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求助有关EMSA 的问题

求助有关EMSA 的问题# Biology - 生物学

A*a2011-01-26 08:01

1 楼

USCIS 5月11号刚刚发布的那条对于学生签证和访问学者签证计算非法逗留天数的新规
，很多朋友都应该看过了。去USCIS官网上看了下原文，其中一段是这样说的：
Individuals in F, J, or M status who fail to maintain their status on or
after Aug. 9, 2018, will start accruing unlawful presence on the earliest of
any of the following:
· The day after they no longer pursue the course of study or the authorized
activity, or the day after they engage in an unauthorized activity;
· The day after completing the course of study or program, including any
authorized practical training plus any authorized grace period;
· The day after the I-94 expires; or
· The day after an immigration judge, or in certain cases, the BIA, orders
them excluded, deported, or removed (whether or not the decision is appealed)
说8月9号之后没能维持合法身份的F, J, M签证持有人，将会从以下几种情况中最早发
生的情况，从那天开始累计非法逗留天数。第一种情况是从不再进行学业或被授权的活
动那天开始累计非法逗留天数。比如J1, DS2019表上结束的那天的第二天，一般就是上
面那4种情况中最先发生的。那一直以来J1的30天的grace period还会有吗？DS2019表
失效后的30天内，在米国逗留或申请转别的身份，还是合法的吗？

