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IRES和GFP中间放点序列，应该不影响吧

IRES和GFP中间放点序列，应该不影响吧# Biology - 生物学

m*e2012-10-02 07:10

1 楼

百度了一下还没搞清楚，似乎是，豆瓣是蚕豆做的，发酵后和辣椒酱一起弄成那种香香
的咸辣酱，豆豉是黄豆做的，主要多了晒干这一步然后发酵，黑乎乎的东东？这俩都能
做啥菜啊。。。

l*u2012-10-02 07:10

2 楼

小孩差3个月3岁，9月初得到通知要从t4升到t5，t4的老师也都说小孩是去t5。结果
labor day结束了以后，被告知去pre-school班。轮到交钱的时候，说还是按照t交
钱，说是因为没满三岁，那个教室教师和学生的比例还是t的比例。
我们有点不满：以前每次升班都特别快，比他小几天的小孩要等1两个月才升上来。加上小孩是那种很小胆的，很老实也很顺从，我们也没有多想，升就升吧。我
们也没有说啥，不知道是不是看我们没抱怨，这次直接跳级了。
btw；有这种说法么，小孩交钱是按照年纪来而不是按照班级来？

t*12012-10-02 07:10

3 楼

在high了几天之后

g*32012-10-02 07:10

4 楼

想在中间加个酶切位点，应该没问题吧。我的理解不需要IRES序列后就非要直接跟GFP
的ATG start codon.不知道理解的对不对。急，请回答。

l*o2012-10-02 07:10

5 楼

我做水煮鱼片的时候会放一点儿豆瓣酱，做红烧鱼的时候也会放一点儿。
豆豉我一般用来炒菜的时候加一点儿。

【在 m*******e 的大作中提到】

: 百度了一下还没搞清楚，似乎是，豆瓣是蚕豆做的，发酵后和辣椒酱一起弄成那种香香
: 的咸辣酱，豆豉是黄豆做的，主要多了晒干这一步然后发酵，黑乎乎的东东？这俩都能
: 做啥菜啊。。。

C*d2012-10-02 07:10

6 楼

这个收费真是很不合理。当然要和他们argue一下。
还有这个升班的事，并不是学校让升就一定要升。特别是比较胆小的小孩。
我家老大当年什么时候升我都是完全听daycare的，因为她各方面都比较先进，适应能
力也强。到了老二就不一样了，老二是个特别特别慢热的小孩，她现在好不容易适应了
现在的toddler班，结果学校就让升到young-preschool, 如果去了的话过9个月就又要
升preschool了。对她这样慢热的可想而知多痛苦了。所以我死乞白赖让她赖在toddler
班，希望到时候直接可以升preschool.

加上小孩是那种很小胆的，很老实也很顺从，我们也没有多想，升就升吧。我

【在 l********u 的大作中提到】

: 小孩差3个月3岁，9月初得到通知要从t4升到t5，t4的老师也都说小孩是去t5。结果
: labor day结束了以后，被告知去pre-school班。轮到交钱的时候，说还是按照t交
: 钱，说是因为没满三岁，那个教室教师和学生的比例还是t的比例。
: 我们有点不满：以前每次升班都特别快，比他小几天的小孩要等1两个月才升上来。加上小孩是那种很小胆的，很老实也很顺从，我们也没有多想，升就升吧。我
: 们也没有说啥，不知道是不是看我们没抱怨，这次直接跳级了。
: btw；有这种说法么，小孩交钱是按照年纪来而不是按照班级来？

y*n2012-10-02 07:10

7 楼

我来试着解释一下。移民局里办案的人员估计手脚快慢相差很大。前两天第一周报喜的
多是因为那些手脚快的在办这个区间，现在他们把手头的那一摞办完了，领了活接着办
的是下半个月的。剩下在办第一周的都是那些手脚慢的。

【在 t******1 的大作中提到】

: 在high了几天之后

s*y2012-10-02 07:10

8 楼

没有问题

GFP

【在 g*******3 的大作中提到】

: 想在中间加个酶切位点，应该没问题吧。我的理解不需要IRES序列后就非要直接跟GFP
: 的ATG start codon.不知道理解的对不对。急，请回答。

a*e2012-10-02 07:10

9 楼

川菜的灵魂是“郫县豆瓣”，但是其它地方也有不辣的豆瓣。所以要说川菜的话，很多
里面都要加郫县豆瓣：回锅肉、鱼香肉丝、水煮肉等等
豆豉其实有股特别的臭味，各地有各地的风味豆豉，有的菜用整粒的豆豉比如豆豉排骨
，还有很多菜是将豆豉剁碎了做配料。

