V*l
2 楼
一大早起来就可以看到明媚的太阳
忙了一天清扫房间，很多地方用消毒剂洗白
终于搞妥当了
整理出来一个干净的，宽敞的，可以歇息的家
感谢天秤小朋友，在我犹豫不决的时候，帮我做出留下的决定
似乎一切可以重新开始
离日座越来越远，月羊的性格让我贪婪的接受阳光
和狮子，射手的相处总让人觉得没心没肺，又很快乐，即使连分手，也变得不是那么沉
重。
我是不是更应该过月座主导的生活呢？ 这样生活总是蓬勃向上的，爽快的。虽然没有水
族人的纤细，委婉。却也少了纠结。
还有上升呢，它会不会成为最后的型。。
忙了一天清扫房间，很多地方用消毒剂洗白
终于搞妥当了
整理出来一个干净的，宽敞的，可以歇息的家
感谢天秤小朋友，在我犹豫不决的时候，帮我做出留下的决定
似乎一切可以重新开始
离日座越来越远，月羊的性格让我贪婪的接受阳光
和狮子，射手的相处总让人觉得没心没肺，又很快乐，即使连分手，也变得不是那么沉
重。
我是不是更应该过月座主导的生活呢？ 这样生活总是蓬勃向上的，爽快的。虽然没有水
族人的纤细，委婉。却也少了纠结。
还有上升呢，它会不会成为最后的型。。
m*r
3 楼
C*u
4 楼
最近抽RNA用nanodrop测浓度，发现260/230ratio很不稳定，有时很好有时很低（～0.5
），而260/280 ratio却一直很好。
我已经用70%的ETOH洗两次了，而且在extraction的时候尽量避免protein和pheno污染
了，用的也是分装的nuclease free的水，实在是百思不得其解。
请问大家低260/230ratio会影响之后的RT和qPCR吗？
谢谢
），而260/280 ratio却一直很好。
我已经用70%的ETOH洗两次了，而且在extraction的时候尽量避免protein和pheno污染
了，用的也是分装的nuclease free的水，实在是百思不得其解。
请问大家低260/230ratio会影响之后的RT和qPCR吗？
谢谢
i*l
5 楼
lol
p*t
6 楼
不错!
稍微提醒一点, 尽量少使用消毒剂什么的化学品, 健康
稍微提醒一点, 尽量少使用消毒剂什么的化学品, 健康
s*s
7 楼
怎么男的（有钱人）的照片也放上来了？
胆子好大啊
而且求保养的人对对方的相貌还很有要求？
胆子好大啊
而且求保养的人对对方的相貌还很有要求？
b*8
8 楼
没影响
a*9
9 楼
tg不敢干涉内政的
V*l
10 楼
偶然用下，能杀菌，心里还是踏实些啊。
你这是半夜起来灌水啊。。
【在 p**********t 的大作中提到】
: 不错!
: 稍微提醒一点, 尽量少使用消毒剂什么的化学品, 健康
你这是半夜起来灌水啊。。
【在 p**********t 的大作中提到】
: 不错!
: 稍微提醒一点, 尽量少使用消毒剂什么的化学品, 健康
B*o
11 楼
遇到过太低时有些sample RT不太好的情况，大多数情况下不影响
260/230太低说明你有其他溶剂的影响，多半是乙醇没有晾干。
我的做法是乙醇洗完以后用枪头吸掉所有乙醇，然后离心甩一下，再把剩下的乙醇吸掉
。晾干10-15min加水溶解。一般都应该在1.5以上
.5
【在 C*********u 的大作中提到】
: 最近抽RNA用nanodrop测浓度，发现260/230ratio很不稳定，有时很好有时很低（～0.5
: ），而260/280 ratio却一直很好。
: 我已经用70%的ETOH洗两次了，而且在extraction的时候尽量避免protein和pheno污染
: 了，用的也是分装的nuclease free的水，实在是百思不得其解。
: 请问大家低260/230ratio会影响之后的RT和qPCR吗？
: 谢谢
260/230太低说明你有其他溶剂的影响，多半是乙醇没有晾干。
我的做法是乙醇洗完以后用枪头吸掉所有乙醇，然后离心甩一下，再把剩下的乙醇吸掉
。晾干10-15min加水溶解。一般都应该在1.5以上
.5
【在 C*********u 的大作中提到】
: 最近抽RNA用nanodrop测浓度，发现260/230ratio很不稳定，有时很好有时很低（～0.5
: ），而260/280 ratio却一直很好。
: 我已经用70%的ETOH洗两次了，而且在extraction的时候尽量避免protein和pheno污染
