为啥Qiagen Maxi Prep提大点质粒不work# Biology - 生物学
h*e
1 楼
女儿特别喜欢这个，不知道在国内买的中英文都有的版本，邮寄过来的话，会不会有问
题？有人有这方面的经验吗？谢谢。
题？有人有这方面的经验吗？谢谢。
l*3
2 楼
http://movie.douban.com/photos/photo/1767172396/
edit by laufine
edit by laufine
l*y
3 楼
雷版说起和如烟的区别。正好刚下过雪，天很冷。就想起这首诗了，怀念曾经的热闹和
温馨。
在怀旧版来怀这个版的旧，别有味道啊 :)
那啥，最后还是落到了酒上。
问刘十九
白居易
绿蚁新醅酒，
红泥小火炉。
晚来天欲雪，
能饮一杯无？
温馨。
在怀旧版来怀这个版的旧，别有味道啊 :)
那啥，最后还是落到了酒上。
问刘十九
白居易
绿蚁新醅酒，
红泥小火炉。
晚来天欲雪，
能饮一杯无？
S*p
4 楼
上个月7号在ATT官网预订的，两个电话都用了一个多月了，到现在只Charge了一个手机
的钱。
的钱。
n*s
5 楼
刚engineer了一个bluescrppit 的质粒，大约17k，用Qiagen的常规大抽试剂盒，就是
过柱子那种，结果试了几次yield都很低，只有三十来微克，不知道原因是啥，同样的
试剂盒抽14k的质粒还好好的，
变懒了，上来问问大家这种stupid的问题，怎么能提高yield？换试剂盒还是自己配试
剂抽提？
过柱子那种，结果试了几次yield都很低，只有三十来微克，不知道原因是啥，同样的
试剂盒抽14k的质粒还好好的，
变懒了，上来问问大家这种stupid的问题，怎么能提高yield？换试剂盒还是自己配试
剂抽提？
G*e
6 楼
有可能在这儿的DVD机上播放不了
l*r
7 楼
这是谁拿来做签名档还是进版画面来着？我肿么这么健忘
【在 l***y 的大作中提到】
: 雷版说起和如烟的区别。正好刚下过雪，天很冷。就想起这首诗了，怀念曾经的热闹和
: 温馨。
: 在怀旧版来怀这个版的旧，别有味道啊 :)
: 那啥，最后还是落到了酒上。
: 问刘十九
: 白居易
: 绿蚁新醅酒，
: 红泥小火炉。
: 晚来天欲雪，
: 能饮一杯无？
【在 l***y 的大作中提到】
: 雷版说起和如烟的区别。正好刚下过雪，天很冷。就想起这首诗了，怀念曾经的热闹和
: 温馨。
: 在怀旧版来怀这个版的旧，别有味道啊 :)
: 那啥，最后还是落到了酒上。
: 问刘十九
: 白居易
: 绿蚁新醅酒，
: 红泥小火炉。
: 晚来天欲雪，
: 能饮一杯无？
f*l
8 楼
包子
【在 S*p 的大作中提到】
: 上个月7号在ATT官网预订的，两个电话都用了一个多月了，到现在只Charge了一个手机
: 的钱。
【在 S*p 的大作中提到】
: 上个月7号在ATT官网预订的，两个电话都用了一个多月了，到现在只Charge了一个手机
: 的钱。
n*w
9 楼
new kit?
h*e
10 楼
这个倒没问题，我以前买过两张，女儿很喜欢，所以才想买全套。本来想试当当网，又
怕路上耽误个半年。
怕路上耽误个半年。
l*r
11 楼
话说热闹一直在啊，是河马落潮了
【在 l***y 的大作中提到】
: 雷版说起和如烟的区别。正好刚下过雪，天很冷。就想起这首诗了，怀念曾经的热闹和
: 温馨。
: 在怀旧版来怀这个版的旧，别有味道啊 :)
: 那啥，最后还是落到了酒上。
: 问刘十九
: 白居易
: 绿蚁新醅酒，
: 红泥小火炉。
: 晚来天欲雪，
: 能饮一杯无？
【在 l***y 的大作中提到】
: 雷版说起和如烟的区别。正好刚下过雪，天很冷。就想起这首诗了，怀念曾经的热闹和
: 温馨。
: 在怀旧版来怀这个版的旧，别有味道啊 :)
: 那啥，最后还是落到了酒上。
: 问刘十九
: 白居易
: 绿蚁新醅酒，
: 红泥小火炉。
: 晚来天欲雪，
: 能饮一杯无？
m*c
12 楼
赶上deal了，买一赠一。
【在 S*p 的大作中提到】
: 上个月7号在ATT官网预订的，两个电话都用了一个多月了，到现在只Charge了一个手机
: 的钱。
【在 S*p 的大作中提到】
: 上个月7号在ATT官网预订的，两个电话都用了一个多月了，到现在只Charge了一个手机
: 的钱。
n*s
13 楼
就这个标准速度的，Column至少买来两年了吧，不过是新的，土人不知道现在还有什么
超速的Kit，跟不上时代了，
http://www.qiagen.com/products/plasmid/qiagenplasmidpurificatio
超速的Kit，跟不上时代了，
http://www.qiagen.com/products/plasmid/qiagenplasmidpurificatio
w*r
14 楼
话说有一副画，一条搁浅的渔船孤零零的斜躺着喘息，看上去一片萧瑟凋零。 凑近看
右下角一行小字:the tide will always come back
【在 l*r 的大作中提到】
: 话说热闹一直在啊，是河马落潮了
右下角一行小字:the tide will always come back
【在 l*r 的大作中提到】
: 话说热闹一直在啊，是河马落潮了
a*a
15 楼
我也是买了两个只收了一个的钱。不过，早晚总是跑不掉的。估计他们的系统还需要一
段时间慢慢处理。
【在 S*p 的大作中提到】
: 上个月7号在ATT官网预订的，两个电话都用了一个多月了，到现在只Charge了一个手机
: 的钱。
段时间慢慢处理。
【在 S*p 的大作中提到】
: 上个月7号在ATT官网预订的，两个电话都用了一个多月了，到现在只Charge了一个手机
: 的钱。
n*w
16 楼
我没有做过大提，我原来有次做miniprep发现产量低是因为我的wash buffer没有加
EtOH.
