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PCR如何将3段来源不同的片段连在一起，然后克隆？

PCR如何将3段来源不同的片段连在一起，然后克隆？# Biology - 生物学

h*y2011-09-19 07:09

1 楼

背景：刚拿到一个小公司的Offer,读不懂StockOption如何操作的。如下：
In addition, if you decide to join the Company, the Company grant you an
option to purchase 40,000 shares of the Company's Common Stock at a price
per share equal to the fair market value per share of the Common Stock on
the date of grant, as determined by the Company's Board of Directors in its
sole discretion at the time of grant.
25% of the shares subject to the option shall vest 12 months after the date
your vesting begins, subject to your continuing

y*z2011-09-19 07:09

2 楼

杨蓉好像在《我就是演员2》里边呼吁过，说多照顾一下30多岁的女演员，让她们有戏
拍，她们也不想一直装少女，但是行情如此，所以很艰难。
其实，数一数，国内中年女演员里边，真没几个演技好的。周迅算是一个眼神有戏的女
演员，结果这次也被《如懿传》里边无底线装嫩给坑惨了，打针打到脸浮肿，表情僵硬
，本来非常自然的双眼皮跟刚剌的一样，那么别扭。
往前说说，宋丹丹和张凯丽一直是中年挂的代表人物，可是这俩演技好吗？完全定式，
演谁都一样，宋丹丹一直是那样垮垮地走，张凯丽一直是夸张的台词。
往年轻里说说，秦岚这次在《延禧攻略》里边算是比较出彩的，但是演技好吗？真没觉
得，就是觉得中规中矩，炒作出来也不过就是温柔漂亮而已，跟演技不沾边。
刘涛比秦岚好点，孙俪比刘涛好点，但是孙俪现在感觉有时候也没那么爆发力了，当初
《甄嬛传》是个巅峰，感觉她一直跨越不过去。
所以，困扰大陆中年女演员的问题是，演技好的不红，新闻比较多的比较红的演技不好
。电影演员里边，章子怡算是一个标杆了，可是这两年也不拍戏了，挺可惜。

s*12011-09-19 07:09

3 楼

找一部九十年代有关中学生的电影
以前只看过片断，讲一中学男生体育课中一开始不敢跳马，后来终于战胜胆怯，完成跳
马项目。

z*c2011-09-19 07:09

4 楼

现在要把3个片段连在一起，然后克隆到一个载体里去。请教如何用PCR实现，尤其如何
设计引物，或者其它简便方法。
比如蛋白A的序列a，蛋白B的序列b，ab之间还要加一段另外的c，组成acb，顺序不能变
。abc都分别在3个不同的质粒里。

m*n2011-09-19 07:09

5 楼

its
date
Company,
vest
your
Option的意思就是在特定的时段内，你可以用特定的价格购买公司的股票。
选择权在你，你完全可以不买。

【在 h**y 的大作中提到】

: 背景：刚拿到一个小公司的Offer,读不懂StockOption如何操作的。如下：
: In addition, if you decide to join the Company, the Company grant you an
: option to purchase 40,000 shares of the Company's Common Stock at a price
: per share equal to the fair market value per share of the Common Stock on
: the date of grant, as determined by the Company's Board of Directors in its
: sole discretion at the time of grant.
: 25% of the shares subject to the option shall vest 12 months after the date
: your vesting begins, subject to your continuing

m*y2011-09-19 07:09

6 楼

怎么我的真实经历被拍成电影了

【在 s********1 的大作中提到】

: 找一部九十年代有关中学生的电影
: 以前只看过片断，讲一中学男生体育课中一开始不敢跳马，后来终于战胜胆怯，完成跳
: 马项目。

p*m2011-09-19 07:09

7 楼

设计引物的时候弄18－20bp的overlap each，三段分别pcr出来放到一起pcr一次就行了

【在 z*c 的大作中提到】

: 现在要把3个片段连在一起，然后克隆到一个载体里去。请教如何用PCR实现，尤其如何
: 设计引物，或者其它简便方法。
: 比如蛋白A的序列a，蛋白B的序列b，ab之间还要加一段另外的c，组成acb，顺序不能变
: 。abc都分别在3个不同的质粒里。

h*y2011-09-19 07:09

8 楼

明天问问他们现在卖多钱一股，难怪大家现在都用RSU了，没这么麻烦，给你就是你的
了。

d*t2011-09-19 07:09

9 楼

哈哈

【在 m*****y 的大作中提到】

: 怎么我的真实经历被拍成电影了

I*a2011-09-19 07:09

10 楼

先abc扩，
然后ac扩，
再acb扩，
3段放一起扩，有时候不容易到产物，
a,c,b太长，也不容易得到产物，

l*62011-09-19 07:09

11 楼

bless~请问LZ是什么专业的啊？

s*g2011-09-19 07:09

12 楼

http://movie.douban.com/subject/5244092/
是这个吗

r*72011-09-19 07:09

13 楼

INFUSION SYSTEM

p*i2011-09-19 07:09

14 楼

未上市公司是不可能发给你RSU的，只可能是stock option
通常，stock option的定价，会在每次董事会开完后有更新，也就是说你上班后的第一
次董事会会给你的stock option定价；如果是上市公司，一般按照董事会当天公开股票
交易价格收盘价。
上班满一年后，可以excercise的股票就从0%突然变成25%，但并不一定需要exercise。
在这之后，每个月都有1/48的stock option可exercise。而买入这些股票需要的金钱就
是当初董事会定价的价格*你想买入的股数。
看你的情况是一个非上市公司，只有公司上市后；或者你想离开公司的时候需要行权（
当然，离开时如果你不看好这个公司，或者上市公司股票价格跌破行权价，就没必要行
权了），否则期权有效期内（一般10年），没必要行权。

z*62011-09-19 07:09

15 楼

用overlapping primer(17,8bp overlap就够，总共35－40bp)，分别p出a, b, c，然后
混到一起用最外侧的两个引物就能搞定。。。
同2楼。。。

w*42011-09-19 07:09

16 楼

好像不是自己买的，是公司给的吧？

【在 m*****n 的大作中提到】

:
: its
: date
: Company,
: vest
: your
: Option的意思就是在特定的时段内，你可以用特定的价格购买公司的股票。
: 选择权在你，你完全可以不买。

l*s2011-09-19 07:09

17 楼

用clonetech 有个产品平端连接，

h*y2011-09-19 07:09

18 楼

谢谢phiphi的解释，现在明白多了。
搂主是学机械专业的。看着满版的ｇｏｏｇｌｅ，ｍｓ面试机会，学ＣＳ的不会明白这
年头学机械的找个工作有多难。
另外一个问题：
12 months after the date your vesting begins　这里是the date是开始上班的那天
吗？谢谢。

l*62011-09-19 07:09

19 楼

恭喜恭喜！

【在 h**y 的大作中提到】

: 谢谢phiphi的解释，现在明白多了。
: 搂主是学机械专业的。看着满版的ｇｏｏｇｌｅ，ｍｓ面试机会，学ＣＳ的不会明白这
: 年头学机械的找个工作有多难。
: 另外一个问题：
: 12 months after the date your vesting begins　这里是the date是开始上班的那天
: 吗？谢谢。