求助：关于在大肠杆菌中表达全长真核蛋白 - 未名空间MITBBS历史存档

求助：关于在大肠杆菌中表达全长真核蛋白# Biology - 生物学

W*92011-01-26 08:01

1 楼

我和凤凰男离婚
几个方面的问题
1 他卫生观念差，生活质量低。所以总是嫌我爱干净爱打扮。
2，他家庭对他的希望很大觉得他过的好了理所应当该对家里的事负责。
3 大男子主义强。明知道自己不对还要显示自己的大男子主义。觉得听老婆的话是耻辱。
4，太爱面子。一家人都是喜欢显摆。逢年过节婚嫁丧娶。家里都指望我们回去显排场。
5，公婆爱管事。小两口生气他妈妈就挑唆儿子。
6 控制欲强，即使我对他爸妈兄妹没的说，花钱很大度。但是他还偷偷的给家里人钱
。也尝试去掌管家里的财务，目的是即使家里花了钱也不需要让我知道。不需要承我的
好。最后过不好，离了。没吵没闹。因为家里钱都是我挣的。因为我满足他提出的所
有条件。经济上也不和他计较

c*k2011-01-26 08:01

2 楼

至于是哪部分，我也不知道……
http://9to5mac.com/2011/10/15/apple-already-selling-unlocked-co

w*s2011-01-26 08:01

3 楼

【以下文字转载自 Linux 讨论区】
发信人: wds (大盘5000不是梦), 信区: Linux
标题: pandas.DataReader() 的return type不是DataFrame ?
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Feb 6 17:35:19 2016, 美东)
http://pandas.pydata.org/pandas-docs/stable/remote_data.html
return type不是DataFrame ?
尼玛哪里可以查到？

w*e2011-01-26 08:01

4 楼

想在大肠杆菌中表达一个N末端GST融合的真核蛋白。但是表达出的都是C端缺失的蛋白
。因为用GST antibody 可以检测到非全长的蛋白条带.请问如何改善条件才能获得全
长蛋白？多谢！

W*92011-01-26 08:01

5 楼

离

n*w2011-01-26 08:01

6 楼

just to be curious, how do you know the c-terminus is missing? Using
antibody targeting c-terminus?
Have you checked the sequence to see it's in the right open reading frame?
Is that the bacteria have some protease to chop the protein off?
Alternatively, you can turn to baculovirus expression. But you need to
change the whole system in that case.
I am doing the same thing and being frustrated....

W*92011-01-26 08:01

7 楼

我的信箱已经满了。请好心的同路人让我冷静一段时间，原谅我不能现在就一一回复。
但非常感谢你们的好意。

辱。
场。

【在 W***9 的大作中提到】

: 我和凤凰男离婚
: 几个方面的问题
: 1 他卫生观念差，生活质量低。所以总是嫌我爱干净爱打扮。
: 2，他家庭对他的希望很大觉得他过的好了理所应当该对家里的事负责。
: 3 大男子主义强。明知道自己不对还要显示自己的大男子主义。觉得听老婆的话是耻辱。
: 4，太爱面子。一家人都是喜欢显摆。逢年过节婚嫁丧娶。家里都指望我们回去显排场。
: 5，公婆爱管事。小两口生气他妈妈就挑唆儿子。
: 6 控制欲强，即使我对他爸妈兄妹没的说，花钱很大度。但是他还偷偷的给家里人钱
: 。也尝试去掌管家里的财务，目的是即使家里花了钱也不需要让我知道。不需要承我的
: 好。最后过不好，离了。没吵没闹。因为家里钱都是我挣的。因为我满足他提出的所

w*e2011-01-26 08:01

8 楼

It is a N-terminal GST fused protein. I did western using GST antibody and
detected a smaller size band.

【在 n***w 的大作中提到】

: just to be curious, how do you know the c-terminus is missing? Using
: antibody targeting c-terminus?
: Have you checked the sequence to see it's in the right open reading frame?
: Is that the bacteria have some protease to chop the protein off?
: Alternatively, you can turn to baculovirus expression. But you need to
: change the whole system in that case.
: I am doing the same thing and being frustrated....

p*r2011-01-26 08:01

9 楼

上网骂老婆老公，前妻前夫，前男女朋友的
都是滥货，100%

C*e2011-01-26 08:01

10 楼

GST表达的蛋白好像挺容易产生GST only的，
25 kDa左右
你有试过别的tag么？
比如N-his
或者C-his

and

【在 w*********e 的大作中提到】

: It is a N-terminal GST fused protein. I did western using GST antibody and
: detected a smaller size band.

h*e2011-01-26 08:01

11 楼

为什么这个帖子发在这个版上？？？

w*e2011-01-26 08:01

12 楼

The band is bigger than GST. It is around half size of the full lengh
protein. I am thinking that probably the sequence of the protein is not
easy for bacteria to translate. I am wondering if there are some conditions
could overcome this problem.