: 了，用的也是分装的nuclease free的水，实在是百思不得其解。
: 请问大家低260/230ratio会影响之后的RT和qPCR吗？
: 谢谢
k*e
12 楼
胡说霸道， tg发了多少白皮书
【在 a****9 的大作中提到】
: tg不敢干涉内政的
【在 a****9 的大作中提到】
: tg不敢干涉内政的
F*e
13 楼
听说月羊很自我，不太考虑别人？
C*u
14 楼
谢谢你的suggestion
我就是按你这个做法的，在室温dry了差不多有15-20分钟了
我发现我的RNA sample浓度越低（20-50ng/ul），260/230 ratio也越低(0.4-0.6)。。。
【在 B******o 的大作中提到】
: 遇到过太低时有些sample RT不太好的情况，大多数情况下不影响
: 260/230太低说明你有其他溶剂的影响，多半是乙醇没有晾干。
: 我的做法是乙醇洗完以后用枪头吸掉所有乙醇，然后离心甩一下，再把剩下的乙醇吸掉
: 。晾干10-15min加水溶解。一般都应该在1.5以上
:
: .5
我就是按你这个做法的，在室温dry了差不多有15-20分钟了
我发现我的RNA sample浓度越低（20-50ng/ul），260/230 ratio也越低(0.4-0.6)。。。
【在 B******o 的大作中提到】
: 遇到过太低时有些sample RT不太好的情况，大多数情况下不影响
: 260/230太低说明你有其他溶剂的影响，多半是乙醇没有晾干。
: 我的做法是乙醇洗完以后用枪头吸掉所有乙醇，然后离心甩一下，再把剩下的乙醇吸掉
: 。晾干10-15min加水溶解。一般都应该在1.5以上
:
: .5
a*x
15 楼
这时候你想起党妈啦？
【在 l**********r 的大作中提到】
: 让他，，
【在 l**********r 的大作中提到】
: 让他，，
V*l
16 楼
嗯，当在竞争环境下，追求某个目标的时候，就不太考虑别人了，只想尽快达到目标。
在竞争中不考虑其他人也没有错，因为大家都是有目标的，我们没有时间留意别人，更
不会给别人下绊脚石。
【在 F**********e 的大作中提到】
: 听说月羊很自我，不太考虑别人？
在竞争中不考虑其他人也没有错，因为大家都是有目标的，我们没有时间留意别人，更
不会给别人下绊脚石。
【在 F**********e 的大作中提到】
: 听说月羊很自我，不太考虑别人？
l*1
17 楼
RE LZ 我就是按你这个做法的，在室温dry了差不多有15-20分钟了
How to put your RNA extraction last process 1.5ml tube for drying?
I mean you put it likes a "U" or "upset U" or "C" or "left direction C"
and on what material? i mean lab tissue paper or not?
RNase free environment including atmosphere You Sure?
plus no proteins contamination You sure too?
htp://www.flychip.org.uk/protocols/gene_expression/rna_qc.pdf
。。
【在 C*********u 的大作中提到】
: 谢谢你的suggestion
: 我就是按你这个做法的，在室温dry了差不多有15-20分钟了
: 我发现我的RNA sample浓度越低（20-50ng/ul），260/230 ratio也越低(0.4-0.6)。。。
How to put your RNA extraction last process 1.5ml tube for drying?
I mean you put it likes a "U" or "upset U" or "C" or "left direction C"
and on what material? i mean lab tissue paper or not?
RNase free environment including atmosphere You Sure?
plus no proteins contamination You sure too?
