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请教siRNA 转染问题
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请教siRNA 转染问题# Biology - 生物学
y*r
1 楼
读取一个文件，格式为
700 task1
300 task2
800 task3
...
每行第一个为等待的时间（单位ms），第二个为要执行的task。
例如第一行为程序开始后等待700ms，然后执行task1.
这里等待的时间有什么好办法实现没？感觉用nanosleep（）不太好。
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l*z
2 楼
这回行了把? LOL
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S*e
4 楼
买了几个基因的siRNA pool(含3个siRNA)，同样的浓度与方法去转，有的work, 有的不
work, 用的是invitrogen 的 lipofectamine RNAiMAX
不甘心，又根据发表的paper(nature子刊)上的序列，将KD没效果的基因的siRNA序列重
新从dharmacon合成Duplex, 但转染后在我手里还是不work, 但发表的paper里用的也是
siRNA,且KD效果很好阿，所以序列应该是work的。是不是我方法有问题？
有什么好地siRNA 转染方法？ lentivirus介导的shRNA转染会不会KD成功率更高些？
多谢！
shRNA construct(不用virus，就是一般的质粒)的KD效果会不会比siRNA效果好？ 有人
比较过么？
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l*u
5 楼
为嘛9区比11区要早如此多？

【在 l****z 的大作中提到】
: 这回行了把? LOL
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l*y
6 楼
我的目标就是有朝一日写出一首这样的歌 如果到死也写不出来 那就下辈子继续努力！
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C*b
7 楼

转染siRNA的终浓度也挺重要， 一般是5～50nM。浓度太高， 可能有毒性和side-
effect, 所以要平衡；再者，转染后的时间也重要，不同的基因KD的时间不同，有的48
小时就可以了， 但有的需要72小时。

【在 S******e 的大作中提到】
: 买了几个基因的siRNA pool(含3个siRNA)，同样的浓度与方法去转，有的work, 有的不
: work, 用的是invitrogen 的 lipofectamine RNAiMAX
: 不甘心，又根据发表的paper(nature子刊)上的序列，将KD没效果的基因的siRNA序列重
: 新从dharmacon合成Duplex, 但转染后在我手里还是不work, 但发表的paper里用的也是
: siRNA,且KD效果很好阿，所以序列应该是work的。是不是我方法有问题？
: 有什么好地siRNA 转染方法？ lentivirus介导的shRNA转染会不会KD成功率更高些？
: 多谢！
: shRNA construct(不用virus，就是一般的质粒)的KD效果会不会比siRNA效果好？ 有人
: 比较过么？
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l*d
8 楼
那是因为11区的懒！

【在 l*****u 的大作中提到】
: 为嘛9区比11区要早如此多？
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l*y
9 楼
Making music, or TRYING to make music, is one of the most fun, most
accessible (everyone can do it! I mean everyone, even if you are tone-deaf!)
, and most stress-free thing you can do!
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S*e
10 楼
我转染是用的终浓度是60nM和120nM两个浓度，
48小时后收样裂解跑胶
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l*z
11 楼
不早了，这都快六月了。

【在 l*****u 的大作中提到】
: 为嘛9区比11区要早如此多？
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y*i
12 楼
欧美也没秦腔、昆曲、京剧、梆子、二人转等等等等。
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g*5
13 楼
发表的paper里用的也是
you should not 100% believe the published data :)
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b*1
14 楼
有抗冷的黄瓜。
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e*t
15 楼
世界各地都有民间音乐传统音乐
这些玩意中国人自己都不怎么听了，除了二人转

【在 y****i 的大作中提到】
: 欧美也没秦腔、昆曲、京剧、梆子、二人转等等等等。
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C*b
16 楼

感觉有些高。收集时， 你有没有看细胞是否健康？

【在 S******e 的大作中提到】
: 我转染是用的终浓度是60nM和120nM两个浓度，
: 48小时后收样裂解跑胶
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l*u
17 楼
11区的黄瓜懒？偶从去年年底就开始伺候上了。

【在 l*********d 的大作中提到】
: 那是因为11区的懒！
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y*i
18 楼
所以，完全没必要以欧美音乐为标准。

【在 e***t 的大作中提到】
: 世界各地都有民间音乐传统音乐
: 这些玩意中国人自己都不怎么听了，除了二人转
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S*e
19 楼
准备再做一次试试看，再不行就考虑用lentivirus

48

【在 C****b 的大作中提到】
:
: 感觉有些高。收集时， 你有没有看细胞是否健康？
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l*z
20 楼
这黄瓜的名字就叫春秋绿宝呀
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e*t
21 楼
欧美音乐无论从深度高度广度或是影响力都制霸全球，不以人家为标准，以谁为标准？

【在 y****i 的大作中提到】
: 所以，完全没必要以欧美音乐为标准。
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S*e
22 楼
与没转的比稍差，但总体上比较健康

