D*f
2 楼
我定于12/31加入新公司，提前一个月告诉当前老板，没想到被告知HR要求我于12/14离
职，（还不清楚是什么原因），这样我就有16天没有任何工作，这样H1b Transfer会遇
上麻烦吗？
BTW，我有140&EAD,485提交超过180天了，所以到不担心留在美国的问题。
谢谢给我一些建议。
职，（还不清楚是什么原因），这样我就有16天没有任何工作，这样H1b Transfer会遇
上麻烦吗？
BTW，我有140&EAD,485提交超过180天了，所以到不担心留在美国的问题。
谢谢给我一些建议。
h*1
3 楼
大家还记得那些年我们一起追过的台湾偶像剧吗？曾几何时台湾的偶像剧和韩剧一样火
，在90年代观众朋友们都很喜欢看偶像剧。
《流星花园》这是最早的一部台湾偶像剧了，可以说是偶像剧的鼻祖。当时这部电
视剧红遍了亚洲。
《王子变青蛙》，时隔多年，重新看这部电视剧还是很好看。喜欢明道扮演的单君
昊和陈乔恩扮演的叶天瑜。
《恶作剧之吻》，这部偶像剧是根据漫画改编的，中日韩三个国家有三个不同的版
本。但是林依晨和郑元畅主演的这个版本是最好看的，很多人都会被单纯又执着的袁湘
琴感动，被帅气的江直树迷住。
林志颖主演的《放羊的星星》当时很火的，并且剧中的手链也火了。这部电视剧播出以
后，很多人去买同款手链。
《公主小妹》，女主角是张韶涵扮演的，男主角是吴尊扮演的。
《命中注定我爱你》，这部剧是由陈乔恩还有阮经天主演的，她创下了台湾偶像剧的收
视率记录，收视率保持在第一名。泰国翻拍了这部剧，并且现在正在热播。
《转角遇到爱》，大S和罗志祥主演的。这部剧没有偶像剧里面霸道总裁和灰姑娘的
那种剧情，也没有高富帅的男主角，这部剧是所有偶像剧里面最接地气的一部剧。
《恶魔在身边》，杨丞琳和贺军翔主演的。虽然女主角不是大美女，男主角不是高富帅
，但是很多朋友还是很喜欢。
，在90年代观众朋友们都很喜欢看偶像剧。
《流星花园》这是最早的一部台湾偶像剧了，可以说是偶像剧的鼻祖。当时这部电
视剧红遍了亚洲。
《王子变青蛙》，时隔多年，重新看这部电视剧还是很好看。喜欢明道扮演的单君
昊和陈乔恩扮演的叶天瑜。
《恶作剧之吻》，这部偶像剧是根据漫画改编的，中日韩三个国家有三个不同的版
本。但是林依晨和郑元畅主演的这个版本是最好看的，很多人都会被单纯又执着的袁湘
琴感动，被帅气的江直树迷住。
林志颖主演的《放羊的星星》当时很火的，并且剧中的手链也火了。这部电视剧播出以
后，很多人去买同款手链。
《公主小妹》，女主角是张韶涵扮演的，男主角是吴尊扮演的。
《命中注定我爱你》，这部剧是由陈乔恩还有阮经天主演的，她创下了台湾偶像剧的收
视率记录，收视率保持在第一名。泰国翻拍了这部剧，并且现在正在热播。
《转角遇到爱》，大S和罗志祥主演的。这部剧没有偶像剧里面霸道总裁和灰姑娘的
那种剧情，也没有高富帅的男主角，这部剧是所有偶像剧里面最接地气的一部剧。
《恶魔在身边》，杨丞琳和贺军翔主演的。虽然女主角不是大美女，男主角不是高富帅
，但是很多朋友还是很喜欢。
g*a
4 楼
刷过ROM有电话功能。
但在国内不能用。
还可以叫T-mobile解锁吗？
谢谢！
但在国内不能用。
还可以叫T-mobile解锁吗？
谢谢！
m*r
5 楼
正在纯化一个his-tag的蛋白。我想让蛋白结合到Ni柱上后用TEV protease剪切后收集
切下来的蛋白，我觉得这样比用immidazole洗脱纯度高，还省了以后再切tag的麻烦。
现在问题是，老板买了个qiagen的fast start kit (gravity flow的那种）， 里面的
Ni-agarose成型了之后像gel一样，不能被重新悬浮，我在加TEV protease洗脱的时候
（4C 过夜），溶液不能完全浸没Ni-agarose，跑胶后和immidazole洗脱的比较发现洗
脱效率很低，我怀疑是因为TEV protease不能很好地与Ni-agarose接触造成的。
请教下有什么推荐的解决方法么？别家卖的Ni-NT好像有那种纯化过程中一直都自由悬
浮的，
不知道哪家的好，或者我的TEV proteasejianqie剪切加洗脱的方案有设么可以改进的
地方？多谢！
切下来的蛋白，我觉得这样比用immidazole洗脱纯度高，还省了以后再切tag的麻烦。
现在问题是，老板买了个qiagen的fast start kit (gravity flow的那种）， 里面的
Ni-agarose成型了之后像gel一样，不能被重新悬浮，我在加TEV protease洗脱的时候
（4C 过夜），溶液不能完全浸没Ni-agarose，跑胶后和immidazole洗脱的比较发现洗
脱效率很低，我怀疑是因为TEV protease不能很好地与Ni-agarose接触造成的。
请教下有什么推荐的解决方法么？别家卖的Ni-NT好像有那种纯化过程中一直都自由悬
浮的，
不知道哪家的好，或者我的TEV proteasejianqie剪切加洗脱的方案有设么可以改进的
地方？多谢！
u*3
6 楼
求购租车receipt
g*n
7 楼
郑重建议：不必杞人忧天
S*r
8 楼
可以自己解，xda查查。
【在 g******a 的大作中提到】
: 刷过ROM有电话功能。
: 但在国内不能用。
: 还可以叫T-mobile解锁吗？
: 谢谢！
【在 g******a 的大作中提到】
: 刷过ROM有电话功能。
: 但在国内不能用。
: 还可以叫T-mobile解锁吗？
: 谢谢！
k*0
9 楼
你的buffer有没有protease inhibitors，如PMSF， pepstatin等，它们是Tev
protease的抑制剂。有没有DTT，通常我们做Ni－NT不加DTT，好像TEV protease最好有
些DTT存在。还有，in column proteolysis
通常不如in solution digestion有效，多加些protease。 TEV protease特异性很强，
加多了也不怕。如果可以，还可以在20C水解，比4C有效。
protease的抑制剂。有没有DTT，通常我们做Ni－NT不加DTT，好像TEV protease最好有
些DTT存在。还有，in column proteolysis
通常不如in solution digestion有效，多加些protease。 TEV protease特异性很强，
加多了也不怕。如果可以，还可以在20C水解，比4C有效。
s*t
10 楼
多谢 请问具体怎么操作？
i*y
11 楼
绝对没有问题.