htp://www.flychip.org.uk/protocols/gene_expression/rna_qc.pdf
。。
【在 C*********u 的大作中提到】
: 谢谢你的suggestion
: 我就是按你这个做法的，在室温dry了差不多有15-20分钟了
: 我发现我的RNA sample浓度越低（20-50ng/ul），260/230 ratio也越低(0.4-0.6)。。。
a*9
18 楼
那些都是废话吧
【在 k********e 的大作中提到】
: 胡说霸道， tg发了多少白皮书
【在 k********e 的大作中提到】
: 胡说霸道， tg发了多少白皮书
F*e
19 楼
那倒是，月羊一般都比较坦荡。只是有的时候，不是竞争的情形也被他们当做了竞争。
【在 V***l 的大作中提到】
: 嗯，当在竞争环境下，追求某个目标的时候，就不太考虑别人了，只想尽快达到目标。
: 在竞争中不考虑其他人也没有错，因为大家都是有目标的，我们没有时间留意别人，更
: 不会给别人下绊脚石。
【在 V***l 的大作中提到】
: 嗯，当在竞争环境下，追求某个目标的时候，就不太考虑别人了，只想尽快达到目标。
: 在竞争中不考虑其他人也没有错，因为大家都是有目标的，我们没有时间留意别人，更
: 不会给别人下绊脚石。
n*0
20 楼
我也是这种情况，不过好像没有关系，的确浓度越低ratio越不好，不知道为什么。不
是说不能晾太久么？否则溶不了么？我都是溶了又在60度加热10min，不知道这样是不
是不好。你用什么方法提RNA？
而且我觉得qPCR的误差特别大。相同样品每次做出来都不太一样，biological
replicates就更没准了，除非差异非常明显。不知道大家有没有同感，还是我个人的问
题？
.5
【在 C*********u 的大作中提到】
: 最近抽RNA用nanodrop测浓度，发现260/230ratio很不稳定，有时很好有时很低（～0.5
: ），而260/280 ratio却一直很好。
: 我已经用70%的ETOH洗两次了，而且在extraction的时候尽量避免protein和pheno污染
: 了，用的也是分装的nuclease free的水，实在是百思不得其解。
: 请问大家低260/230ratio会影响之后的RT和qPCR吗？
: 谢谢
是说不能晾太久么？否则溶不了么？我都是溶了又在60度加热10min，不知道这样是不
是不好。你用什么方法提RNA？
而且我觉得qPCR的误差特别大。相同样品每次做出来都不太一样，biological
replicates就更没准了，除非差异非常明显。不知道大家有没有同感，还是我个人的问
题？
.5
【在 C*********u 的大作中提到】
: 最近抽RNA用nanodrop测浓度，发现260/230ratio很不稳定，有时很好有时很低（～0.5
: ），而260/280 ratio却一直很好。
: 我已经用70%的ETOH洗两次了，而且在extraction的时候尽量避免protein和pheno污染
: 了，用的也是分装的nuclease free的水，实在是百思不得其解。
: 请问大家低260/230ratio会影响之后的RT和qPCR吗？
: 谢谢
r*v
21 楼
这得看格格毕业后是不是也要EB-2
V*l
22 楼
mm 接触的月羊多啊？
是这样，如果自我的方式最后能对社会做出贡献就好了。
月羊绝对要给自己营造一个小空间，有时候连爱人都亲近不了。我们属于小时候受妈妈
溺爱的一类，大活小事不会干。很奇怪却变得非常独立。
【在 F**********e 的大作中提到】
: 那倒是，月羊一般都比较坦荡。只是有的时候，不是竞争的情形也被他们当做了竞争。
是这样，如果自我的方式最后能对社会做出贡献就好了。
月羊绝对要给自己营造一个小空间，有时候连爱人都亲近不了。我们属于小时候受妈妈
溺爱的一类，大活小事不会干。很奇怪却变得非常独立。
【在 F**********e 的大作中提到】
: 那倒是，月羊一般都比较坦荡。只是有的时候，不是竞争的情形也被他们当做了竞争。
m*m
23 楼
我用phenol／chloroform提取时也常有这个问题，最后发现两相分离时要格外小心，离
心两次就好了。
用RNeasy倒是没这个问题，不过我第二次洗离心后转移到干的collection tube里，再
离心至少两分钟，如果是Nano column的话离心5分钟。
心两次就好了。
用RNeasy倒是没这个问题，不过我第二次洗离心后转移到干的collection tube里，再
离心至少两分钟，如果是Nano column的话离心5分钟。
S*r
24 楼
gege早绿了
特殊人才
【在 r****v 的大作中提到】
: 这得看格格毕业后是不是也要EB-2
特殊人才
【在 r****v 的大作中提到】
: 这得看格格毕业后是不是也要EB-2
o*r
25 楼
放在hood里dry，快很多！
。。
【在 C*********u 的大作中提到】
: 谢谢你的suggestion
: 我就是按你这个做法的，在室温dry了差不多有15-20分钟了
: 我发现我的RNA sample浓度越低（20-50ng/ul），260/230 ratio也越低(0.4-0.6)。。。
。。
【在 C*********u 的大作中提到】
: 谢谢你的suggestion
: 我就是按你这个做法的，在室温dry了差不多有15-20分钟了
: 我发现我的RNA sample浓度越低（20-50ng/ul），260/230 ratio也越低(0.4-0.6)。。。
s*e
26 楼
Do you call your dad this way? Come on, we are educated. At least,be polite
and professional!
