如何得到ＧＦＰ和我们ｋｏ的ｇｅｎｅ交叉的老鼠？# Biology - 生物学
z*i
1 楼
贷款２４０，０００,比如我最终２０年付清，是３０年ｆｉｘｅｄ,然后２０年付清，还是直接申请２０年呢？因为直接申请２０年，毕竟每个月付的多些，另外，还有将近
２－３万想用ｈｅｌｏｃｋ,并且尽快付清。
多谢回复！
２－３万想用ｈｅｌｏｃｋ,并且尽快付清。
多谢回复！
s*h
2 楼
很多东西都说的非常有社会价值意义，而且这几年拍的尤为是在抨击财阀。韩国是个财
阀性的那种经济体制和政治体制的那种类型。所以说大家是真的很努力的在抨击自己的
国家的状态啊。
然后大多数的韩国的媒体分为两种。一种是娱乐大众的给年轻人看的，这一波年轻人的
文明开化的慢也不知道自己的未来是什么。国家要求什么就是什么的那种方式了。但是
另外一边就是岁数大的人，生活下去有了生活的经验，大多数的人都在这个阶层，所以
看这种电影觉得更有实感更懂得生活的压力和痛苦。这么想想韩国的分层还真的是很有
客观的数据支持，跟咱们国内不一样啊。国内反而分层更没意义，因为都是愚民，真的
懂事的早就滚蛋了，或者说早就不说话了。发声的都是傻逼吧。
所以说搞不好我觉得韩国人民反而能比咱们更容易发现问题的本质差距。所以我觉得这
样挺好的。以后早晚有一个民族是要崛起的，就这个文化建设我觉得韩国可能能走在前
面了。
阀性的那种经济体制和政治体制的那种类型。所以说大家是真的很努力的在抨击自己的
国家的状态啊。
然后大多数的韩国的媒体分为两种。一种是娱乐大众的给年轻人看的，这一波年轻人的
文明开化的慢也不知道自己的未来是什么。国家要求什么就是什么的那种方式了。但是
另外一边就是岁数大的人，生活下去有了生活的经验，大多数的人都在这个阶层，所以
看这种电影觉得更有实感更懂得生活的压力和痛苦。这么想想韩国的分层还真的是很有
客观的数据支持，跟咱们国内不一样啊。国内反而分层更没意义，因为都是愚民，真的
懂事的早就滚蛋了，或者说早就不说话了。发声的都是傻逼吧。
所以说搞不好我觉得韩国人民反而能比咱们更容易发现问题的本质差距。所以我觉得这
样挺好的。以后早晚有一个民族是要崛起的，就这个文化建设我觉得韩国可能能走在前
面了。
m*o
3 楼
实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
谢谢回复！
nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
谢谢回复！
p*n
4 楼
不喜欢韩国的电影没什么意思
s*y
5 楼
一般而言是可以的，除非非常不凑巧的是你的那个基因正好和整合后的GFP
位置在同一个染色体上。
GFP
gene
【在 m***o 的大作中提到】
: 实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
: nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
: 果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
: but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
: A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
: A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
: 因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
: 谢谢回复！
位置在同一个染色体上。
GFP
gene
【在 m***o 的大作中提到】
: 实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
: nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
: 果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
: but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
: A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
: A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
: 因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
: 谢谢回复！
q*3
6 楼
韩国的政治题材多，但是相对的其实唤醒人的也就那么几部电影
D*a
7 楼
你A+/- x A+/-只有四分之一几率得到A-/-, 如果再加上GFP +/0; A+/-之间互相交配，
更难了。而且交出来老鼠很乱，有的是GFP +/+有的是GFP +/0, 有的是GFP 0/0，你现
有的genotype protocol能区分开GFP +/+和 GFP +/0吗？
而且GFP一个copy和2个copy，有可能后期细胞里面GFP的颜色深浅都不一样。很有可能
影响你的判断。如果你只用单copy GFP，那么得到的老鼠又少了。
为了提高效率，你可以把GFP交到纯合GFP +/+; A+/-，然后用它们之间互相交配。但是
要注意一个问题，一定要确定GFP +/+老鼠要没有表型才行。
更难了。而且交出来老鼠很乱，有的是GFP +/+有的是GFP +/0, 有的是GFP 0/0，你现
有的genotype protocol能区分开GFP +/+和 GFP +/0吗？
而且GFP一个copy和2个copy，有可能后期细胞里面GFP的颜色深浅都不一样。很有可能
影响你的判断。如果你只用单copy GFP，那么得到的老鼠又少了。
为了提高效率，你可以把GFP交到纯合GFP +/+; A+/-，然后用它们之间互相交配。但是
要注意一个问题，一定要确定GFP +/+老鼠要没有表型才行。
k*9
8 楼
看了辩护人，还没看计程车司机，一个民族可以这样直面自己曾经的黑暗面确实可敬，
不像对面咳咳咳……
不过韩国到现在的总统几乎无一例外都没好下场，他们自己是不是已经习惯了自黑？
不像对面咳咳咳……
不过韩国到现在的总统几乎无一例外都没好下场，他们自己是不是已经习惯了自黑？
s*y
9 楼
在他们的实验里，貌似并不关心是否GFP +/+和 GFP +/0 吧？只要随便弄出一个
有标记的就行了。
【在 D*a 的大作中提到】
: 你A+/- x A+/-只有四分之一几率得到A-/-, 如果再加上GFP +/0; A+/-之间互相交配，
: 更难了。而且交出来老鼠很乱，有的是GFP +/+有的是GFP +/0, 有的是GFP 0/0，你现
: 有的genotype protocol能区分开GFP +/+和 GFP +/0吗？