s*t2011-01-26 08:01

2 楼

整的真的好像是电影有很强的煽动性
应该不是电影公司愿意看到的

i*r2011-01-26 08:01

3 楼

李察的表情柔和了一些。
片刻之后，无定结束了这一吻，平静地看着李察，说：“我这不是爱你，也不是感
激。这只是因为，如果你活着，我会觉得这个世界还有一点意思。当然，如果苏海伦也
活着，那就更好了。”
李察看着无定，此刻的她美丽而宁定，再无那让人恐惧戒备的疯狂。但是她眼中的
火焰依然存在，她依旧是按自己的方式活着，绝不会动摇妥协的无定陛下。
李察叹了口气，说：“但是我还要去找老师，另外如果真能把她找回来的话，那么
我还要再去一次黑暗地域。你应该知道，无论是哪件事，我活着回来的可能性都不大。”
无定沉默了片刻，忽然说：“把苏海伦救回来，然后你就可以去死了！”
李察顿时哭笑不得，说：“先不说这个，你先帮我把这身伤弄好啊！”
“我只会杀人，不会治伤。”
李察气得反而笑了，怒道：“我当然没指望你会治伤，伟大的女皇陛下。但你能把
我放到法力池里吗？这点常识难道都忘了？”
无定露出恍然的表情，提起李察跃到法力池旁，双手向前平伸，然后一松，就把李
察扑通一声扔到了池水里。
“你！......”李察一声怒吼没有叫完，就沉入池底，水面上只剩下一串水泡，纪
录着他不甘的怒吼。
再怎么不甘，现在手脚无力的李察，也没办法浮出水面继续未完的怒吼。他只能躺
在池底，怒目而视。
片刻之后，法力池中突然水波激荡，李察霍然冲出水面。他长长地出了一口气，然
后愤怒地望向无定，刚要吼几句什么，突然之间就呆住了。
无定安静地站在那里，紫色的双眸中满是宁静，　绝美的小脸上带着一缕茫然。这
一刻，她就象迷途的少女，全然不知自己的命运之路将要通向何方。
看到她这个样子，李察的怒吼全然出不了口，最后只得悻悻地说：“我还真没想到
你会变成这个样子。”
无定淡淡地一笑，说：“你想不到的事情还多着呢？要不要来做一次？”
“什......什么？”李察几乎不相信自己的耳朵。上一次还可以说是双方强大身体
本能的原因，但现在两个人可都是非常清醒的。
“要不要来做？”无定又重复了一遍。
李察反而皱眉，疑惑问道：“你不会又想死了吧？”
“当然不是。我是在寻找自己还活着的证明。嗯，那个，李察殿下，如果你再不过
来的话，我就要过去了。到时候你可别怪我下手强/奸。”
李察脸色顿时变了。他此刻只是刚刚恢复了行动能力，根本没有战斗能力，在无定
面前完全就是没有还手之力。
这位女皇陛下说得出做得到，李察在苏海伦那里的遭遇，可不想在无定这里再多体
验一次。更何况无定根本就是他的手下败将，无论身为强者还是身为男人的尊严，李察
又岂能容她翻身！
李察一下从法力池中跃出，大步来到无定面前，粗暴地把她一下压倒，然后就开始
镇压！
镇压很顺利。
预想中的逆袭并没有出现，这让李察也相当诧异。毕竟他现在可以算是毫无还手能
力，无定一旦恶趣味上来，李察就只有承受的份。
当一切结束后，无定慢慢坐起，抱着自己的双膝，怔怔地看着半位面外的无尽虚空。
“怎么了？”李察忍不住问。
无定转头看着李察，忽然绽放出一个美丽的笑容，说：“谢谢你，我现在觉得继续
活着还是有意义的。”
对这个回答李察有些愕然，片刻后才说：“好吧，那接受你的谢意。只不过，我们
这一次算是什么？总不能说是我的魅力大吧，呵呵，哈哈！”
无定浅浅一笑，说：“不，是你运气好。”
“运气......好吧！”李察接受了这个事实。
无定又望向虚空，宁定地说：“你变得很有活力，是有苏海伦的下落了吗？”
李察苦笑，说：“只是有一点点线索。我已经知道那条通道通向哪里了......你相
信世界还有暗面吗？”
李察和无定回来的时间出乎大多数人的意料，其中也包括了一些隐藏在暗中的人。
他们几乎难以相信前往永恒漩涡深处的探索，居然前后只花了几个月的时间就能够回来
。或许真正的答案就是李察和无定根本没能深入永恒漩涡，半路上就知难而退了。
李察自己当然不会向任何人解释此次的行程，他和无定分开后就回到了阿克蒙德的
新浮岛。浮岛上已经修建得初具稚形，各种建筑和配套设施基本建设完毕，只剩下些内
装修的工作。
在经历过最初的尴尬期后，现在神圣同盟的贵族又再次挺起了腰杆，特别是在其它
两大帝国的贵族面前。
李察这次的血路征途虽然用一记记响亮的耳光把浮岛豪门打得晕头转向，但是他肯
回归浮世德，也就意味着重新回到了神圣同盟。而且李察又击败了无定女皇，这意味着
神圣同盟又有了两位超级强者。至少在超级强者的方面又可以和其它两大帝国平起平坐
了。
况且以前的苏海伦殿下最多只能算是半个，因为这位神圣同盟的守护者只是挂名而
已，后来更是和无定陛下不睦，能给予神圣同盟多大支持还真不好说。而李察却不同，
他毕竟也是浮岛豪门家主，虽然这浮岛的位置高的有些吓人，并且他貌似也和无定不睦。
然而，一男一女之间的不睦有很多种方式可以化解，而两个女人之间的矛盾却有可
能持续一生。
所以神圣同盟的贵族们乐观地认为，李察和无定陛下之间的问题不过是‘小矛盾’
。而且李察击败无定，亦让众多男性扬眉吐气，颇有种自己也沾了荣光的感觉。
诺兰德数个月过去了，阿克蒙德的变化还是相当的大。
得到李察授权指定的无面已经成功地将巨龙山谷与初始之地从法罗里分割出来，变
成了浮岛的特殊领地。前往特殊领地的传送门被设在黑玫瑰古堡，也可以从浮岛进出。
浮岛权限绑定倒也有好处，至少熄了某些不自量力家伙的心，让他们不至于干出哄
抢阿克蒙德浮岛的蠢事来。
积分兑换系统依旧在运转，不过李察上一次留下的存货，包括构装和装备，几乎消
耗殆尽。好在珞琪的构装工坊相当给力，源源不断地生产蛮荒系列套装，这才满足了兑
换需求。
米达伦战斗版已经放出了整整六个部件，其中铁盾收集到了三个，另外三个则分散
在其它强者手里。另外李察留存的那件魔动武装居然也被一名传奇法师兑换走了。
兑换品的大量消耗，自然就意味着更多的财富进了阿克蒙德的库房。当看到帐面上
整整五十个顶级祭品的结余时，李察再次不敢相信自己的眼睛！
有了这批财富，李察忽然觉得，自己的许多构想就能够实现了。其中最重要的构想
，自然是去寻找苏海伦的下落。
另一个小小的惊喜，是阿克蒙德为学者法师们付出的近三千万金币赏金。巨额赏金
的激励确实无以伦比，许多线索蜂拥而来，其中有不少最终被证明有效，从而支付了赏
金。
学者法师们也是人，也有弱点，并不是所有学者法师都隐藏得天衣无缝、滴水不漏
。当真正的大众行动起来时，不少学者法师就象暴露在阳光下的蠕虫，一一现了踪迹。
最大的一笔赏金居然来自千年帝国。他们移送过来的一具尸体，最终被证明是所罗
门堡议会中的一员，这是学者法师的最高层级。光是为了这具尸体，无面就拍板支付了
一千五百万金币，而千年帝国送来的其它九名学者法师，加在一起也只值三百万金币。
当李察看到这些数字时，就知道已经对学者法师们构成了沉重的打击。但是他可不
会就此满足，既然已经打击了学者法师，证明了这条途径的有效，那就不妨打击得更加
凶猛些。
李察放下报告，将奥拉尔召唤到书房，说：“去通知和我们有合作的组织，从现在
开始，对学者法师们的悬赏金额提高一倍！”
“是，主人！”奥拉尔眼中掠过残忍且兴奋的神色，领命而去。
最后一份报告，则是无面给李察列出来的‘工作安排’。
在回到诺兰德的日子里，李察必须完成至少三件米达伦战斗版的套装，以及随便一
件五阶构装，再去永恒龙殿献祭，利用他的称号特权弄一批传奇和准传奇装备回来。
完成了这些，无面就可以放李察去干些自己想要做的事。但是假如说李察打算长期
离开，例如再去一次永恒漩涡，那么就得把上述工作量翻上三倍，然后才可以离开。
对于无面和指令没什么差别的要求，李察颇为无奈。可是另一方面，能够有这样的
人帮助自己，确实也是一种幸运。
李察提笔迅速列出一份清单，吩咐侍从法师把清单上的材料全部准备好，然后装箱
运到法罗。他准备完成献祭之后，就前往法罗完成应做的构装。
处理完这些杂事，李察又来到了城堡地下的魔法大厅，接通了与圣马丁的联系。

