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ELISA请教

ELISA请教# Biology - 生物学

c*d2011-11-18 08:11

1 楼

有个蛋白在细胞表达过程中降解很厉害，不同的条件下表达也不同。我能用ELISA来检
测该蛋白在不同条件下的相对表达总量吗？用的是anti-peptide antibody，标准曲线
只用一抗二抗。
我觉得是不太合适的。
1. 抗体不能检测到失去epitope的蛋白
2. 保留epitope的蛋白在不同大小蛋白上面向有利抗体结合的构象几率不一样
3. 不同蛋白降解产物的结合孔板的亲和性不一样。
我的理解正确吗？请大家指点！谢谢！

M*n2011-11-18 08:11

2 楼

you are correct.

c*d2011-11-18 08:11

3 楼

那么要检测这样一个蛋白的表达量还有什么别的手段吗？

【在 M*****n 的大作中提到】

: you are correct.

w*e2011-11-18 08:11

4 楼

MS?

【在 c********d 的大作中提到】

: 那么要检测这样一个蛋白的表达量还有什么别的手段吗？

c*d2011-11-18 08:11

5 楼

从western blot来看，蛋白降解的碎片很多，ms图谱分析恐怕很复杂，何况我们手里也
没有什么标样对照。
现在我觉得靠谱一点有qPCR。还有什么别的吗？

【在 w******e 的大作中提到】

: MS?

w*e2011-11-18 08:11

6 楼

why qPCR? how do you know the correlation with protein degradation??

【在 c********d 的大作中提到】

: 从western blot来看，蛋白降解的碎片很多，ms图谱分析恐怕很复杂，何况我们手里也
: 没有什么标样对照。
: 现在我觉得靠谱一点有qPCR。还有什么别的吗？

w*e2011-11-18 08:11

7 楼

also, what's the story you want to make? is that related to one specific
degradation product or overall degradation extent? Can multiple epitope-
specific Abs help?

【在 c********d 的大作中提到】

c*d2011-11-18 08:11

8 楼

你说的也有道理。。。。
这好像也是检测mRNA手段的通病。

【在 w******e 的大作中提到】

: why qPCR? how do you know the correlation with protein degradation??

c*d2011-11-18 08:11

9 楼

嗯，我先前的描述是太简化了。
是这样的。我们lab有个transgenic mouse model, 有几个line，每个表达不一样。这
个transgene产物是分泌到骨头某个特殊结构里的，所以不容易normalize，而且容易降
解。所以怎么量化这个表达量很伤脑筋（其实要这个数据是属于吃多了撑得慌钱多了烧
手，跟project的目的没啥关系，做出来也不会放到paper里头去的）。
是别人的project，我私下里觉得使用的技术不是很合适，但是怕老板听了不高兴。

【在 w******e 的大作中提到】

: also, what's the story you want to make? is that related to one specific
: degradation product or overall degradation extent? Can multiple epitope-
: specific Abs help?