: 而且GFP一个copy和2个copy，有可能后期细胞里面GFP的颜色深浅都不一样。很有可能
: 影响你的判断。如果你只用单copy GFP，那么得到的老鼠又少了。
: 为了提高效率，你可以把GFP交到纯合GFP +/+; A+/-，然后用它们之间互相交配。但是
: 要注意一个问题，一定要确定GFP +/+老鼠要没有表型才行。
有标记的就行了。
【在 D*a 的大作中提到】
: 你A+/- x A+/-只有四分之一几率得到A-/-, 如果再加上GFP +/0; A+/-之间互相交配，
: 更难了。而且交出来老鼠很乱，有的是GFP +/+有的是GFP +/0, 有的是GFP 0/0，你现
: 有的genotype protocol能区分开GFP +/+和 GFP +/0吗？
: 而且GFP一个copy和2个copy，有可能后期细胞里面GFP的颜色深浅都不一样。很有可能
: 影响你的判断。如果你只用单copy GFP，那么得到的老鼠又少了。
: 为了提高效率，你可以把GFP交到纯合GFP +/+; A+/-，然后用它们之间互相交配。但是
: 要注意一个问题，一定要确定GFP +/+老鼠要没有表型才行。
D*a
10 楼
但是如果蛋白不一样多，后期拍照片的时候荧光强度很难调啊？难道每张片子参数都不
一样。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 在他们的实验里，貌似并不关心是否GFP +/+和 GFP +/0 吧？只要随便弄出一个
: 有标记的就行了。
一样。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 在他们的实验里，貌似并不关心是否GFP +/+和 GFP +/0 吧？只要随便弄出一个
: 有标记的就行了。
s*y
11 楼
我看他们其实就是想弄到一个有荧光的老鼠，然后把那个老鼠的细胞弄出来
打到nude mice 里面去，所以只要不把不同荧光老鼠里面的细胞混到一起用，
就不会有这个强度不一致的问题了
【在 D*a 的大作中提到】
: 但是如果蛋白不一样多，后期拍照片的时候荧光强度很难调啊？难道每张片子参数都不
: 一样。。。
打到nude mice 里面去，所以只要不把不同荧光老鼠里面的细胞混到一起用，
就不会有这个强度不一致的问题了
【在 D*a 的大作中提到】
: 但是如果蛋白不一样多，后期拍照片的时候荧光强度很难调啊？难道每张片子参数都不
: 一样。。。
D*a
12 楼
总不能只打一只啊
反正我就是提供思路，楼主不关注就最好～
不过gfp+- 交配还是不如gfp++交配效率高。但是前期实验没有必要等两代就是了。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我看他们其实就是想弄到一个有荧光的老鼠，然后把那个老鼠的细胞弄出来
: 打到nude mice 里面去，所以只要不把不同荧光老鼠里面的细胞混到一起用，
: 就不会有这个强度不一致的问题了
反正我就是提供思路，楼主不关注就最好～
不过gfp+- 交配还是不如gfp++交配效率高。但是前期实验没有必要等两代就是了。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我看他们其实就是想弄到一个有荧光的老鼠，然后把那个老鼠的细胞弄出来
: 打到nude mice 里面去，所以只要不把不同荧光老鼠里面的细胞混到一起用，
: 就不会有这个强度不一致的问题了
s*r
13 楼
in vitro转染你肯定影响分化？
等你的老鼠杂出来，搞不好一年都过去了。
为什么不先试病毒。
实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
谢谢回复！
【在 m***o 的大作中提到】
: 实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
: nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
: 果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
: but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
: A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
: A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
: 因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
: 谢谢回复！
等你的老鼠杂出来，搞不好一年都过去了。
为什么不先试病毒。
实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
谢谢回复！
【在 m***o 的大作中提到】
: 实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
: nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
: 果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
: but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
: A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
: A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
: 因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
: 谢谢回复！
m*5
14 楼
不要一年吧……半年
in vitro 转染分化的可能性太大了吧，很多细胞一dissociate就分化，别说转染了
GFP
gene
【在 s******r 的大作中提到】
: in vitro转染你肯定影响分化？
: 等你的老鼠杂出来，搞不好一年都过去了。
: 为什么不先试病毒。
:
: 实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
: nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
: 果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
: but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
: A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
