K*g
2 楼
为什么张峰实验室的293细胞never reach over 75 % confluence
有什么说法吗？谢谢
有什么说法吗？谢谢
g*c
3 楼
什么情况?
K*g
4 楼
还有，构建了几个gRNA质粒，U6 Promoter 第一个不是G，要重新构建吗？THANKS
r*8
5 楼
沙活动啊
C*h
6 楼
转录不了。
【在 K********g 的大作中提到】
: 还有，构建了几个gRNA质粒，U6 Promoter 第一个不是G，要重新构建吗？THANKS
【在 K********g 的大作中提到】
: 还有，构建了几个gRNA质粒，U6 Promoter 第一个不是G，要重新构建吗？THANKS
s*c
7 楼
我也不知道，买了两张vanilla，两张paypal，居然系统显示要24小时内才能激活
s*s
8 楼
不知道crispr啥protocol，以前实验室产病毒，293T也是不能confluent
【在 K********g 的大作中提到】
: 为什么张峰实验室的293细胞never reach over 75 % confluence
: 有什么说法吗？谢谢
【在 K********g 的大作中提到】
: 为什么张峰实验室的293细胞never reach over 75 % confluence
: 有什么说法吗？谢谢
s*y
9 楼
前一阵子出现过类似情况，他家系统有问题。。。
c*r
10 楼
应该没问题。U6 起始可用A或G。如果第一个不是A或G，则从其后第一个A货G起始，这
样你的gRNA会缺失几个碱基。而gRNA缺失三个碱基并不影响功能，反而提高专一性。
关于U6 promoter的起始，可参考： http://www.nature.com/mtna/journal/v3/n5/full/mtna201412a.html
【在 K********g 的大作中提到】
: 还有，构建了几个gRNA质粒，U6 Promoter 第一个不是G，要重新构建吗？THANKS
样你的gRNA会缺失几个碱基。而gRNA缺失三个碱基并不影响功能，反而提高专一性。
关于U6 promoter的起始，可参考： http://www.nature.com/mtna/journal/v3/n5/full/mtna201412a.html
【在 K********g 的大作中提到】
: 还有，构建了几个gRNA质粒，U6 Promoter 第一个不是G，要重新构建吗？THANKS
K*g
11 楼
谢谢大家的回复！先转看看了。
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