问一个primary macrophage培养的问题# Biology - 生物学
f*y
1 楼
年初帮一个生物研究所里一个副头开发一个传感器（他们出钱），现在同一所里另一个
组头有兴趣把这个传感器（也许要改动设计）放到另一个应用上合作申请基金，不知道
有没有可操作性？不想引起不必要的合作麻烦，有什么要注意的地方？多谢
组头有兴趣把这个传感器（也许要改动设计）放到另一个应用上合作申请基金，不知道
有没有可操作性？不想引起不必要的合作麻烦，有什么要注意的地方？多谢
l*o
2 楼
我们组招人，帮自己组宣传一下。直接站内信联系。:-)(I will help deliver your
cv+cover letter directly to my manager)
Video Analysis Senior Research Engineer
Department Description:
The Information & Content Enablers Lab within Motorola’s Applied
Research
Center researches and develops innovative content analysis & processing
technologies and applies them to create differentiating capabilities in
Motorola’s products. We are a team-oriented research group with
expertise
in video, audio, and text analysis and processing t
cv+cover letter directly to my manager)
Video Analysis Senior Research Engineer
Department Description:
The Information & Content Enablers Lab within Motorola’s Applied
Research
Center researches and develops innovative content analysis & processing
technologies and applies them to create differentiating capabilities in
Motorola’s products. We are a team-oriented research group with
expertise
in video, audio, and text analysis and processing t
f*k
3 楼
偶尔在Pandora里听到了这个乐队，这首歌，突然被触动。
宝贝，想你了。
新人第一次发帖，轻指教。
Endlessly - Green River Ordinance
Songwriters: Denton Baxter Hunker, James Victor Ice, William Geoffrey Ice,
Josh Jenkins, Michael Maida, Joshua Tyler Wilkerson
She is my rock and my rolling thunder
I've been the spell she was under
I, I love that girl
She is my cigarettes and champagne
She's got me strung but I'm not running
I, I love that girl. I, I love that girl
She is the days I can't get over
She is the nights that I call home endlessly
For you I'll always wait
Caught in the waves of hesitation
Lost in the sea of my own doubt endlessly
For you I'll always wait. For you I'll always wait
She is the flame and the fire she's raging
I've been the spark and the war she's wagin
I, I love that girl
She came along and she spoke so sweetly
Changed everything, took my heart completely
I, I love that girl. I, I love that girl
She is the days I can't get over
She is the nights that I call home endlessly
For you I'll always wait
Caught in the waves of hesitation
Lost in the sea of my own doubt endlessly
For you I'll always wait
And the city buzz and empty cars
It's 3 a.m. I wonder where you are
And the crooked smiles and worn out miles between us
Now I wonder where you are
She is the days I can't get over
She is the nights that I call home endlessly
For you I'll always wait
Caught in the waves of hesitation
Lost in the sea of my own doubt endlessly
For you I'll always wait
For you I'll always wait
For you I'll always wait
宝贝，想你了。
新人第一次发帖，轻指教。
Endlessly - Green River Ordinance
Songwriters: Denton Baxter Hunker, James Victor Ice, William Geoffrey Ice,
Josh Jenkins, Michael Maida, Joshua Tyler Wilkerson
She is my rock and my rolling thunder
I've been the spell she was under
I, I love that girl
She is my cigarettes and champagne
She's got me strung but I'm not running
I, I love that girl. I, I love that girl
She is the days I can't get over
She is the nights that I call home endlessly
For you I'll always wait
Caught in the waves of hesitation
Lost in the sea of my own doubt endlessly
For you I'll always wait. For you I'll always wait
She is the flame and the fire she's raging
I've been the spark and the war she's wagin
I, I love that girl
She came along and she spoke so sweetly
Changed everything, took my heart completely
I, I love that girl. I, I love that girl
She is the days I can't get over
She is the nights that I call home endlessly
For you I'll always wait
Caught in the waves of hesitation
Lost in the sea of my own doubt endlessly
For you I'll always wait
And the city buzz and empty cars
It's 3 a.m. I wonder where you are
And the crooked smiles and worn out miles between us
Now I wonder where you are
She is the days I can't get over
She is the nights that I call home endlessly
For you I'll always wait
Caught in the waves of hesitation
