克隆求助：kozak sequence对蛋白表达影响有多大？# Biology - 生物学
m*l
1 楼
他在南京高校做副教授，现在学校给经费支持出国访问，所有开支都是国内出，不需要
这边老师的funding。他的专业是：电子商务，信息管理与信息系统。如果有哪位老师
愿意给个机会，请pm我email，我给你直接发简历。 多谢！
这边老师的funding。他的专业是：电子商务，信息管理与信息系统。如果有哪位老师
愿意给个机会，请pm我email，我给你直接发简历。 多谢！
a*t
2 楼
当时是给一笔钱,现示在W 2上.
l*r
3 楼
有人知道是怎么个来历么？
j*i
4 楼
这次克隆的时候，设计pcr引物的时候，一时疏忽，直接在我的目的基因前面加了个
restriction site, pcr后插到vector里边
去。现在克隆出来了，回过头来一看才发现ATG G前面没有kozak sequence, 甚至－3不
是A or G, -6不是G. 请教这对蛋
白表达影响大吗？如果影响大的话，我干脆重新设计引物免得以后麻烦。
restriction site, pcr后插到vector里边
去。现在克隆出来了，回过头来一看才发现ATG G前面没有kozak sequence, 甚至－3不
是A or G, -6不是G. 请教这对蛋
白表达影响大吗？如果影响大的话，我干脆重新设计引物免得以后麻烦。
m*l
5 楼
他是真心想做点东西，不想浪费学校这次机会。如果有哪位老师愿意帮忙，以后回南京
合作机会应该很多。
合作机会应该很多。
l*r
6 楼
古代有没有“乾坤轮”似的秘锁啊？
g*5
7 楼
if you use cmv no problem because CMV is strong promoter...
if you clone in bacterial expression vector, and tag on 3'
maybe think about sd sequence.
if you clone in bacterial expression vector, and tag on 3'
maybe think about sd sequence.
t*h
8 楼
非美国的学校呢？
n*w
9 楼
我上次加了kozak，orf变了。。。
我后来就把它去掉了。。。
我后来就把它去掉了。。。
n*n
10 楼
待多长时间呢？他这应该算MIS专业的吧？
【在 m*****l 的大作中提到】
: 他在南京高校做副教授，现在学校给经费支持出国访问，所有开支都是国内出，不需要
: 这边老师的funding。他的专业是：电子商务，信息管理与信息系统。如果有哪位老师
: 愿意给个机会，请pm我email，我给你直接发简历。 多谢！
【在 m*****l 的大作中提到】
: 他在南京高校做副教授，现在学校给经费支持出国访问，所有开支都是国内出，不需要
: 这边老师的funding。他的专业是：电子商务，信息管理与信息系统。如果有哪位老师
: 愿意给个机会，请pm我email，我给你直接发简历。 多谢！
s*i
11 楼
没有kozark表达量高低是不可预测的，运气好也可能高表达
还是加上吧
【在 j******i 的大作中提到】
: 这次克隆的时候，设计pcr引物的时候，一时疏忽，直接在我的目的基因前面加了个
: restriction site, pcr后插到vector里边
: 去。现在克隆出来了，回过头来一看才发现ATG G前面没有kozak sequence, 甚至－3不
: 是A or G, -6不是G. 请教这对蛋
: 白表达影响大吗？如果影响大的话，我干脆重新设计引物免得以后麻烦。
还是加上吧
【在 j******i 的大作中提到】
: 这次克隆的时候，设计pcr引物的时候，一时疏忽，直接在我的目的基因前面加了个
: restriction site, pcr后插到vector里边
: 去。现在克隆出来了，回过头来一看才发现ATG G前面没有kozak sequence, 甚至－3不
: 是A or G, -6不是G. 请教这对蛋
: 白表达影响大吗？如果影响大的话，我干脆重新设计引物免得以后麻烦。
e*s
12 楼
应该是MIS/CIS/IS，商学院对这种即使是自带口粮的也不是很有需求，可以试试
Information Science Department/School。
Information Science Department/School。
n*w
13 楼
但是如果用bacteria表达的话，kozak帮不了什么吧。
【在 s*****i 的大作中提到】
: 没有kozark表达量高低是不可预测的，运气好也可能高表达
: 还是加上吧
【在 s*****i 的大作中提到】
: 没有kozark表达量高低是不可预测的，运气好也可能高表达
: 还是加上吧
c*a
14 楼
我的建议从来是你先给email，不是每个人都愿意暴露的。
另外，俺的经验访问学者好坏参半，有人真想提高，有人只想游山玩水生孩子。
其实，你哥或你查一下谁做他的东西直接联系比你空问要效率高很多。
另外，俺的经验访问学者好坏参半，有人真想提高，有人只想游山玩水生孩子。
其实，你哥或你查一下谁做他的东西直接联系比你空问要效率高很多。
j*i
15 楼
Thank you for comments! I do have CMV promotor before my gene and the
construct will be used to express in mammalian cell line. Yes, you guys are
right. Without Kozak sequence, it looks like all depends on lucky to get
high expression. To be safe, I'd better add it back to my constructs. It's
painful and a lesson I learned--to be more careful before I start an exp.
construct will be used to express in mammalian cell line. Yes, you guys are
right. Without Kozak sequence, it looks like all depends on lucky to get
high expression. To be safe, I'd better add it back to my constructs. It's
painful and a lesson I learned--to be more careful before I start an exp.
m*l
16 楼
可以给我一个yahoo/google/msn email，看了简历，如果感兴趣，可以继续联系。
c*a
17 楼
哈哈，难到给你个临时地址你就不知道是我啦？
【在 m*****l 的大作中提到】
: 可以给我一个yahoo/google/msn email，看了简历，如果感兴趣，可以继续联系。
【在 m*****l 的大作中提到】
: 可以给我一个yahoo/google/msn email，看了简历，如果感兴趣，可以继续联系。
m*a
18 楼
查你的站内信箱。
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