【在 C****b 的大作中提到】
:
: 感觉有些高。收集时， 你有没有看细胞是否健康？
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x*2
23 楼
好鲜嫩，看着就好吃。我种的美国小黄瓜，已经结了好几根，味道很一般，皮上的刺还
扎人。
豆妈这个图片里的字条，是照出来的？
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y*i
24 楼
制霸 是什么意思？
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v*a
25 楼
你work不work是用什么方法去access的？western还是rna？如果是western也要看抗体的

【在 S******e 的大作中提到】
: 买了几个基因的siRNA pool(含3个siRNA)，同样的浓度与方法去转，有的work, 有的不
: work, 用的是invitrogen 的 lipofectamine RNAiMAX
: 不甘心，又根据发表的paper(nature子刊)上的序列，将KD没效果的基因的siRNA序列重
: 新从dharmacon合成Duplex, 但转染后在我手里还是不work, 但发表的paper里用的也是
: siRNA,且KD效果很好阿，所以序列应该是work的。是不是我方法有问题？
: 有什么好地siRNA 转染方法？ lentivirus介导的shRNA转染会不会KD成功率更高些？
: 多谢！
: shRNA construct(不用virus，就是一般的质粒)的KD效果会不会比siRNA效果好？ 有人
: 比较过么？
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c*p
26 楼
很好很好！
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e*t
27 楼
=称霸

【在 y****i 的大作中提到】
: 制霸 是什么意思？
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S*e
28 楼
Western, 抗体没问题，有对照，我之前也用这抗体做了很多其他的实验

体的

【在 v***a 的大作中提到】
: 你work不work是用什么方法去access的？western还是rna？如果是western也要看抗体的
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y*8
29 楼
豆妈v5!
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g*5
30 楼
10nM is enough for my gene with lipofectamineRNAimax
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l*z
31 楼
这个？ 只能意会不能言传 LOL

【在 x******2 的大作中提到】
: 好鲜嫩，看着就好吃。我种的美国小黄瓜，已经结了好几根，味道很一般，皮上的刺还
: 扎人。
: 豆妈这个图片里的字条，是照出来的？
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l*z
33 楼
杯子更好！

【在 c***p 的大作中提到】
: 很好很好！
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w*r
34 楼
按照你说的，有的work，有的不work，
如果是同样的细胞同样的转染条件的话，那么不work的估计就是不work了。
就算nature子刊的说这个序列有效，也未必是真的有效。。。
whitehead institute的online siRNA design就不错，我们一般设计完了挑三个，基本
两个work

【在 S******e 的大作中提到】
: 买了几个基因的siRNA pool(含3个siRNA)，同样的浓度与方法去转，有的work, 有的不
: work, 用的是invitrogen 的 lipofectamine RNAiMAX
: 不甘心，又根据发表的paper(nature子刊)上的序列，将KD没效果的基因的siRNA序列重
: 新从dharmacon合成Duplex, 但转染后在我手里还是不work, 但发表的paper里用的也是
: siRNA,且KD效果很好阿，所以序列应该是work的。是不是我方法有问题？
: 有什么好地siRNA 转染方法？ lentivirus介导的shRNA转染会不会KD成功率更高些？
: 多谢！
: shRNA construct(不用virus，就是一般的质粒)的KD效果会不会比siRNA效果好？ 有人
: 比较过么？
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l*z
35 楼
静静要不要我帮你贴张小字条？ LOL

【在 y*****8 的大作中提到】
: 豆妈v5!
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x*2
37 楼
俺明知故问的,, -呵呵

【在 l****z 的大作中提到】
: 这个？ 只能意会不能言传 LOL
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S*e
38 楼
正在做第二次transfection, 再没有效果估计得考虑重新设计了

【在 w********r 的大作中提到】
: 按照你说的，有的work，有的不work，
: 如果是同样的细胞同样的转染条件的话，那么不work的估计就是不work了。
: 就算nature子刊的说这个序列有效，也未必是真的有效。。。
: whitehead institute的online siRNA design就不错，我们一般设计完了挑三个，基本
: 两个work
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l*z
39 楼
这回改我实在了 LOL

【在 x******2 的大作中提到】
: 俺明知故问的,, -呵呵
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D*1
40 楼
窝窝，看着真是鲜嫩！
但是，但是，这个要摘的话是不早了一点？

【在 l****z 的大作中提到】
: 这回改我实在了 LOL
avatar
l*z
41 楼
这是吃之前两天照的，迅速长粗了，这个是武大郎身材。

【在 D*******1 的大作中提到】
: 窝窝，看着真是鲜嫩！
: 但是，但是，这个要摘的话是不早了一点？
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T*4
42 楼
豆妈你不能不顶9区名么，现在八九区都有了，我总不能冒充7区的吧

【在 l****z 的大作中提到】
: 这是吃之前两天照的，迅速长粗了，这个是武大郎身材。
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L*1
43 楼
要评的话只能是评第二根黄瓜 -- 九区第一根我早贴过了。
虽然咱的照片不符合版主的苛刻要求，但并不能改变那是第一根的事实。连接在这里
http://www.mitbbs.com/article_t0/gardening/31675509.html

【在 l****z 的大作中提到】
: 这是吃之前两天照的，迅速长粗了，这个是武大郎身材。
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