u*r2011-01-26 08:01

4 楼

条件摸的还可以，背景噪音几乎没有很清晰，free probe也很清晰
1.可是在做竞争实验时，加入400x的unlabelled probe （与biotin labelled probe
探针一样）就是看不出binding complex 减少的迹象， positive control 都很好。
我用的是 LIGHTSHIFT 试剂盒。
请问是不是 nuclear extract 太多了，过量了，导致足够的factor 剩下后给label 的
probe binding。
2. 形成的binding complex 总是跑不下来，一直就是在最上面，担心都没有地方做
super shift 了。
谢谢先

P*e2011-01-26 08:01

5 楼

我靠这次真比dark knight还疯狂了。。。

【在 s****t 的大作中提到】

: 整的真的好像是电影有很强的煽动性
: 应该不是电影公司愿意看到的

q*i2011-01-26 08:01

6 楼

性交包治百病了，什么月经不调，性冷淡之类的。

。”

【在 i****r 的大作中提到】

: 李察的表情柔和了一些。
: 片刻之后，无定结束了这一吻，平静地看着李察，说：“我这不是爱你，也不是感
: 激。这只是因为，如果你活着，我会觉得这个世界还有一点意思。当然，如果苏海伦也
: 活着，那就更好了。”
: 李察看着无定，此刻的她美丽而宁定，再无那让人恐惧戒备的疯狂。但是她眼中的
: 火焰依然存在，她依旧是按自己的方式活着，绝不会动摇妥协的无定陛下。
: 李察叹了口气，说：“但是我还要去找老师，另外如果真能把她找回来的话，那么
: 我还要再去一次黑暗地域。你应该知道，无论是哪件事，我活着回来的可能性都不大。”
: 无定沉默了片刻，忽然说：“把苏海伦救回来，然后你就可以去死了！”
: 李察顿时哭笑不得，说：“先不说这个，你先帮我把这身伤弄好啊！”

u*r2011-01-26 08:01

7 楼

刚才考古了本版
发现有人说可能是nonspecifec binding（不能被unlabeled oligo竞争掉）。
我有点不理解，如果在没有nuclear extract 里面没有看到这样的条带，加了过后才看
到特定的条带，这个算是nonspecifec binding吗？在反应体系中只有这个labelled
的probe只要能binding 然后显色的不就是specific 的吗？

