retrovirus转染human fibroblast 的问题. - 未名空间MITBBS历史存档

国际科技财经博客移民网络热点娱乐民生时事公众号

Redian新闻

>未名空间

>Biology - 生物学

retrovirus转染human fibroblast 的问题.

retrovirus转染human fibroblast 的问题.# Biology - 生物学

m*r2010-11-20 08:11

1 楼

妈妈是Ｊ１，　签证上写着两年限制。
女儿Ｊ2 跟过来读书然后拿到别的学校的ｏｆｆｅｒ，９月入学，想转Ｆ１，　妈妈和
女儿的Ｊ１和Ｊ２都在７
月份到期。
这种情况，女儿Ｊ２转Ｆ１会受两年限制吗？
麻烦明白人给确认一下

z*g2010-11-20 08:11

2 楼

人primary fibroblast用spinning的方法转染pBabe-puro病毒,感觉puromycin
selection之后,细胞不长了,形态似乎也发生了变化(空载体的对照也是).
有经验的大虾show一下你的经验.前后转了两次都一样,有点失望.

h*42010-11-20 08:11

3 楼

同样受影响赶紧一起Waiver了不然还得J2自己豁免就算Ｊ１回国也不行
我也在做Ｗａｉｖｅｒ现在　哎　真心烦

s*r2010-11-20 08:11

4 楼

你这个virus以前用过吗？肯定work吗？

人primary fibroblast用spinning的方法转染pBabe-puro病毒,感觉puromycin
selection之后,细胞不长了,形态似乎也发生了变化(空载体的对照也是).
有经验的大虾show一下你的经验.前后转了两次都一样,有点失望.

【在 z****g 的大作中提到】

: 人primary fibroblast用spinning的方法转染pBabe-puro病毒,感觉puromycin
: selection之后,细胞不长了,形态似乎也发生了变化(空载体的对照也是).
: 有经验的大虾show一下你的经验.前后转了两次都一样,有点失望.

z*g2010-11-20 08:11

5 楼

以前从来没做过retrovirus.virus是用cDNA克隆到pBabe-puro后, 1:1与pCL质粒一起转
到Phoenix细胞,两天和三天后收病毒,0.45uM filter过滤后感染fibroblast. 48小时候
开始puromycin selection, 感觉细胞长得很慢很慢 (对照也一样).
另外,construct transient expression很好.

【在 s******r 的大作中提到】

: 你这个virus以前用过吗？肯定work吗？
:
: 人primary fibroblast用spinning的方法转染pBabe-puro病毒,感觉puromycin
: selection之后,细胞不长了,形态似乎也发生了变化(空载体的对照也是).
: 有经验的大虾show一下你的经验.前后转了两次都一样,有点失望.

l*i2010-11-20 08:11

6 楼

想重编程？
嘿嘿，我貌似刚好听说过，如果感染之后传代，细胞不错。如果work，给我包子吧。
如果不work，只有建议你调整病毒滴度了。

【在 z****g 的大作中提到】

l*i2010-11-20 08:11

7 楼

还有Puro不建议持续加，先加一天，然后长长，再加。

【在 z****g 的大作中提到】

z*g2010-11-20 08:11

8 楼

不是做iPS. 是想overexpression一个protein后看表型. 因为primary human
fibroblast难转染,就转了两次.

【在 l*****i 的大作中提到】

: 想重编程？
: 嘿嘿，我貌似刚好听说过，如果感染之后传代，细胞不错。如果work，给我包子吧。
: 如果不work，只有建议你调整病毒滴度了。

l*i2010-11-20 08:11

9 楼

上LV，通常都有现成的。滴度更高，转染效率更高，表达量更高。
或者用Amaxa的fibroblast转染kit也行。

【在 z****g 的大作中提到】

: 不是做iPS. 是想overexpression一个protein后看表型. 因为primary human
: fibroblast难转染,就转了两次.

x*a2010-11-20 08:11

10 楼

同问一下，你的“LV”指的具体是什么？我最近也有可能要做病毒转染，但一点经验都
没有。貌似你是这方面的行家。能不能具体说下哪些公司提供的哪些东西比较好用？我
的细胞是 SY5Y，人肿瘤细胞，据说这种细胞不容易转染，所以要用病毒。

【在 l*****i 的大作中提到】

: 上LV，通常都有现成的。滴度更高，转染效率更高，表达量更高。
: 或者用Amaxa的fibroblast转染kit也行。

z*g2010-11-20 08:11

11 楼

LV应该是lentivirus。病毒感染除了primary cells 难做外，其他细胞系应该不难。

【在 x********a 的大作中提到】

: 同问一下，你的“LV”指的具体是什么？我最近也有可能要做病毒转染，但一点经验都
: 没有。貌似你是这方面的行家。能不能具体说下哪些公司提供的哪些东西比较好用？我
: 的细胞是 SY5Y，人肿瘤细胞，据说这种细胞不容易转染，所以要用病毒。

s*r2010-11-20 08:11

12 楼

那你可以先用普通的细胞，比如293，来试试你的病毒，
不用加drug，感染后，western先看看。

以前从来没做过retrovirus.virus是用cDNA克隆到pBabe-puro后, 1:1与pCL质粒一起转
到Phoenix细胞,两天和三天后收病毒,0.45uM filter过滤后感染fibroblast. 48小时候
开始puromycin selection, 感觉细胞长得很慢很慢 (对照也一样).
另外,construct transient expression很好.

【在 z****g 的大作中提到】

: 以前从来没做过retrovirus.virus是用cDNA克隆到pBabe-puro后, 1:1与pCL质粒一起转
: 到Phoenix细胞,两天和三天后收病毒,0.45uM filter过滤后感染fibroblast. 48小时候
: 开始puromycin selection, 感觉细胞长得很慢很慢 (对照也一样).
: 另外,construct transient expression很好.

z*g2010-11-20 08:11

13 楼

这个已经试过了，正常细胞感染表达都没问题。

【在 s******r 的大作中提到】

: 那你可以先用普通的细胞，比如293，来试试你的病毒，
: 不用加drug，感染后，western先看看。
:
: 以前从来没做过retrovirus.virus是用cDNA克隆到pBabe-puro后, 1:1与pCL质粒一起转
: 到Phoenix细胞,两天和三天后收病毒,0.45uM filter过滤后感染fibroblast. 48小时候
: 开始puromycin selection, 感觉细胞长得很慢很慢 (对照也一样).
: 另外,construct transient expression很好.