【在 C*******e 的大作中提到】

: GST表达的蛋白好像挺容易产生GST only的，
: 25 kDa左右
: 你有试过别的tag么？
: 比如N-his
: 或者C-his
:
: and

o*o2011-01-26 08:01

13 楼

你们摩门教的？

属实，很客观，我家有一枚

n*w2011-01-26 08:01

14 楼

If you use pGEX2T vector, then the GST is about 29kDa. If your observed
differences were within the 3-4 kDa range, then it may be fine.
Also, you can use some online tools to see if your proteins have rare amino
acids or not. Codon bias may exist.

W*92011-01-26 08:01

15 楼

why not?

【在 h*******e 的大作中提到】

: 为什么这个帖子发在这个版上？？？

n*w2011-01-26 08:01

16 楼

If codon bias does exist, as someone here suggested, you can use Rosetta-gami series competent cells or
other strains that are capable to translate rare amino acids.
Besides GST-tag antibody, try some antibodies that target your protein. Then you may have a better picture
what is going on here.
I met almost the same problems as you. First I found I didn't use the right strain. Then I realized my sequence
contains many rare amino acids.

w*12011-01-26 08:01

17 楼

尤其是凤凰男的家人真的是唯恐天下不乱！！哎...

辱。
场。

【在 W***9 的大作中提到】

: 我和凤凰男离婚
: 几个方面的问题
: 1 他卫生观念差，生活质量低。所以总是嫌我爱干净爱打扮。
: 2，他家庭对他的希望很大觉得他过的好了理所应当该对家里的事负责。
: 3 大男子主义强。明知道自己不对还要显示自己的大男子主义。觉得听老婆的话是耻辱。
: 4，太爱面子。一家人都是喜欢显摆。逢年过节婚嫁丧娶。家里都指望我们回去显排场。
: 5，公婆爱管事。小两口生气他妈妈就挑唆儿子。
: 6 控制欲强，即使我对他爸妈兄妹没的说，花钱很大度。但是他还偷偷的给家里人钱
: 。也尝试去掌管家里的财务，目的是即使家里花了钱也不需要让我知道。不需要承我的
: 好。最后过不好，离了。没吵没闹。因为家里钱都是我挣的。因为我满足他提出的所

w*e2011-01-26 08:01

18 楼

Do you have any link for checking rare amino acids? Thanks

amino

【在 n***w 的大作中提到】

: If you use pGEX2T vector, then the GST is about 29kDa. If your observed
: differences were within the 3-4 kDa range, then it may be fine.
: Also, you can use some online tools to see if your proteins have rare amino
: acids or not. Codon bias may exist.

W*92011-01-26 08:01

19 楼

寄信人: flyingglass (flyingglass)
标题: Re: 我和凤凰男离婚
发信站: 未名空间 (Wed Oct 16 21:44:54 2013)
来源: 107.
找我，我不是凤凰男，但是大叔。

n*w2011-01-26 08:01

20 楼

http://nihserver.mbi.ucla.edu/RACC/

【在 w*********e 的大作中提到】

: Do you have any link for checking rare amino acids? Thanks
:
: amino

t*92011-01-26 08:01

21 楼

离婚总是双方都有责任，人贵有自知之明，楼主是否也可以剖析一下自己的优缺点？
祝愿你的身心早日走出离婚的阴影。

w*e2011-01-26 08:01

22 楼

Thank you so much! I am going to check now.

【在 n***w 的大作中提到】

: http://nihserver.mbi.ucla.edu/RACC/

a*u2011-01-26 08:01

23 楼

操你妈，一个帖子到处发，想找人接盘也不要满世界污染网友的眼

辱。
场。

【在 W***9 的大作中提到】

: 我和凤凰男离婚
: 几个方面的问题
: 1 他卫生观念差，生活质量低。所以总是嫌我爱干净爱打扮。
: 2，他家庭对他的希望很大觉得他过的好了理所应当该对家里的事负责。
: 3 大男子主义强。明知道自己不对还要显示自己的大男子主义。觉得听老婆的话是耻辱。
: 4，太爱面子。一家人都是喜欢显摆。逢年过节婚嫁丧娶。家里都指望我们回去显排场。
: 5，公婆爱管事。小两口生气他妈妈就挑唆儿子。
: 6 控制欲强，即使我对他爸妈兄妹没的说，花钱很大度。但是他还偷偷的给家里人钱
: 。也尝试去掌管家里的财务，目的是即使家里花了钱也不需要让我知道。不需要承我的
: 好。最后过不好，离了。没吵没闹。因为家里钱都是我挣的。因为我满足他提出的所