EtOH.
l*r
17 楼
哈哈，赞
【在 w****r 的大作中提到】
: 话说有一副画，一条搁浅的渔船孤零零的斜躺着喘息，看上去一片萧瑟凋零。 凑近看
: 右下角一行小字:the tide will always come back
【在 w****r 的大作中提到】
: 话说有一副画，一条搁浅的渔船孤零零的斜躺着喘息，看上去一片萧瑟凋零。 凑近看
: 右下角一行小字:the tide will always come back
j*a
18 楼
17k的这个你小提过吗？确定bacteria里扩增没问题？有时候太大somehow bacteria不
扩增。我的
意思是可能就没产生很多智力。
【在 n**********s 的大作中提到】
: 刚engineer了一个bluescrppit 的质粒，大约17k，用Qiagen的常规大抽试剂盒，就是
: 过柱子那种，结果试了几次yield都很低，只有三十来微克，不知道原因是啥，同样的
: 试剂盒抽14k的质粒还好好的，
: 变懒了，上来问问大家这种stupid的问题，怎么能提高yield？换试剂盒还是自己配试
: 剂抽提？
扩增。我的
意思是可能就没产生很多智力。
【在 n**********s 的大作中提到】
: 刚engineer了一个bluescrppit 的质粒，大约17k，用Qiagen的常规大抽试剂盒，就是
: 过柱子那种，结果试了几次yield都很低，只有三十来微克，不知道原因是啥，同样的
: 试剂盒抽14k的质粒还好好的，
: 变懒了，上来问问大家这种stupid的问题，怎么能提高yield？换试剂盒还是自己配试
: 剂抽提？
w*r
19 楼
居然不是哼
【在 l*r 的大作中提到】
: 哈哈，赞
【在 l*r 的大作中提到】
: 哈哈，赞
Z*o
20 楼
换E.coli菌株吧，记得有一种菌株专门适合表达大的质粒，比如BAC，YAC库之类的。一
般的E.coli菌株表达12k以上的质粒都比较吃力。
般的E.coli菌株表达12k以上的质粒都比较吃力。
l*y
21 楼
me 啊 me 啊。
【在 l*r 的大作中提到】
: 这是谁拿来做签名档还是进版画面来着？我肿么这么健忘
【在 l*r 的大作中提到】
: 这是谁拿来做签名档还是进版画面来着？我肿么这么健忘
n*s
22 楼
不好意思是没详细说，
是连接克隆，转化用的XL-10 gold，扩增没有什么问题，小抽都能抽到质粒，鉴定也正
确。
唯一不同的是，小抽的时候没用Qiagen的miniprep柱子，因为抽不出来，我都是用的S1
TO S3 buffer加乙醇沉淀提出来的，10k以上的质粒我基本上用后者
现在想既然扩增没问题，是不是同样的方法大抽也可行？不过柱子是不是杂质很多？以
前听人说，很久前大家用什么纱布之类的用于大抽时过滤用？
【在 j*****a 的大作中提到】
: 17k的这个你小提过吗？确定bacteria里扩增没问题？有时候太大somehow bacteria不
: 扩增。我的
: 意思是可能就没产生很多智力。
是连接克隆，转化用的XL-10 gold，扩增没有什么问题，小抽都能抽到质粒，鉴定也正
确。
唯一不同的是，小抽的时候没用Qiagen的miniprep柱子，因为抽不出来，我都是用的S1
TO S3 buffer加乙醇沉淀提出来的，10k以上的质粒我基本上用后者
现在想既然扩增没问题，是不是同样的方法大抽也可行？不过柱子是不是杂质很多？以
前听人说，很久前大家用什么纱布之类的用于大抽时过滤用？
【在 j*****a 的大作中提到】
: 17k的这个你小提过吗？确定bacteria里扩增没问题？有时候太大somehow bacteria不
: 扩增。我的
: 意思是可能就没产生很多智力。
l*y
23 楼
是啊是啊，心种种故色种种，热闹的潮总在，落潮的是心。
【在 l*r 的大作中提到】
: 话说热闹一直在啊，是河马落潮了
【在 l*r 的大作中提到】
: 话说热闹一直在啊，是河马落潮了
h*y
24 楼
Invitrogen PureLink HiPure Plasmid Filter Midi⁄Maxi Kit
l*r
25 楼
煞风景，正努力的想是哪个mm
【在 l***y 的大作中提到】
: me 啊 me 啊。
【在 l***y 的大作中提到】
: me 啊 me 啊。
n*e
26 楼
我的质粒23kb，qiagen小提大提都没有问题。但是xl-10gold细胞在我这不行，我用的
是stratagene的sure cell。
S1
【在 n**********s 的大作中提到】
