.
your
【在 C*******h 的大作中提到】
: How do you claim a reduced expression level of your candidate genes in your
: mutant? by qPCR or another approach? what's the control?
: What is the size between two flanking markers?
y*a
31 楼
cong！
j*g
32 楼
这个条款本来就是明摆着的＂死法＂，没有人enforce。扯这个就是蛋疼。
当然不排除美国人以后秋后算账，再来一次麦卡锡主义，把这些绿卡全部取消。所以非
党员也不要不平衡。
【在 s********9 的大作中提到】
: 许多党员配偶,父母,甚至兄弟姐妹也是共产党,要说名额追究起来废除的话,非党员的会
: 前进很多.如果美国出政策,把曾经拿绿卡的党员全部名额贡献出来给等排期的人,那么
: 也许所有非党员都立刻不用排期了.因为实在太多了.
: 这个就和中印捆绑一个道理,要是中国和印度平分名额,中国人高兴了,100%会说就应该
: 这样.而印度人会因此很多家庭多等几年,印度人会很愤怒.因为已经习惯了捆绑.
: 同样,照美国习惯,说了自己共党就可能被拒,这个几乎没什么例外的.要是美国严格追查
: ,那么很多家庭不能团圆(党员),许多家庭却也会尽早摆脱身份带来的麻烦(非党员).
: 这个世界没什么对错,都站在自己利益方面考虑.再说美国也没法查党员身份, 是个傻瓜
: 才承认呢.所以说美国问是党员,根本就没什么意义.
当然不排除美国人以后秋后算账，再来一次麦卡锡主义，把这些绿卡全部取消。所以非
党员也不要不平衡。
【在 s********9 的大作中提到】
: 许多党员配偶,父母,甚至兄弟姐妹也是共产党,要说名额追究起来废除的话,非党员的会
: 前进很多.如果美国出政策,把曾经拿绿卡的党员全部名额贡献出来给等排期的人,那么
: 也许所有非党员都立刻不用排期了.因为实在太多了.
: 这个就和中印捆绑一个道理,要是中国和印度平分名额,中国人高兴了,100%会说就应该
: 这样.而印度人会因此很多家庭多等几年,印度人会很愤怒.因为已经习惯了捆绑.
: 同样,照美国习惯,说了自己共党就可能被拒,这个几乎没什么例外的.要是美国严格追查
: ,那么很多家庭不能团圆(党员),许多家庭却也会尽早摆脱身份带来的麻烦(非党员).
: 这个世界没什么对错,都站在自己利益方面考虑.再说美国也没法查党员身份, 是个傻瓜
: 才承认呢.所以说美国问是党员,根本就没什么意义.
q*n
33 楼
I sequence about 2kb before the ATG and 500bp downstream of stop codon
【在 s******s 的大作中提到】
: 你前后左右测序都测全了？
【在 s******s 的大作中提到】
: 你前后左右测序都测全了？
p*g
34 楼
cong
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
s*9
35 楼
美国的经济也需要这些党员人给添砖加瓦.要严格起来,还会有多少党员来美国当劳工,
买房,购物.所以,任何事物存在是有理由的.
美国不可能管得住.这个追查成本就会让移民局关门的.
买房,购物.所以,任何事物存在是有理由的.
美国不可能管得住.这个追查成本就会让移民局关门的.
C*h
36 楼
1) RT-PCR not quantitative
2) for q-PCR, you would need to have several proper controls at least two
genes as your reference
3) I would suggest you sequece the whole region since you have approximately
30 kb.
4) For certain region with low GC content, you can amplify 5-6 kb fragments
(it is should be easy in most cases) to overcome the PCR obstacles and then
design primers for sequencing.
Good luck
2) for q-PCR, you would need to have several proper controls at least two
genes as your reference
3) I would suggest you sequece the whole region since you have approximately
30 kb.
4) For certain region with low GC content, you can amplify 5-6 kb fragments
(it is should be easy in most cases) to overcome the PCR obstacles and then
design primers for sequencing.
Good luck
G*y
37 楼
Cong!
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
w*m
38 楼
yes. birth place including province and city
【在 p**********n 的大作中提到】
: 填140/485的时候有问你是否河南人吗？
【在 p**********n 的大作中提到】
: 填140/485的时候有问你是否河南人吗？
p*g
39 楼
con!!!
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
b*q
40 楼
cong! 希望早日痊愈并期待面经。
n*t
41 楼
我2月底从的，立刻买了机票回国爽了一个月，才回来不久。回到国内，第一大半个星
期在上海玩了，然后回父母家，之后一个多星期都每天晚饭后必定一个小时内睡着。短
短一个月，胖了10斤！然后象气球一样飘回了美帝。找工作真是烦心的体力活啊！
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
期在上海玩了，然后回父母家，之后一个多星期都每天晚饭后必定一个小时内睡着。短
短一个月，胖了10斤！然后象气球一样飘回了美帝。找工作真是烦心的体力活啊！
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
d*u
42 楼
恭喜lz终于搞定了，我面试完最后一个也大病一场，太耗体力了，我这个几年都没有感
冒的人居然被面试搞病了。期待你的面经。
冒的人居然被面试搞病了。期待你的面经。
C*S
43 楼
30天的面经? 岂不成了x经?
【在 j***o 的大作中提到】
: 请楼主连载30天的面经，本版需要lz
【在 j***o 的大作中提到】
: 请楼主连载30天的面经，本版需要lz
S*3
44 楼
cong!
l*u
45 楼
cong!!
羡慕啊。期待我自己也能拿到offer啊。呵呵。
羡慕啊。期待我自己也能拿到offer啊。呵呵。
a*d
46 楼
恭喜一下。
找工作的事情都安顿了，身体和心情自然会好起来。
【在 i******u 的大作中提到】
: 找工作是个十分折磨人的事，发考题更是如此。
: 其间有一些神经质，抑郁症，多疑，甚至狂躁等症状，都感谢各位的包容和体谅！
: 彼此帮助，共同成长是我们的最终目标。
找工作的事情都安顿了，身体和心情自然会好起来。
【在 i******u 的大作中提到】
: 找工作是个十分折磨人的事，发考题更是如此。
: 其间有一些神经质，抑郁症，多疑，甚至狂躁等症状，都感谢各位的包容和体谅！
: 彼此帮助，共同成长是我们的最终目标。
m*r
47 楼
恭喜
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器
【在 i******u 的大作中提到】
: 地方，工资，教学科研比例，funding压力还可以，就从了，没有negotiate 工资。
: 多谢各位同仁的支持和建议。本人无限感谢之至！
: 面试回来，大病一场，病好了之后写面经。
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