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什么原因导致无法双向IP?

什么原因导致无法双向IP?# Biology - 生物学

w*t2012-07-15 07:07

1 楼

昨天发烧一天，今天一天没发烧了
但是很闹腾，不吃东西，哪怕是酸奶，吃一口就疼得哭
不是不愿意吃，是什么东西吃一口，就立刻疼得哭，就不肯再吃了
又不肯我看嘴里，隐隐约约看着里面是在冒牙了
本来有10颗牙齿，现在冒的是后面的大牙，还不止一颗
问题是，长牙会疼成这样吗？
明天需要去见医生吗？见医生真的很折腾

b*y2012-07-15 07:07

2 楼

好像6月下旬中国人EB2要用掉2800属于自己的年度名额,由于EB2-I在2005年3月还有
3000多人,我估计7月,8月优先日期很可能退回到2003-2004年,9月优先日期应该会大幅
前进,由于今年经济不好,9月优先日期要么跳到2005年4月1日(照顾2005年3月大量印度
EB2)或者跳到如2006年12月.具体优先日期视ROW还有多少剩余名额,ROW剩余名额应该接
近中印两国EB2在9月的优先日期前所有的EB2名额总数. 2010年EB2-C所有的批准数量可
能会略多于3000,那个国务院的变态肯定又会给印度7000-20000EB2的名额.

f*e2012-07-15 07:07

3 楼

常常看到有人说浇水要浇够、浇透，烦请指点一下到底怎样才算浇够、浇透。
谢谢。

g*t2012-07-15 07:07

4 楼

http://www.163jihuo.com/video/show_video_208.htm

p*g2012-07-15 07:07

5 楼

别的邮件都有这个功能(hotmail, yahoo), Gmail 没找到这个功能，有没有人知道？多
谢！

b*s2012-07-15 07:07

6 楼

老板想叫我接着实验室里一个学生做的课题，但听说她做的这个蛋白只能从一个方向被
pulldown，换了bait和pray后就不行。我想知道除了假阳性外可能有其他什么原因吗？
能做的是膜蛋白把细胞内蛋白IP下来，相反就不行-----会不会是lysis buffer不能很
好地分离膜蛋白的问题？但是这个蛋白只有一个transmembrane domain，按理应该不成
问题的啊。

r*o2012-07-15 07:07

7 楼

嘴里没泡/溃疡之类的我会再等等，给娃吃些ibuprofen/motrin之类的。

a*j2012-07-15 07:07

8 楼

Wish to Dec 2006

H*72012-07-15 07:07

9 楼

不断浇直到被浇者喊够了为止

m*e2012-07-15 07:07

10 楼

reno 911

【在 g******t 的大作中提到】

: http://www.163jihuo.com/video/show_video_208.htm

i*n2012-07-15 07:07

11 楼

姑且定义bait是membrane protein A， Prey是cytosol protein B
多种可能性
1.假阳性
2.细胞内蛋白B比较abundant,而膜蛋白A比较少。
如果是这种情况，跑western的时候减少input的量，增加IP的量，也许能看到。
3.prey蛋白B抗体识别的antigen region可能是bait A的binding region，导致你用
B的抗体IP下来的只能是不结合A的那部分。
如果是这种情况，给B加个tag或者换个抗体试一试。

【在 b******s 的大作中提到】

: 老板想叫我接着实验室里一个学生做的课题，但听说她做的这个蛋白只能从一个方向被
: pulldown，换了bait和pray后就不行。我想知道除了假阳性外可能有其他什么原因吗？
: 能做的是膜蛋白把细胞内蛋白IP下来，相反就不行-----会不会是lysis buffer不能很
: 好地分离膜蛋白的问题？但是这个蛋白只有一个transmembrane domain，按理应该不成
: 问题的啊。

m*12012-07-15 07:07

12 楼

去吧, 这么痛不是细菌就是病毒感染. 如果是STREP THROAT可以吃抗生素, 一天就不痛
了.

f*e2012-07-15 07:07

13 楼

你这个水枪，把俺给灌够了。

【在 H******7 的大作中提到】

: 不断浇直到被浇者喊够了为止

i*a2012-07-15 07:07

14 楼

that's not a 充气娃娃. that's a real doll!
google real doll

【在 g******t 的大作中提到】

: http://www.163jihuo.com/video/show_video_208.htm

s*y2012-07-15 07:07

15 楼

除了你说的这两种可能，我再补充几个：
1。胞内蛋白B能结合非常多的其他蛋白，不是专一结合A的，所以如果用B的话，
拉下来的蛋白大多是其他蛋白，A的信号会很弱。
2。native 膜蛋白在处理的时候容易进入aggregate 状态而很难被结合起来。
3。native 膜蛋白不被激活的时候就不结合胞内蛋白B。
比方说我们都知道膜蛋白cadherin 能够结合beta-catenin，用GST-cadherin-tail
也很容易就能把beta-catenin 拉下来。但是如果要倒过来用beta-catenin来拉
native cadherin （不是GST-cadherin tail)的话就很难做。我自己曾经试过一次
就没有做出来。后来请问了一个大牛实验室的人，他说这个就是很难做的。
我建议楼主，假如真的需要重复的话，要么就用那个人造的tagged A fragment 来
做，要么就用其他方法（比方说FRET)来重复。