【在 l**********r 的大作中提到】
: 让他，，
and professional!
【在 l**********r 的大作中提到】
: 让他，，
k*o
27 楼
qPCR不应该这样的，机器做校正了吗？
【在 n****0 的大作中提到】
: 我也是这种情况，不过好像没有关系，的确浓度越低ratio越不好，不知道为什么。不
: 是说不能晾太久么？否则溶不了么？我都是溶了又在60度加热10min，不知道这样是不
: 是不好。你用什么方法提RNA？
: 而且我觉得qPCR的误差特别大。相同样品每次做出来都不太一样，biological
: replicates就更没准了，除非差异非常明显。不知道大家有没有同感，还是我个人的问
: 题？
:
: .5
P*s
28 楼
come on~~, we are on mitbbs
polite
【在 s*******e 的大作中提到】
: Do you call your dad this way? Come on, we are educated. At least,be polite
: and professional!
polite
【在 s*******e 的大作中提到】
: Do you call your dad this way? Come on, we are educated. At least,be polite
: and professional!
k*o
29 楼
乙醇用tip抽走，然后风干5－10分钟，从未出过问题。
a*9
30 楼
re这个
那么认真都是驴卡害的吧
【在 P*****s 的大作中提到】
: come on~~, we are on mitbbs
:
: polite
那么认真都是驴卡害的吧
【在 P*****s 的大作中提到】
: come on~~, we are on mitbbs
:
: polite
n*0
31 楼
做过了，三个在同一板上的technical replicates还可以，如果Ct能在30以下的话。不
过我的确发现有些边缘位置的孔总是和另两个不一样。但是biological replicates就
不行了，同样样品做两次也不一样。这次差5倍，下次差10倍 （relative fold change
），甚至有时趋势还不一样。可能是我提取RNA的问题。因为我要分离tissue，取样品
时间比较长，虽然我都是尽量快速的放到液氮里。几分钟的时间，转录水平会有很大变
化么？
【在 k****o 的大作中提到】
: 乙醇用tip抽走，然后风干5－10分钟，从未出过问题。
过我的确发现有些边缘位置的孔总是和另两个不一样。但是biological replicates就
不行了，同样样品做两次也不一样。这次差5倍，下次差10倍 （relative fold change
），甚至有时趋势还不一样。可能是我提取RNA的问题。因为我要分离tissue，取样品
时间比较长，虽然我都是尽量快速的放到液氮里。几分钟的时间，转录水平会有很大变
化么？
【在 k****o 的大作中提到】
: 乙醇用tip抽走，然后风干5－10分钟，从未出过问题。
s*e
32 楼
Exactly. This is a public forum. We should behave like adults.
l*1
33 楼
RE: >我的确发现有些边缘位置的孔总是和另两个不一样
of course 96 well plate not all wells have same temperature conditions
during whole qPCR temp
controlling process. So if could avoid those 边缘位置的wells that is better.
change
【在 n****0 的大作中提到】
: 做过了，三个在同一板上的technical replicates还可以，如果Ct能在30以下的话。不
: 过我的确发现有些边缘位置的孔总是和另两个不一样。但是biological replicates就
: 不行了，同样样品做两次也不一样。这次差5倍，下次差10倍 （relative fold change
: ），甚至有时趋势还不一样。可能是我提取RNA的问题。因为我要分离tissue，取样品
: 时间比较长，虽然我都是尽量快速的放到液氮里。几分钟的时间，转录水平会有很大变
: 化么？
of course 96 well plate not all wells have same temperature conditions
during whole qPCR temp
controlling process. So if could avoid those 边缘位置的wells that is better.
change
【在 n****0 的大作中提到】
: 做过了，三个在同一板上的technical replicates还可以，如果Ct能在30以下的话。不
: 过我的确发现有些边缘位置的孔总是和另两个不一样。但是biological replicates就
: 不行了，同样样品做两次也不一样。这次差5倍，下次差10倍 （relative fold change
: ），甚至有时趋势还不一样。可能是我提取RNA的问题。因为我要分离tissue，取样品
: 时间比较长，虽然我都是尽量快速的放到液氮里。几分钟的时间，转录水平会有很大变
: 化么？
f*r
34 楼
让州长把那个格老参议员位置废了就行。
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