【在 u*********r 的大作中提到】

: 条件摸的还可以，背景噪音几乎没有很清晰，free probe也很清晰
: 1.可是在做竞争实验时，加入400x的unlabelled probe （与biotin labelled probe
: 探针一样）就是看不出binding complex 减少的迹象， positive control 都很好。
: 我用的是 LIGHTSHIFT 试剂盒。
: 请问是不是 nuclear extract 太多了，过量了，导致足够的factor 剩下后给label 的
: probe binding。
: 2. 形成的binding complex 总是跑不下来，一直就是在最上面，担心都没有地方做
: super shift 了。
: 谢谢先

c*i2011-01-26 08:01

8 楼

我们这完全没有受到影响，今天早上还有两个校车载着小朋友到电影院看电影。

x*o2011-01-26 08:01

9 楼

无定那来的月经？来了怎么办？

【在 q****i 的大作中提到】

: 性交包治百病了，什么月经不调，性冷淡之类的。
:
: 。”

w*r2011-01-26 08:01

10 楼

根据你的描述，难道是有东西和biotin结合了？

【在 u*********r 的大作中提到】

: 刚才考古了本版
: 发现有人说可能是nonspecifec binding（不能被unlabeled oligo竞争掉）。
: 我有点不理解，如果在没有nuclear extract 里面没有看到这样的条带，加了过后才看
: 到特定的条带，这个算是nonspecifec binding吗？在反应体系中只有这个labelled
: 的probe只要能binding 然后显色的不就是specific 的吗？

h*m2011-01-26 08:01

11 楼

我想主要不是因为安全原因，
而是在出了事的情况下还搞娱乐性的宣传会显得没人性。

【在 s****t 的大作中提到】

: 整的真的好像是电影有很强的煽动性
: 应该不是电影公司愿意看到的

c*n2011-01-26 08:01

12 楼

可怜的水花，李察上的女人越来越高级，和刚德凑合下算了。

。”

【在 i****r 的大作中提到】

u*r2011-01-26 08:01

13 楼

现在有点confused，所谓的nonspecifec binding 是指什么？
指probe 和非target protein binding？那么加进unbabelled 也应该有一定的竞争吧
。因为他们binding机会是一样的对于那个非target protein

【在 w********r 的大作中提到】

: 根据你的描述，难道是有东西和biotin结合了？

s*t2011-01-26 08:01

14 楼

嗯，被新闻骗了，没看见“式”，以为是巴黎全城取消电影首映
这帮人怎么跑到法国去办首映式，蝙蝠侠在法国很火？

【在 h*******m 的大作中提到】

: 我想主要不是因为安全原因，
: 而是在出了事的情况下还搞娱乐性的宣传会显得没人性。

g*g2011-01-26 08:01

15 楼

竞争实验中你是先加入竞争probe还是先加入蛋白？如果是后者，容易理解，有可能是
结合不可逆。

r*y2011-01-26 08:01

16 楼

大片经常是满世界跑着做宣传，特别是巴黎，伦敦这种大城市。
说是首映式，也就是主创主演露个脸

【在 s****t 的大作中提到】

: 嗯，被新闻骗了，没看见“式”，以为是巴黎全城取消电影首映
: 这帮人怎么跑到法国去办首映式，蝙蝠侠在法国很火？

u*r2011-01-26 08:01

17 楼

我一般都是先是做一个bind buffer的 master 包含了各种东西想K,Mg，NP40,POLYDiDg
... 然后就是加入竞争probe 再加nuclear extract，在rt先反应10min 最后加
labelled probe。

【在 g*******g 的大作中提到】

: 竞争实验中你是先加入竞争probe还是先加入蛋白？如果是后者，容易理解，有可能是
: 结合不可逆。