【在 i*******n 的大作中提到】

: 姑且定义bait是membrane protein A， Prey是cytosol protein B
: 多种可能性
: 1.假阳性
: 2.细胞内蛋白B比较abundant,而膜蛋白A比较少。
: 如果是这种情况，跑western的时候减少input的量，增加IP的量，也许能看到。
: 3.prey蛋白B抗体识别的antigen region可能是bait A的binding region，导致你用
: B的抗体IP下来的只能是不结合A的那部分。
: 如果是这种情况，给B加个tag或者换个抗体试一试。

p*o2012-07-15 07:07

16 楼

先打电话给医生问一下吧

y*n2012-07-15 07:07

17 楼

据说要浇水叫到水开始往下流。

b*y2012-07-15 07:07

18 楼

根据上面两位的，我再补充一点。有时，A 可拉 B 但 B 不可拉 A 是因为valence
issue. For example, if A is a monomer and B is a dimer or oligomer, Ab(A) is
a high affinity dimer towards A and make an A dimer. Dimeric A will
interact with oligomeric B at high affinity. Ab(B) binding to B, however,
doesn't increase the affinity with monomeric A and therefore it is hard to
pull it out in the direction.
In addition, more interactions are of low affinity than those of high ones
in the cell. Unfortunately low affinity ones are understudied.

l*e2012-07-15 07:07

19 楼

我乌鸦嘴一个，别是coxsackie virus。我们医生说长牙是发低烧，不会到103这么高的。
俺家闺女前几个礼拜，先是手足口，后来是Herpangina http://kidshealth.org/parent/infections/bacterial_viral/coxsackie.html，都是coxsackie。Herpangina的症状就是先发烧，烧退了疱疹就出来了，在咽喉部位，非常疼，一吃东西就哭。哭得时候我看到小舌头两边的咽喉部位全是白色的点点和红色的疱疹。注意多给水，不要吃太咸和太酸的东西，水给凉点儿的，我家姑娘那时候看到冰棍跟不要命一样。

n*g2012-07-15 07:07

20 楼

听说新LAWN要每天浇8个小时水才够。。。。。等到草长住了，改为每天3个小时。。。

b*s2012-07-15 07:07

21 楼

很精彩的讨论啊，学习了！谢谢各位牛牛！
Sunnyday: 知道了cytosolic protein B和membrane protein A的binding region的情
况下，那么用tagged B binding region应该可以克服B和其他蛋白作用而导致IP A信号
弱的问题了吧？这个和你说的tagged A fragment IP B是一样的，可以算个反向IP.
关于FRET，这个能做出来当然非常好，而且可以证明是直接binding了，不过我对这个
assay一直是心存敬畏啊。如果已经有optimised 好的系统那还好，要是要从头
optimise的话，可能会很悲催。我知道有个phd student 花了4年时间来做FRET,文章是
发了，通篇就是FRET，但觉得很risky啊。

a*l2012-07-15 07:07

22 楼

Comfort

f*e2012-07-15 07:07

23 楼

非把我给浇破产不可

【在 n****g 的大作中提到】

: 听说新LAWN要每天浇8个小时水才够。。。。。等到草长住了，改为每天3个小时。。。

s*y2012-07-15 07:07

24 楼

可以试试看，但是不要把宝压在上面就好了
是比较tricky, 但也是能做出来的，关键就看有没有这个必要。

【在 b******s 的大作中提到】

: 很精彩的讨论啊，学习了！谢谢各位牛牛！
: Sunnyday: 知道了cytosolic protein B和membrane protein A的binding region的情
: 况下，那么用tagged B binding region应该可以克服B和其他蛋白作用而导致IP A信号
: 弱的问题了吧？这个和你说的tagged A fragment IP B是一样的，可以算个反向IP.
: 关于FRET，这个能做出来当然非常好，而且可以证明是直接binding了，不过我对这个
: assay一直是心存敬畏啊。如果已经有optimised 好的系统那还好，要是要从头
: optimise的话，可能会很悲催。我知道有个phd student 花了4年时间来做FRET,文章是
: 发了，通篇就是FRET，但觉得很risky啊。

S*p2012-07-15 07:07

25 楼

我们医生也说长牙发烧不会超过100.

H*72012-07-15 07:07

26 楼

秀秀你家的上流水贝

【在 y******n 的大作中提到】

: 据说要浇水叫到水开始往下流。

i*g2012-07-15 07:07

27 楼

用数学wsn的说法，大概是 bi-directional interactions masked and become
directional after operation

b*d2012-07-15 07:07

28 楼

看医生，给吃一切冰的东西，冰淇淋是好物。

s*y2012-07-15 07:07

29 楼

下流...

【在 H******7 的大作中提到】

: 秀秀你家的上流水贝

b*s2012-07-15 07:07

30 楼

科普一下展开说说？

【在 i*****g 的大作中提到】

: 用数学wsn的说法，大概是 bi-directional interactions masked and become
: directional after operation

w*t2012-07-15 07:07

31 楼

谢谢大家的回复
他连酸奶吃了都喊疼，估计冰激凌也一样
我刚刚把吸管杯换回以前的奶瓶子，他喝着就没关系了
所以我估计疼的部位还是嘴里，不是喉咙
楼上的妈妈是怎么看到孩子嘴里的情况的啊
我家的死活不长嘴，我根本没办法看到里面什么样
连我的手指也无法伸进去摸摸

【在 b*********d 的大作中提到】

: 看医生，给吃一切冰的东西，冰淇淋是好物。

c*o2012-07-15 07:07

32 楼

嗯，浇到潮喷为止

i*r2012-07-15 07:07

33 楼

就是哭的时候看到的。把孩子放平，比较容易看到。
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m*d2012-07-15 07:07

34 楼

夏天热的时候大概要2"/week, 如果每周两次，每次就要一英寸
分两到三轮浇，如果一次太长时间，水来不及渗下去的都流走了

【在 f*******e 的大作中提到】

: 常常看到有人说浇水要浇够、浇透，烦请指点一下到底怎样才算浇够、浇透。
: 谢谢。

y*n2012-07-15 07:07

35 楼

最近我们这经常大雨。连前院都泡水里了。

【在 H******7 的大作中提到】

: 秀秀你家的上流水贝