Redian新闻
>
help! quantification of immunofluorescence
avatar
help! quantification of immunofluorescence# Biology - 生物学
c*g
1
三个推荐信应该用哪一个?
1. 本校紧密合作系大牛,讲席(chair)教授,临床系科研副主任 MD PhD

优点,确实是大牛,引用好几万
缺点:1) 不是一个专业但非常相关,
缺点:2) 对我了解,但不是非常熟悉,估计推荐信写的很平淡
2. 本校本系前系主任,荣誉退休教授, MD PhD
优点:本系本专业,
缺点:1) 已退休--Emeritus ,但还行医,做研究,来office
缺点:2) 对我了解,但不是非常熟悉,估计推荐信写的很平淡 --这一点和推荐人1
差不多
3. 本校本系assistant professor, MD
优点:对我非常熟悉,一起紧密工作,推荐信可能写的很好,很生动
缺点:年轻,资历浅,学术一般
如果这三个人里面只用一个,应该选哪一个?
非常感谢!
avatar
z*e
2
周末在朋友家看到一只漂亮的狗狗~~
avatar
L*g
3
为什么不看看六道的历史?
从两道,到三道,
三道到六道,到底是人的说法变了,还是自然界的宇宙法则变了?
我中华道教在佛教传入之前,有地狱概念吗?
有畜生道概念吗?为什么佛教一来,就变了呢?
其实宗教都是历史,如果你能看清历史,就知道一些荒谬说法的由来。
avatar
z*a
4
pictures from confocal microscopy on a small sized tissue
have to do quantification using imageJ
got ~2 fold difference between 2 groups
questions:
are intensities of immunostaining are stoichiometric?
variation is so big; seems not believable and not reproducible even by
myself; so is the quantification of immunofluorescence
meaningful at all? especially in tissue instead of cultured cells
avatar
H*N
5
1
avatar
q*u
6


【在 z*****e 的大作中提到】
: 周末在朋友家看到一只漂亮的狗狗~~
avatar
r*n
7

请问你练内丹还是外丹?

【在 L******g 的大作中提到】
: 为什么不看看六道的历史?
: 从两道,到三道,
: 三道到六道,到底是人的说法变了,还是自然界的宇宙法则变了?
: 我中华道教在佛教传入之前,有地狱概念吗?
: 有畜生道概念吗?为什么佛教一来,就变了呢?
: 其实宗教都是历史,如果你能看清历史,就知道一些荒谬说法的由来。

avatar
n*w
8
IF you are just quantifying using the stacked images, I don't think it is
stoichiometric.
I found a difference in my images and I am trying to use Western blot to see
if I can see a similar difference.
avatar
b*i
9
因为你也养狗了呢

【在 z*****e 的大作中提到】
: 周末在朋友家看到一只漂亮的狗狗~~
avatar
b*d
10
轮回我觉得是真的,六道这个不清楚。

【在 L******g 的大作中提到】
: 为什么不看看六道的历史?
: 从两道,到三道,
: 三道到六道,到底是人的说法变了,还是自然界的宇宙法则变了?
: 我中华道教在佛教传入之前,有地狱概念吗?
: 有畜生道概念吗?为什么佛教一来,就变了呢?
: 其实宗教都是历史,如果你能看清历史,就知道一些荒谬说法的由来。

avatar
b*s
11
我觉得你这个还是换个方法吧。
免疫荧光一抗二抗结合效率在不同sample,不同处理都变化很大。甚至跟你incubation
的温度和时间都有关系。即便是完全一样的几组sample同样的处理,quantification都
是非常不准确的。
采用这样的方法意义不大,如果是指导下面的实验,你敢相信结果吗?
如果是要发表的数据,一定会被reviewers搞的很惨的。结果都是白花了力气。

【在 z*******a 的大作中提到】
: pictures from confocal microscopy on a small sized tissue
: have to do quantification using imageJ
: got ~2 fold difference between 2 groups
: questions:
: are intensities of immunostaining are stoichiometric?
: variation is so big; seems not believable and not reproducible even by
: myself; so is the quantification of immunofluorescence
: meaningful at all? especially in tissue instead of cultured cells

avatar
P*o
12
华丽丽~
avatar
l*t
13
六道轮回 都是真实的
佛教是真理 不是历史哲学
你必须经过至少三十年的打坐修禅 才能禅悟一些东西

【在 L******g 的大作中提到】
: 为什么不看看六道的历史?
: 从两道,到三道,
: 三道到六道,到底是人的说法变了,还是自然界的宇宙法则变了?
: 我中华道教在佛教传入之前,有地狱概念吗?
: 有畜生道概念吗?为什么佛教一来,就变了呢?
: 其实宗教都是历史,如果你能看清历史,就知道一些荒谬说法的由来。

avatar
z*a
14
多谢多谢
我是坚决不信immunofluorescence定量,尤其差别不是特别大。被逼的,没法呀。
你说“一定会被reviewers搞的很惨的”,会被咋搞?

incubation

【在 b******s 的大作中提到】
: 我觉得你这个还是换个方法吧。
: 免疫荧光一抗二抗结合效率在不同sample,不同处理都变化很大。甚至跟你incubation
: 的温度和时间都有关系。即便是完全一样的几组sample同样的处理,quantification都
: 是非常不准确的。
: 采用这样的方法意义不大,如果是指导下面的实验,你敢相信结果吗?
: 如果是要发表的数据,一定会被reviewers搞的很惨的。结果都是白花了力气。

avatar
z*e
15
没有啦~~
我从小和狗还挺无缘的!
不过这只实在可爱,我见犹怜!

