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关于做co-ip 制作核抽提物

关于做co-ip 制作核抽提物# Biology - 生物学

e*c2010-11-27 08:11

1 楼

我家宝宝快两岁了。准备送daycare. 我们已经看了一个daycare，还可以.但是这个离
家要半个小时，比较远。我们刚搬到nashua。对这个地方也不熟。请问Nashua有什么比
较好的daycare吗？价钱我们比较flexible,贵一点都可以。谢谢。

p*a2010-11-27 08:11

2 楼

就不说是漏洞了
但是很难解释
以量子计算机的能力，当下的世界是毫无秘密可言的----连未来都能预测，何况各国的
内部情报！
那么GTC早就凌驾各国之上，早就是球长了
还能允许你各个反抗行动的酝酿和组织阿？
比方非洲小国自己建5个大地堡，肯定透明阿！

m*52010-11-27 08:11

3 楼

我怀疑两个蛋白的相互作用只在核成分里发生，细胞质成分会抑制其相互作用，于是计
划用核抽提物做co-ip
发上根据别人文章里方法设计的protocol，请有经验的同僚帮忙看看有没问题？
1, 10 mm 盘NIH 3T3 细胞，用 500 ul 10mM hepes, 10mM NAcl冰上重悬溶胀
2，半小时后过针头，理论上说此时只有核完整，大多数细胞质都裂开
3，500G低速离心收核
4，等volumn高盐高甘油buffer吹吸
5，再加等总体积的低盐buffer降盐浓度至140mM，降NP-40至0.5%
6，常规co-ip步骤
大家说这个protocol会有大问题么？这个相互作用难做，之前曾经有这个protocol做出
过很强的相互作用，但不说明protocol没问题

s*s2010-11-27 08:11

4 楼

人家预测的是虚拟现实里面的未来，不是现实里面的。
量子计算机自己就在现实里，怎么可能把所有东西都计算进去

【在 p********a 的大作中提到】

: 就不说是漏洞了
: 但是很难解释
: 以量子计算机的能力，当下的世界是毫无秘密可言的----连未来都能预测，何况各国的
: 内部情报！
: 那么GTC早就凌驾各国之上，早就是球长了
: 还能允许你各个反抗行动的酝酿和组织阿？
: 比方非洲小国自己建5个大地堡，肯定透明阿！

m*52010-11-27 08:11

5 楼

自己顶一下……

n*m2010-11-27 08:11

6 楼

根据设定，量子计算机是可以模拟现实的。只是量子计算机里无法拿所有的现实人格来
进行模拟，所以无法用来预测现实里的未来。

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

【在 s******s 的大作中提到】

: 人家预测的是虚拟现实里面的未来，不是现实里面的。
: 量子计算机自己就在现实里，怎么可能把所有东西都计算进去

m*52010-11-27 08:11

7 楼

急求啊急求啊…… 给个中肯评价当thanksgiving gift吧……

p*a2010-11-27 08:11

8 楼

1.来末日都预测到了，还不能根据现实情况推测出中非的地堡？
2.来现在游戏也未必就不是现实世界啊。

【在 n*****m 的大作中提到】

: 根据设定，量子计算机是可以模拟现实的。只是量子计算机里无法拿所有的现实人格来
: 进行模拟，所以无法用来预测现实里的未来。
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8

w*a2010-11-27 08:11

9 楼

建议测测细胞核里没有的maker，看看是不是完全是核提取物。

n*m2010-11-27 08:11

10 楼

能预测末日并不一定能推测出中非的地堡
末日预测应该是各种线索的推演，而不是现实的全面模拟
细节可以出入，但结局却是一定
背叛者貌似就是试图在细节的不可控上，来影响最后的结果
游戏与现实在量子计算机前是可以混淆吧
但是都需要遵循一定的基本设定的

【在 p********a 的大作中提到】

: 1.来末日都预测到了，还不能根据现实情况推测出中非的地堡？
: 2.来现在游戏也未必就不是现实世界啊。

m*52010-11-27 08:11

11 楼

恩，一般是用tublin作cytoplasmic marker
从方法上说这样没问题么？另外，核能裂完全么？

【在 w***a 的大作中提到】

: 建议测测细胞核里没有的maker，看看是不是完全是核提取物。

p*i2010-11-27 08:11

12 楼

第二步后在显微镜下看到“理论上说此时只有核完整，大多数细胞质都裂开”了吗？

【在 m******5 的大作中提到】

: 我怀疑两个蛋白的相互作用只在核成分里发生，细胞质成分会抑制其相互作用，于是计
: 划用核抽提物做co-ip
: 发上根据别人文章里方法设计的protocol，请有经验的同僚帮忙看看有没问题？
: 1, 10 mm 盘NIH 3T3 细胞，用 500 ul 10mM hepes, 10mM NAcl冰上重悬溶胀
: 2，半小时后过针头，理论上说此时只有核完整，大多数细胞质都裂开
: 3，500G低速离心收核
: 4，等volumn高盐高甘油buffer吹吸
: 5，再加等总体积的低盐buffer降盐浓度至140mM，降NP-40至0.5%
: 6，常规co-ip步骤
: 大家说这个protocol会有大问题么？这个相互作用难做，之前曾经有这个protocol做出

m*52010-11-27 08:11

13 楼

确实是这样……其实即使是用常规裂解方法在显微镜下看也还是有很多核是完整的
这个相互作用又太脆了我连超声都不敢用……

【在 p******i 的大作中提到】

: 第二步后在显微镜下看到“理论上说此时只有核完整，大多数细胞质都裂开”了吗？

s*r2010-11-27 08:11

14 楼

Protocol看上去没有什么问题，
这么说吧，相互做用强弱也只是相对的，
只要有合适的control，就能说明问题，
Just do it.

【在 m******5 的大作中提到】

a*g2010-11-27 08:11

15 楼

你的初始细胞量太少，最后只会拿到一点点和抽提物，
更具我的经验，你至少要5-6盘抽nuclear extract.
另外，小规模的ne extraction我推荐用0.1% triton x-100代替
针头破核，会减少很多损失

【在 m******5 的大作中提到】

m*52010-11-27 08:11

16 楼

恩，主要是这个相互作用才刚开始做，还没有很合适的negative control
非常感谢！

【在 s******r 的大作中提到】

: Protocol看上去没有什么问题，
: 这么说吧，相互做用强弱也只是相对的，
: 只要有合适的control，就能说明问题，
: Just do it.

m*52010-11-27 08:11

17 楼

谢谢！

【在 a******g 的大作中提到】

: 你的初始细胞量太少，最后只会拿到一点点和抽提物，
: 更具我的经验，你至少要5-6盘抽nuclear extract.
: 另外，小规模的ne extraction我推荐用0.1% triton x-100代替
: 针头破核，会减少很多损失

m*52010-11-27 08:11

18 楼

是建议用针头破核还是不建议？看糊涂了
另外有一个流行的说法是triton X-100会洗掉很多弱相互作用。另外可能会打散
chromosome制造一些问题

【在 a******g 的大作中提到】

g*52010-11-27 08:11

19 楼

mark