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how to seperate DNA and protein
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how to seperate DNA and protein# Biology - 生物学
Z*r
1
lz面临跟下面帖子同样的问题(由于140批准,只能境内转换,不能回国面签;据说可
以找州议员加急这个过程):
http://www.1point3acres.com/bbs/thread-158390-1-1.html
已经联系了原帖的lz,并没有得到回复,想问有没有哪位熟悉这个过程的?求交流。谢
谢!
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s*s
2
要分离DNA和蛋白。DNA去做seq, 蛋白去做MS Spec. 大家有什么好主意?
我就想到了Trizol, 不过貌似Trizol下来的蛋白很不好溶,做Ms Spec质量
很不好。有没有什么commercial的kit? 最好column based比较容易做
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c*r
3
好像Qiagen的RNA提取的试剂盒就可以,隐约记得说明书上有说把RNA binding之后的溶
液可以留着做蛋白提取。
Appendix F: Acetone Precipitation of Protein from Buffer RLT Lysates 72
http://www.google.com/url?sa=t&source=web&cd=1&sqi=2&ved=0CBMQF
不过“The precipitated, denatured protein is suitable for applications such
as SDS-PAGE, western blotting, and 2D gel electrophoresis.”不知道是否时候MS
。但PAGE之后还是可以MS的吧。

【在 s******s 的大作中提到】
: 要分离DNA和蛋白。DNA去做seq, 蛋白去做MS Spec. 大家有什么好主意?
: 我就想到了Trizol, 不过貌似Trizol下来的蛋白很不好溶,做Ms Spec质量
: 很不好。有没有什么commercial的kit? 最好column based比较容易做

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c*r
4
哦。。。没看清你说的是DNA。可能其它的DNA提取的kit也有类似的吧。。。^_^

【在 s******s 的大作中提到】
: 要分离DNA和蛋白。DNA去做seq, 蛋白去做MS Spec. 大家有什么好主意?
: 我就想到了Trizol, 不过貌似Trizol下来的蛋白很不好溶,做Ms Spec质量
: 很不好。有没有什么commercial的kit? 最好column based比较容易做

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Z*5
5
多搞点样品,分成两份。
一份拿DNA酶处理后,(跑双向分开?),做MS spec
另一份可以考虑按照ChIP 的protocol,用蛋白酶,RNase等处理,收集DNA。
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c*y
6
我上次做pull down,提完RNA之后,把第一步加trizol的EP管中的沉淀吸取出来,用氯
仿洗了下(不能完全去除酚),然后加入6M urea溶液,含些许秀芬兰,震荡,能把中
间层白色沉淀溶解,然后吸取上清,SDS胶能够检测到拉下来的蛋白(质谱结果等待中)
你可以参考下这个方法
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