Lost in the sea of my own doubt endlessly
For you I'll always wait
For you I'll always wait
For you I'll always wait
s*n
4 楼
我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS
,IFN beta， gamma等stimuli的反应区别，以及antigen presentation to CD4+ T
cell，nitro oxide production还有phagocytosis的区别。
我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF（L-Cell media）的media里养6-7天
，replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说，你这样养7天，得到的细胞其实更接
近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天，才能得到real macrophage
。可是我在文献中查不到这种说法的依据。
我老板原来是做T cell的，也不太清楚这个问题。
大家谁做过Macrophage啊？是不是如这个老师说的？还是说不同实验目的，培养方法也
不一样？
多谢了先！
,IFN beta， gamma等stimuli的反应区别，以及antigen presentation to CD4+ T
cell，nitro oxide production还有phagocytosis的区别。
我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF（L-Cell media）的media里养6-7天
，replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说，你这样养7天，得到的细胞其实更接
近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天，才能得到real macrophage
。可是我在文献中查不到这种说法的依据。
我老板原来是做T cell的，也不太清楚这个问题。
大家谁做过Macrophage啊？是不是如这个老师说的？还是说不同实验目的，培养方法也
不一样？
多谢了先！
l*o
5 楼
Location: Motorola Headquarter in Schaumburg, IL (Chicago Suburb)
i*s
6 楼
赞````
Your girl is so lucky~
【在 f******k 的大作中提到】
: 偶尔在Pandora里听到了这个乐队，这首歌，突然被触动。
: 宝贝，想你了。
: 新人第一次发帖，轻指教。
: Endlessly - Green River Ordinance
: Songwriters: Denton Baxter Hunker, James Victor Ice, William Geoffrey Ice,
: Josh Jenkins, Michael Maida, Joshua Tyler Wilkerson
: She is my rock and my rolling thunder
: I've been the spell she was under
: I, I love that girl
: She is my cigarettes and champagne
Your girl is so lucky~
【在 f******k 的大作中提到】
: 偶尔在Pandora里听到了这个乐队，这首歌，突然被触动。
: 宝贝，想你了。
: 新人第一次发帖，轻指教。
: Endlessly - Green River Ordinance
: Songwriters: Denton Baxter Hunker, James Victor Ice, William Geoffrey Ice,
: Josh Jenkins, Michael Maida, Joshua Tyler Wilkerson
: She is my rock and my rolling thunder
: I've been the spell she was under
: I, I love that girl
: She is my cigarettes and champagne
a*g
7 楼
应该还要加RANKL
LPS
macrophage
【在 s********n 的大作中提到】
: 我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS
: ,IFN beta， gamma等stimuli的反应区别，以及antigen presentation to CD4+ T
: cell，nitro oxide production还有phagocytosis的区别。
: 我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF（L-Cell media）的media里养6-7天
: ，replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说，你这样养7天，得到的细胞其实更接
: 近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天，才能得到real macrophage
: 。可是我在文献中查不到这种说法的依据。
: 我老板原来是做T cell的，也不太清楚这个问题。
: 大家谁做过Macrophage啊？是不是如这个老师说的？还是说不同实验目的，培养方法也
: 不一样？
LPS
macrophage
【在 s********n 的大作中提到】
: 我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS
: ,IFN beta， gamma等stimuli的反应区别，以及antigen presentation to CD4+ T
: cell，nitro oxide production还有phagocytosis的区别。
: 我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF（L-Cell media）的media里养6-7天
: ，replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说，你这样养7天，得到的细胞其实更接
: 近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天，才能得到real macrophage
: 。可是我在文献中查不到这种说法的依据。
: 我老板原来是做T cell的，也不太清楚这个问题。
: 大家谁做过Macrophage啊？是不是如这个老师说的？还是说不同实验目的，培养方法也
: 不一样？
f*k
8 楼
这个周末才听到的歌，用了一晚上赶出来。
虽然录得时间有点仓促，但想在第一时间告诉她，想她了。。。
【在 i****s 的大作中提到】
: 赞````
: Your girl is so lucky~
虽然录得时间有点仓促，但想在第一时间告诉她，想她了。。。
【在 i****s 的大作中提到】
: 赞````
: Your girl is so lucky~
s*9
9 楼
Are you sure?
I am not a macrophage expert. But I believed that RANKL+M-CSF turn BM cells
differentiate into osteoclast.
【在 a*****g 的大作中提到】
: 应该还要加RANKL
:
: LPS
: macrophage
I am not a macrophage expert. But I believed that RANKL+M-CSF turn BM cells
differentiate into osteoclast.
【在 a*****g 的大作中提到】
: 应该还要加RANKL
:
: LPS
: macrophage
c*n
10 楼
很好听，谢分享。
a*g
11 楼
I think you are right。I was confused.
cells
【在 s****9 的大作中提到】
: Are you sure?
: I am not a macrophage expert. But I believed that RANKL+M-CSF turn BM cells
: differentiate into osteoclast.
cells
【在 s****9 的大作中提到】
: Are you sure?
: I am not a macrophage expert. But I believed that RANKL+M-CSF turn BM cells
: differentiate into osteoclast.
s*u
12 楼
MCSF 6,7天出来的只要是贴壁的都基本上是MCs而不是monocyte了，他不信你让他去做
CD14 staining.