: 不好意思是没详细说，
: 是连接克隆，转化用的XL-10 gold，扩增没有什么问题，小抽都能抽到质粒，鉴定也正
: 确。
: 唯一不同的是，小抽的时候没用Qiagen的miniprep柱子，因为抽不出来，我都是用的S1
: TO S3 buffer加乙醇沉淀提出来的，10k以上的质粒我基本上用后者
: 现在想既然扩增没问题，是不是同样的方法大抽也可行？不过柱子是不是杂质很多？以
: 前听人说，很久前大家用什么纱布之类的用于大抽时过滤用？
是stratagene的sure cell。
S1
【在 n**********s 的大作中提到】
: 不好意思是没详细说，
: 是连接克隆，转化用的XL-10 gold，扩增没有什么问题，小抽都能抽到质粒，鉴定也正
: 确。
: 唯一不同的是，小抽的时候没用Qiagen的miniprep柱子，因为抽不出来，我都是用的S1
: TO S3 buffer加乙醇沉淀提出来的，10k以上的质粒我基本上用后者
: 现在想既然扩增没问题，是不是同样的方法大抽也可行？不过柱子是不是杂质很多？以
: 前听人说，很久前大家用什么纱布之类的用于大抽时过滤用？
l*r
27 楼
且将余韵迎新客，莫要沽名学楚平
【在 l***y 的大作中提到】
: 是啊是啊，心种种故色种种，热闹的潮总在，落潮的是心。
【在 l***y 的大作中提到】
: 是啊是啊，心种种故色种种，热闹的潮总在，落潮的是心。
S*s
28 楼
最后洗脱的 buffer 你预热没？我做 BAC 的时候和他们的 Tech 谈过，据说这个柱子
提 BAC 都没问题，就是要把溶液一二三的量加倍，然后 elution buffer 加热到 65
度。
【在 n**********s 的大作中提到】
: 刚engineer了一个bluescrppit 的质粒，大约17k，用Qiagen的常规大抽试剂盒，就是
: 过柱子那种，结果试了几次yield都很低，只有三十来微克，不知道原因是啥，同样的
: 试剂盒抽14k的质粒还好好的，
: 变懒了，上来问问大家这种stupid的问题，怎么能提高yield？换试剂盒还是自己配试
: 剂抽提？
提 BAC 都没问题，就是要把溶液一二三的量加倍，然后 elution buffer 加热到 65
度。
【在 n**********s 的大作中提到】
: 刚engineer了一个bluescrppit 的质粒，大约17k，用Qiagen的常规大抽试剂盒，就是
: 过柱子那种，结果试了几次yield都很低，只有三十来微克，不知道原因是啥，同样的
: 试剂盒抽14k的质粒还好好的，
: 变懒了，上来问问大家这种stupid的问题，怎么能提高yield？换试剂盒还是自己配试
: 剂抽提？
l*y
29 楼
赞余韵啊。
上次伤到了。下辈子都透支了。
【在 l*r 的大作中提到】
: 且将余韵迎新客，莫要沽名学楚平
上次伤到了。下辈子都透支了。
【在 l*r 的大作中提到】
: 且将余韵迎新客，莫要沽名学楚平
s*s
30 楼
//nod,nod, 我也被专业人士教过要预热elution buffer
【在 S*****s 的大作中提到】
: 最后洗脱的 buffer 你预热没？我做 BAC 的时候和他们的 Tech 谈过，据说这个柱子
: 提 BAC 都没问题，就是要把溶液一二三的量加倍，然后 elution buffer 加热到 65
: 度。
【在 S*****s 的大作中提到】
: 最后洗脱的 buffer 你预热没？我做 BAC 的时候和他们的 Tech 谈过，据说这个柱子
: 提 BAC 都没问题，就是要把溶液一二三的量加倍，然后 elution buffer 加热到 65
: 度。
a*d
31 楼
My experience:
heating up the elution buffer;
after mixing the eluted product with isopropanol,store at -20 for couple
hours,or overnight,then centrifuge.
heating up the elution buffer;
after mixing the eluted product with isopropanol,store at -20 for couple
hours,or overnight,then centrifuge.
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