【在 b********i 的大作中提到】
: 因为你也养狗了呢
avatar
b*s
16
如果你依据不可靠的方法得出结论,即便是文章里可有可无的小结论,reviewers都会
对你的可靠性产生怀疑。你可能需要做更多艰难的实验去证明这个小结论,甚至连带你
文章里的其他结论。

【在 z*******a 的大作中提到】
: 多谢多谢
: 我是坚决不信immunofluorescence定量,尤其差别不是特别大。被逼的,没法呀。
: 你说“一定会被reviewers搞的很惨的”,会被咋搞?
:
: incubation

avatar
a*r
17
pretty
avatar
z*a
18
thanks a lot
very small sized tissue, and only 5 positive cells. western is mission
impossible 哈

see

【在 n***w 的大作中提到】
: IF you are just quantifying using the stacked images, I don't think it is
: stoichiometric.
: I found a difference in my images and I am trying to use Western blot to see
: if I can see a similar difference.

avatar
d*g
19
照片很漂亮~狗狗也是
avatar
z*a
20
有道理。谢了

【在 b******s 的大作中提到】
: 如果你依据不可靠的方法得出结论,即便是文章里可有可无的小结论,reviewers都会
: 对你的可靠性产生怀疑。你可能需要做更多艰难的实验去证明这个小结论,甚至连带你
: 文章里的其他结论。

avatar
t*n
21
好可爱的狗 他主人每天梳毛好辛苦.....
avatar
z*a
22
再说, 确有很多很多paper show 1.5 fold difference. 还带星号,有统计意义。
我若搞不定,岂非被认为无能?

【在 b******s 的大作中提到】
: 如果你依据不可靠的方法得出结论,即便是文章里可有可无的小结论,reviewers都会
: 对你的可靠性产生怀疑。你可能需要做更多艰难的实验去证明这个小结论,甚至连带你
: 文章里的其他结论。

avatar
z*e
23
是啊,狗狗的毛特别好,既蓬松又顺滑。有个客人指着狗狗说,you must take more
than 1 hour to get ready every morning!

【在 t******n 的大作中提到】
: 好可爱的狗 他主人每天梳毛好辛苦.....
avatar
l*y
24
要定性需要 positive/negative controls and p-values. 要定量需要工作曲线,线性
段,quality controls。
萤光当然可以半定量,但工作量很大,很不reliable。比别的方法要难。而且哪怕你做
得很让人信服,按惯例还是要用另一种独立方法来验证。

【在 z*******a 的大作中提到】
: pictures from confocal microscopy on a small sized tissue
: have to do quantification using imageJ
: got ~2 fold difference between 2 groups
: questions:
: are intensities of immunostaining are stoichiometric?
: variation is so big; seems not believable and not reproducible even by
: myself; so is the quantification of immunofluorescence
: meaningful at all? especially in tissue instead of cultured cells

avatar
h*n
25
看着跟画报里的狗狗似的。帅狗。
avatar
D*a
26
免疫荧光半定量还是可以的吧,只要严格处理样品也是不可以的,很多这类的数据都发
表了啊。比如你sample处理要很一致,比如所有的切片同一天染色等等等等,然后拍照
片的时候必须都用同样参数,不能饱和,等等等等。。。然后拍照片的区域要大家都差
不多,等等等等。
有的时候很难用其他办法吧?比如我A蛋白cell specific KO了是否引起B蛋白上调,但
是我的组织里面有n种细胞,很可能有相邻细胞影响,我用WB或者mRNA分不出来到底是
谁啊,用流式分细胞是不是处理过程中会改变啊,。。。
avatar
y*u
27
扣里扣里

【在 t******n 的大作中提到】
: 好可爱的狗 他主人每天梳毛好辛苦.....
avatar
s*j
28
我怎么觉得很多时候是reviewer非要你定量地给个数字出来.

incubation

【在 b******s 的大作中提到】
: 我觉得你这个还是换个方法吧。
: 免疫荧光一抗二抗结合效率在不同sample,不同处理都变化很大。甚至跟你incubation
: 的温度和时间都有关系。即便是完全一样的几组sample同样的处理,quantification都
: 是非常不准确的。
: 采用这样的方法意义不大,如果是指导下面的实验,你敢相信结果吗?
: 如果是要发表的数据,一定会被reviewers搞的很惨的。结果都是白花了力气。

相关阅读
logo
联系我们隐私协议©2024 redian.news
Redian新闻
Redian.news刊载任何文章,不代表同意其说法或描述,仅为提供更多信息,也不构成任何建议。文章信息的合法性及真实性由其作者负责,与Redian.news及其运营公司无关。欢迎投稿,如发现稿件侵权,或作者不愿在本网发表文章,请版权拥有者通知本网处理。