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在线等：问个real -time pcr仪器的使用问题

在线等：问个real -time pcr仪器的使用问题# Biology - 生物学

Q*i2011-03-06 08:03

1 楼

都在一个小区的townhouse,情况类似,学区都是全10分,但b的小学更好些
a 贵两万,3bed,只有一层,1600尺,主卧和另一个卧室挨着,但两个卧室和客厅都有golf
view,看到的高尔夫球场很漂亮,窗户被打碎也会由hoa出钱装
b 两层,2bed+一个其实和a的第三间卧室一样的den(只是没有装门和closet),1900尺,每层各一个
有walk in closet和bath的主卧,没有golf view,有一些upgrade,比如很多墙有整面的
镜子,可变亮度的skylight

W*n2011-03-06 08:03

2 楼

今天要做个real time pcr,测基因表达的变化（处理组相对于对照组），因为好久不用
这个仪器了，所以有一步骤有点忘记了：
我是用SYBR 染色，所以不用探针。请问在新打开的file里面应该是分析法法选择应该
是：
Absolute Quantification 还是下面的那个相对定量方法(ccCt) ？
我记得以前用的就是Absolute Quantification ，现在有点拿不准了。
谢谢啦

S*l2011-03-06 08:03

3 楼

A。 golf course是你们房子升值的最大动力

p*o2011-03-06 08:03

4 楼

哪个系统？如果是ABI的系统的话是deta-deta Ct,因为你是做relative expression

n*D2011-03-06 08:03

5 楼

贵一定会有贵的理由，选A

W*n2011-03-06 08:03

6 楼

是ABI 系统，7300机型。我记得以前也是做这个，记忆中好像是用 absolute
quantidication.,然后出来的数据结果自己用deta=deta Ct来处理。你很确定是用deta
-deta Ct吗？谢谢阿！

【在 p********o 的大作中提到】

: 哪个系统？如果是ABI的系统的话是deta-deta Ct,因为你是做relative expression

m*q2011-03-06 08:03

7 楼

为什么? 老美喜欢在golf course旁边?
随时会有球飞来,多危险啊

【在 S******l 的大作中提到】

: A。 golf course是你们房子升值的最大动力

n*w2011-03-06 08:03

8 楼

这种问题不应该问你实验室里做过的人吗？。。。。

p*o2011-03-06 08:03

9 楼

用absolute运行用relative处理也可以
SDS有一个bug,在relative的条件下不能加melting curve，所以我之前一直用absolute
来做relative
但是新版的SDS2.4已经修正了这个bug

t*a2011-03-06 08:03

10 楼

我一直都用Absolute Quantification for ABI 7400 and 7900. 得到Ct后再计算分析.

【在 W*********n 的大作中提到】

: 今天要做个real time pcr,测基因表达的变化（处理组相对于对照组），因为好久不用
: 这个仪器了，所以有一步骤有点忘记了：
: 我是用SYBR 染色，所以不用探针。请问在新打开的file里面应该是分析法法选择应该
: 是：
: Absolute Quantification 还是下面的那个相对定量方法(ccCt) ？
: 我记得以前用的就是Absolute Quantification ，现在有点拿不准了。
: 谢谢啦

W*n2011-03-06 08:03

11 楼

实验室做这个的人走人了，

【在 n***w 的大作中提到】

: 这种问题不应该问你实验室里做过的人吗？。。。。

W*n2011-03-06 08:03

12 楼

非常感谢！

absolute

【在 p********o 的大作中提到】

: 用absolute运行用relative处理也可以
: SDS有一个bug,在relative的条件下不能加melting curve，所以我之前一直用absolute
: 来做relative
: 但是新版的SDS2.4已经修正了这个bug

W*n2011-03-06 08:03

13 楼

我记得以前就用Absolute Quantification，当时好像还怀疑为何用它呢。
谢谢再次确认！那就这么做。

析.
??????

【在 t**a 的大作中提到】

: 我一直都用Absolute Quantification for ABI 7400 and 7900. 得到Ct后再计算分析.

L*O2011-03-06 08:03

14 楼

搭车问有没有人用STRATAGENE?

Z*52011-03-06 08:03

15 楼

我用的试剂是Brilliant® II SYBR® Green QPCR Master Mix，不过机器用的
是ABI 7500

【在 L**********O 的大作中提到】

: 搭车问有没有人用STRATAGENE?

d*u2011-03-06 08:03

16 楼

同鞋，貌似这里有些基本的东西不太清楚呀。
用ABSOLUTE还是RELATIVE要看你不同PRIMER的扩增效率。如果前期已经做过PRIMER的优
化，相比较的两个PRIMER的扩增效率大致相同，可以直接用RELATIVE QUANTIFICATION
。如果没有做优化，也不想花功夫做优化，可以用RELATIVE ABSOLUTE QUANTIFICATION
，就是两个PRIMER都分别做标准曲线，通过标准曲线转换出的数值进行RELATIVE比较。
单纯的ABSOLUTE QUANTIFICATION一般用得不多，在需要知道目标TEMPLATE在样品中准
确的量的时候用。
我猜大概你的情况是RELATIVE ABSOLUTE QUANTIFICATION吧，分别做标准曲线就可以了
。