【在 D**f 的大作中提到】
: 我定于12/31加入新公司，提前一个月告诉当前老板，没想到被告知HR要求我于12/14离
: 职，（还不清楚是什么原因），这样我就有16天没有任何工作，这样H1b Transfer会遇
: 上麻烦吗？
: BTW，我有140&EAD,485提交超过180天了，所以到不担心留在美国的问题。
: 谢谢给我一些建议。
【在 D**f 的大作中提到】
: 我定于12/31加入新公司，提前一个月告诉当前老板，没想到被告知HR要求我于12/14离
: 职，（还不清楚是什么原因），这样我就有16天没有任何工作，这样H1b Transfer会遇
: 上麻烦吗？
: BTW，我有140&EAD,485提交超过180天了，所以到不担心留在美国的问题。
: 谢谢给我一些建议。
m*r
12 楼
1.Protease inhibitor我只有在裂解细胞的时候加入的，不过在洗脱之前已经wash了几
次，洗脱的时候应该没什么残留了。
2. 我没加DTT,刚看了下别的protocol，貌似也推荐用1 mM DTT，我下次加入试试。（-
_- 第一次试没经验）
3. TEV加入量的问题也值得我多算计一下，多谢回复！
【在 k******0 的大作中提到】
: 你的buffer有没有protease inhibitors，如PMSF， pepstatin等，它们是Tev
: protease的抑制剂。有没有DTT，通常我们做Ni－NT不加DTT，好像TEV protease最好有
: 些DTT存在。还有，in column proteolysis
: 通常不如in solution digestion有效，多加些protease。 TEV protease特异性很强，
: 加多了也不怕。如果可以，还可以在20C水解，比4C有效。
次，洗脱的时候应该没什么残留了。
2. 我没加DTT,刚看了下别的protocol，貌似也推荐用1 mM DTT，我下次加入试试。（-
_- 第一次试没经验）
3. TEV加入量的问题也值得我多算计一下，多谢回复！
【在 k******0 的大作中提到】
: 你的buffer有没有protease inhibitors，如PMSF， pepstatin等，它们是Tev
: protease的抑制剂。有没有DTT，通常我们做Ni－NT不加DTT，好像TEV protease最好有
: 些DTT存在。还有，in column proteolysis
: 通常不如in solution digestion有效，多加些protease。 TEV protease特异性很强，
: 加多了也不怕。如果可以，还可以在20C水解，比4C有效。
C*n
13 楼
打电话给客服，可能得花400刀，50K以上。
p*u
14 楼
打电话给AA,可以参加一个challegne,把里程要回来.不是很难，比如一年之内坐一趟AA
的飞机之类。我以前也是过期了弄过。
【在 s********t 的大作中提到】
: 多谢 请问具体怎么操作？
的飞机之类。我以前也是过期了弄过。
【在 s********t 的大作中提到】
: 多谢 请问具体怎么操作？
g*n
15 楼
据说用租车收据可以claim里程，只要补上就可以延期了
【在 s********t 的大作中提到】
: 多谢 请问具体怎么操作？
【在 s********t 的大作中提到】
: 多谢 请问具体怎么操作？
B*y
16 楼
200刀买回50K，再加15刀的手续费。
【在 C*******n 的大作中提到】
: 打电话给客服，可能得花400刀，50K以上。
【在 C*******n 的大作中提到】
: 打电话给客服，可能得花400刀，50K以上。
B*y
17 楼
要买剩下的2万6千麦，又要花200刀+15刀。AA只肯5万麦一买，买光自己掉的为止，但
不退钱，非常黑的。。。
【在 B******y 的大作中提到】
: 200刀买回50K，再加15刀的手续费。
不退钱，非常黑的。。。
【在 B******y 的大作中提到】
: 200刀买回50K，再加15刀的手续费。
s*t
18 楼
谢谢楼上的 是给租车公司打电话吧？刚好2月有租过 不过用的是LD的名字租的可以么
？
？
g*n
19 楼
名字肯定没问题吧，没看楼上让你求购别人的呢
你在版上考古一下吧，有过类似帖子，里面有很多建议
【在 s********t 的大作中提到】
: 谢谢楼上的 是给租车公司打电话吧？刚好2月有租过 不过用的是LD的名字租的可以么
: ？
你在版上考古一下吧，有过类似帖子，里面有很多建议
【在 s********t 的大作中提到】
: 谢谢楼上的 是给租车公司打电话吧？刚好2月有租过 不过用的是LD的名字租的可以么
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