C*e2011-01-26 08:01

24 楼

如果是codon bias
可以
1.用某些特殊的BL21(DE3)菌株，具体不记得哪些选择了，自己去搜一下
2.实在不行可以codon optimize，换成ecoli喜欢的codon

conditions

【在 w*********e 的大作中提到】

: The band is bigger than GST. It is around half size of the full lengh
: protein. I am thinking that probably the sequence of the protein is not
: easy for bacteria to translate. I am wondering if there are some conditions
: could overcome this problem.

a*u2011-01-26 08:01

25 楼

公布私信，封全站！

【在 W***9 的大作中提到】

: 寄信人: flyingglass (flyingglass)
: 标题: Re: 我和凤凰男离婚
: 发信站: 未名空间 (Wed Oct 16 21:44:54 2013)
: 来源: 107.
: 找我，我不是凤凰男，但是大叔。

T*e2011-01-26 08:01

26 楼

有把gst加在c-段的vector吗？

W*92011-01-26 08:01

27 楼

珍惜生命, 远离凤凰

辱。
场。

【在 W***9 的大作中提到】

: 我和凤凰男离婚
: 几个方面的问题
: 1 他卫生观念差，生活质量低。所以总是嫌我爱干净爱打扮。
: 2，他家庭对他的希望很大觉得他过的好了理所应当该对家里的事负责。
: 3 大男子主义强。明知道自己不对还要显示自己的大男子主义。觉得听老婆的话是耻辱。
: 4，太爱面子。一家人都是喜欢显摆。逢年过节婚嫁丧娶。家里都指望我们回去显排场。
: 5，公婆爱管事。小两口生气他妈妈就挑唆儿子。
: 6 控制欲强，即使我对他爸妈兄妹没的说，花钱很大度。但是他还偷偷的给家里人钱
: 。也尝试去掌管家里的财务，目的是即使家里花了钱也不需要让我知道。不需要承我的
: 好。最后过不好，离了。没吵没闹。因为家里钱都是我挣的。因为我满足他提出的所

W*92011-01-26 08:01

28 楼

凤凰男一般出生深仇大苦，凤凰男聪颖勤奋脱颖而出，凤凰男人见人爱光宗耀祖，
凤凰男改天换地倍受瞩目，凤凰男成绩显著受人羡慕，凤凰男娶的娇妻遭人嫉妒，
凤凰男儿好女好乐不思蜀，凤凰男感情真挚生活朴素，凤凰男勤俭持家

W*92011-01-26 08:01

29 楼

首先声明凤凰男这名词不是我定义的，这是指一特定群体的某些共同特点。网上查凤
凰男定义：　　所谓“凤凰男”，就是指集全家之力于一身，发愤读书十余年，终于
成为“山窝里飞出的金凤凰”，从而为一个家族蜕变带来希望的男性。他们进城市后，
娶了孔雀女

辱。
场。

【在 W***9 的大作中提到】

: 我和凤凰男离婚
: 几个方面的问题
: 1 他卫生观念差，生活质量低。所以总是嫌我爱干净爱打扮。
: 2，他家庭对他的希望很大觉得他过的好了理所应当该对家里的事负责。
: 3 大男子主义强。明知道自己不对还要显示自己的大男子主义。觉得听老婆的话是耻辱。
: 4，太爱面子。一家人都是喜欢显摆。逢年过节婚嫁丧娶。家里都指望我们回去显排场。
: 5，公婆爱管事。小两口生气他妈妈就挑唆儿子。
: 6 控制欲强，即使我对他爸妈兄妹没的说，花钱很大度。但是他还偷偷的给家里人钱
: 。也尝试去掌管家里的财务，目的是即使家里花了钱也不需要让我知道。不需要承我的
: 好。最后过不好，离了。没吵没闹。因为家里钱都是我挣的。因为我满足他提出的所

W*92011-01-26 08:01

30 楼

在美国，无异议离婚，什么程序？直接到法庭提交离婚申请？

辱。
场。

【在 W***9 的大作中提到】

: 我和凤凰男离婚
: 几个方面的问题
: 1 他卫生观念差，生活质量低。所以总是嫌我爱干净爱打扮。
: 2，他家庭对他的希望很大觉得他过的好了理所应当该对家里的事负责。
: 3 大男子主义强。明知道自己不对还要显示自己的大男子主义。觉得听老婆的话是耻辱。
: 4，太爱面子。一家人都是喜欢显摆。逢年过节婚嫁丧娶。家里都指望我们回去显排场。
: 5，公婆爱管事。小两口生气他妈妈就挑唆儿子。
: 6 控制欲强，即使我对他爸妈兄妹没的说，花钱很大度。但是他还偷偷的给家里人钱
: 。也尝试去掌管家里的财务，目的是即使家里花了钱也不需要让我知道。不需要承我的
: 好。最后过不好，离了。没吵没闹。因为家里钱都是我挣的。因为我满足他提出的所