LPS
macrophage
【在 s********n 的大作中提到】
: 我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS
: ,IFN beta， gamma等stimuli的反应区别，以及antigen presentation to CD4+ T
: cell，nitro oxide production还有phagocytosis的区别。
: 我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF（L-Cell media）的media里养6-7天
: ，replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说，你这样养7天，得到的细胞其实更接
: 近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天，才能得到real macrophage
: 。可是我在文献中查不到这种说法的依据。
: 我老板原来是做T cell的，也不太清楚这个问题。
: 大家谁做过Macrophage啊？是不是如这个老师说的？还是说不同实验目的，培养方法也
: 不一样？
CD14 staining.
LPS
macrophage
【在 s********n 的大作中提到】
: 我实验需要培养B6和一种mutant老鼠的Bone marrow macrophage,然后比较细胞的对LPS
: ,IFN beta， gamma等stimuli的反应区别，以及antigen presentation to CD4+ T
: cell，nitro oxide production还有phagocytosis的区别。
: 我原来的protocol就是把bone marrow放在有M-CSF（L-Cell media）的media里养6-7天
: ，replate以后就用。后来隔壁实验室的老教授说，你这样养7天，得到的细胞其实更接
: 近于monocyte,还需要把细胞在no-M-CSF media里养2-3天，才能得到real macrophage
: 。可是我在文献中查不到这种说法的依据。
: 我老板原来是做T cell的，也不太清楚这个问题。
: 大家谁做过Macrophage啊？是不是如这个老师说的？还是说不同实验目的，培养方法也
: 不一样？
s*n
13 楼
多谢指教！
【在 s****u 的大作中提到】
: MCSF 6,7天出来的只要是贴壁的都基本上是MCs而不是monocyte了，他不信你让他去做
: CD14 staining.
:
: LPS
: macrophage
【在 s****u 的大作中提到】
: MCSF 6,7天出来的只要是贴壁的都基本上是MCs而不是monocyte了，他不信你让他去做
: CD14 staining.
:
: LPS
: macrophage
W*C
14 楼
我们也是用Ｌ－ＳＵＰ刺激分化的。因为Ｌ－ＳＵＰ成份比较复杂，所以一周后去掉Ｌ
－ＳＵＰ再养几天比较好。对某些实验应该可以降低ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ。 这应该
对细胞分化没啥影响的。 我们用的是ＤＭＥＭ＋ｇｌｕｔａｍｉｎｅ， 没加其他的
。
－ＳＵＰ再养几天比较好。对某些实验应该可以降低ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ。 这应该
对细胞分化没啥影响的。 我们用的是ＤＭＥＭ＋ｇｌｕｔａｍｉｎｅ， 没加其他的
。
s*n
15 楼
是一周以后starve 的时候用DMEM+L-Glutamine么？还加horse serum 和Na pyruvate，
non-essential amino acid么？
【在 W****C 的大作中提到】
: 我们也是用Ｌ－ＳＵＰ刺激分化的。因为Ｌ－ＳＵＰ成份比较复杂，所以一周后去掉Ｌ
: －ＳＵＰ再养几天比较好。对某些实验应该可以降低ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ。 这应该
: 对细胞分化没啥影响的。 我们用的是ＤＭＥＭ＋ｇｌｕｔａｍｉｎｅ， 没加其他的
: 。
non-essential amino acid么？
【在 W****C 的大作中提到】
: 我们也是用Ｌ－ＳＵＰ刺激分化的。因为Ｌ－ＳＵＰ成份比较复杂，所以一周后去掉Ｌ
: －ＳＵＰ再养几天比较好。对某些实验应该可以降低ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ。 这应该
: 对细胞分化没啥影响的。 我们用的是ＤＭＥＭ＋ｇｌｕｔａｍｉｎｅ， 没加其他的
: 。
W*C
16 楼
如果需要ｓｔａｒｖｅ的话就不加ｓｅｒｕｍ， 如果不需要的话就加１０％的ｓｅｒ
ｕｍ（ＦＢＳ）
【在 s********n 的大作中提到】
: 是一周以后starve 的时候用DMEM+L-Glutamine么？还加horse serum 和Na pyruvate，
: non-essential amino acid么？
ｕｍ（ＦＢＳ）
【在 s********n 的大作中提到】
: 是一周以后starve 的时候用DMEM+L-Glutamine么？还加horse serum 和Na pyruvate，
: non-essential amino acid么？
w*h
17 楼
我是参照CURRENT PROTOCOL in immuology 的方法做的，和你的protocol差不多，只不
过我用的是 M-CSF,培养7天后flow cyotmetry显示有超过98%的细胞是CD11B+F4/80+,所
以他们是MACROPHAGE,不是monocytes。
过我用的是 M-CSF,培养7天后flow cyotmetry显示有超过98%的细胞是CD11B+F4/80+,所
以他们是MACROPHAGE,不是monocytes。
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