: A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
in vitro 转染分化的可能性太大了吧，很多细胞一dissociate就分化，别说转染了
GFP
gene
【在 s******r 的大作中提到】
: in vitro转染你肯定影响分化？
: 等你的老鼠杂出来，搞不好一年都过去了。
: 为什么不先试病毒。
:
: 实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
: nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
: 果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
: but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
: A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
: A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
m*o
15 楼
谢谢大家的讨论。竟然要至少半年！
谢谢DUA，你说得正是我不懂的。是不太关注是否GFP强度一致，只要证明打进去的细胞
分化的组织是我们打进去的不是老鼠本身的就可以。
我现在分离出来的细胞split一次就分化明显降低，查文献没人用病毒来标记，不过如
果需要这么长时间，我还是试试病毒然后in vitro诱导分化看看。
我还是跟老板再讨论讨论。
谢谢DUA，你说得正是我不懂的。是不太关注是否GFP强度一致，只要证明打进去的细胞
分化的组织是我们打进去的不是老鼠本身的就可以。
我现在分离出来的细胞split一次就分化明显降低，查文献没人用病毒来标记，不过如
果需要这么长时间，我还是试试病毒然后in vitro诱导分化看看。
我还是跟老板再讨论讨论。
a*x
16 楼
更快的方法是用Talen或者ZFN knock-in GFP，我们做过不会影响ES分化的。还可以
knock-in在gene A的locus同是做knockout,这样连knockout老鼠都不用了。
GFP
gene
【在 m***o 的大作中提到】
: 实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
: nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
: 果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
: but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
: A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
: A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
: 因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
: 谢谢回复！
knock-in在gene A的locus同是做knockout,这样连knockout老鼠都不用了。
GFP
gene
【在 m***o 的大作中提到】
: 实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
: nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
: 果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
: but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
: A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
: A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
: 因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
: 谢谢回复！
h*n
17 楼
1. A-/- 不能生育是啥意思? 公母都不行吗?
2. A+/- x GFP ---> A+/-;GFP (1/4) x A+/- --- A-/-;GFP (1/8), 这里GFP都是
heterozygous. 最然1/8的比例低了点, 你弄个20 breeding pair, genotyping的时候
辛苦一点, 应该问题不大.
GFP
gene
【在 m***o 的大作中提到】
: 实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
: nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
: 果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
: but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
: A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
: A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
: 因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
: 谢谢回复！
2. A+/- x GFP ---> A+/-;GFP (1/4) x A+/- --- A-/-;GFP (1/8), 这里GFP都是
heterozygous. 最然1/8的比例低了点, 你弄个20 breeding pair, genotyping的时候
辛苦一点, 应该问题不大.
GFP
gene
【在 m***o 的大作中提到】
: 实验室用ｇｅｎｅ（Ａ）ｋｏ的老鼠，我现在想分离一些原代细胞和干细胞再打回到
: nude mice里去。所以想用ＧＦＰ或者luciferase来标记这些细胞，但是分离的细胞如
: 果in vitro转染的话可能影响分化，所以想得到A-/- GFP mice.
: but A-/- 不能生育，所以必须用Ａ hetero（－／＋)来交配GFP wt,这样可以得到GFP
: A-/+. 然后用得到的GFP A-/+ 之间互相交配，可以得到GFP A-/-的老鼠吗？就是gene
: A KO 但是同时是ＧＦＰ＋的老鼠？
: 因为没做过动物，所以不知方法可行吗？
: 谢谢回复！
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