W*92011-01-26 08:01

31 楼

在美国，无异议离婚，什么程序？直接到法庭提交离婚申请？

辱。
场。

【在 W***9 的大作中提到】

: 我和凤凰男离婚
: 几个方面的问题
: 1 他卫生观念差，生活质量低。所以总是嫌我爱干净爱打扮。
: 2，他家庭对他的希望很大觉得他过的好了理所应当该对家里的事负责。
: 3 大男子主义强。明知道自己不对还要显示自己的大男子主义。觉得听老婆的话是耻辱。
: 4，太爱面子。一家人都是喜欢显摆。逢年过节婚嫁丧娶。家里都指望我们回去显排场。
: 5，公婆爱管事。小两口生气他妈妈就挑唆儿子。
: 6 控制欲强，即使我对他爸妈兄妹没的说，花钱很大度。但是他还偷偷的给家里人钱
: 。也尝试去掌管家里的财务，目的是即使家里花了钱也不需要让我知道。不需要承我的
: 好。最后过不好，离了。没吵没闹。因为家里钱都是我挣的。因为我满足他提出的所

W*92011-01-26 08:01

32 楼

我是被这里的汗滴男女吸引来的，但刚过年，这里就凤凰满天飞。一群人等在这里对
凤凰议论纷纷，我看都是假凤凰，也就是个锦鸡。如果真是凤凰，有个几十个米，随
便拍点出来，两边都摆平了。女的跟了他，生活安逸，也没有什么可说了。

辱。
场。

【在 W***9 的大作中提到】

: 我和凤凰男离婚
: 几个方面的问题
: 1 他卫生观念差，生活质量低。所以总是嫌我爱干净爱打扮。
: 2，他家庭对他的希望很大觉得他过的好了理所应当该对家里的事负责。
: 3 大男子主义强。明知道自己不对还要显示自己的大男子主义。觉得听老婆的话是耻辱。
: 4，太爱面子。一家人都是喜欢显摆。逢年过节婚嫁丧娶。家里都指望我们回去显排场。
: 5，公婆爱管事。小两口生气他妈妈就挑唆儿子。
: 6 控制欲强，即使我对他爸妈兄妹没的说，花钱很大度。但是他还偷偷的给家里人钱
: 。也尝试去掌管家里的财务，目的是即使家里花了钱也不需要让我知道。不需要承我的
: 好。最后过不好，离了。没吵没闹。因为家里钱都是我挣的。因为我满足他提出的所

W*92011-01-26 08:01

33 楼

我父亲是农村出来的，我母亲是城里的。这个应该算是现在所谓的凤凰男孔雀女的组合
了吧。不过我父亲这个凤凰男和下面提到的可是不一样啊。我妈嫁给我父亲的时候是
属于不怎么会干活的那种，她连饭都不会烧，还是我父亲手把手教会的。【在 W4049
(Alasia) 的大作中提到: 】
辱。
场。

W*92011-01-26 08:01

34 楼

凤凰男，一出身比较差，山窝窝里出凤凰;二聪明和刻苦，聪明才成得了凤凰;三凤凰男
的所有成就，都是靠自己的双手努力得来的;四对自己所拥有的东西的吝啬，以及对失
去一切打回原形恐惧;五会不停的计算自己的付出和得到【在 W4049 (Alasia) 的大作
中提到: 】
辱。
场。

a*g2011-01-26 08:01

35 楼

离

辱。
场。

【在 W***9 的大作中提到】

: 我和凤凰男离婚
: 几个方面的问题
: 1 他卫生观念差，生活质量低。所以总是嫌我爱干净爱打扮。
: 2，他家庭对他的希望很大觉得他过的好了理所应当该对家里的事负责。
: 3 大男子主义强。明知道自己不对还要显示自己的大男子主义。觉得听老婆的话是耻辱。
: 4，太爱面子。一家人都是喜欢显摆。逢年过节婚嫁丧娶。家里都指望我们回去显排场。
: 5，公婆爱管事。小两口生气他妈妈就挑唆儿子。
: 6 控制欲强，即使我对他爸妈兄妹没的说，花钱很大度。但是他还偷偷的给家里人钱
: 。也尝试去掌管家里的财务，目的是即使家里花了钱也不需要让我知道。不需要承我的
: 好。最后过不好，离了。没吵没闹。因为家里钱都是我挣的。因为我满足他提出的所