l*u2012-10-02 07:10

10 楼

谢谢分享啊，我看以后还是要看他的适应情况了。现在看来，我们还是没有怎么顾及小
孩的感受，他去了两个星期新班级了，还没有完全适应。下次要求小孩子ready了再升
班。

toddler

【在 C*****d 的大作中提到】

: 这个收费真是很不合理。当然要和他们argue一下。
: 还有这个升班的事，并不是学校让升就一定要升。特别是比较胆小的小孩。
: 我家老大当年什么时候升我都是完全听daycare的，因为她各方面都比较先进，适应能
: 力也强。到了老二就不一样了，老二是个特别特别慢热的小孩，她现在好不容易适应了
: 现在的toddler班，结果学校就让升到young-preschool, 如果去了的话过9个月就又要
: 升preschool了。对她这样慢热的可想而知多痛苦了。所以我死乞白赖让她赖在toddler
: 班，希望到时候直接可以升preschool.
:
: 加上小孩是那种很小胆的，很老实也很顺从，我们也没有多想，升就升吧。我

t*12012-10-02 07:10

11 楼

着急啊

【在 y*****n 的大作中提到】

: 我来试着解释一下。移民局里办案的人员估计手脚快慢相差很大。前两天第一周报喜的
: 多是因为那些手脚快的在办这个区间，现在他们把手头的那一摞办完了，领了活接着办
: 的是下半个月的。剩下在办第一周的都是那些手脚慢的。

g*32012-10-02 07:10

12 楼

哇，sunnyday大侠亲自出马指导，这下放心了。

【在 s******y 的大作中提到】

: 没有问题
:
: GFP

t*e2012-10-02 07:10

13 楼

豆瓣是大片的豆豉是小粒的豆瓣是红色湿乎乎的辣椒酱豆豉是黑色兔子屎样的一般
不辣豆瓣酱炒菜很好吃豆豉烧菜很好吃。。

r*e2012-10-02 07:10

14 楼

IRES后面的基因表达非常tricky，
前面的比较好弄，不建议动后面的。

GFP

【在 g*******3 的大作中提到】

: 想在中间加个酶切位点，应该没问题吧。我的理解不需要IRES序列后就非要直接跟GFP
: 的ATG start codon.不知道理解的对不对。急，请回答。

s*m2012-10-02 07:10

15 楼

鱼香肉丝加豆瓣酱还真的不大习惯呐……

【在 a*******e 的大作中提到】

: 川菜的灵魂是“郫县豆瓣”，但是其它地方也有不辣的豆瓣。所以要说川菜的话，很多
: 里面都要加郫县豆瓣：回锅肉、鱼香肉丝、水煮肉等等
: 豆豉其实有股特别的臭味，各地有各地的风味豆豉，有的菜用整粒的豆豉比如豆豉排骨
: ，还有很多菜是将豆豉剁碎了做配料。

g*32012-10-02 07:10

16 楼

可是我好像看见（忘了是不是clonetech)的ires 和eGFP中间是有酶切位点啊。

【在 r***e 的大作中提到】

: IRES后面的基因表达非常tricky，
: 前面的比较好弄，不建议动后面的。
:
: GFP

m*e2012-10-02 07:10

17 楼

啊的确是觉得豆豉有点微妙的臭味。。。

【在 a*******e 的大作中提到】

r*e2012-10-02 07:10

18 楼

可以试试，但是如果不行就算了，很难搞。
另外，我没看懂你问什么加酶切位点。

【在 g*******3 的大作中提到】

: 可是我好像看见（忘了是不是clonetech)的ires 和eGFP中间是有酶切位点啊。

m*e2012-10-02 07:10

19 楼

mm能推荐个菜不？豆豉蒸鱼也需要很新鲜的活鱼吗？

【在 t*****e 的大作中提到】

: 豆瓣是大片的豆豉是小粒的豆瓣是红色湿乎乎的辣椒酱豆豉是黑色兔子屎样的一般
: 不辣豆瓣酱炒菜很好吃豆豉烧菜很好吃。。

l*y2012-10-02 07:10

20 楼

most likely it is NcoI site CCATGG andw eGFP starts with ATGG.
addgene has a ton of plasmids with IRES-eGFP, i would buy one and take out
the whole fragment to avoid any trouble.

【在 g*******3 的大作中提到】

: 可是我好像看见（忘了是不是clonetech)的ires 和eGFP中间是有酶切位点啊。

B*e2012-10-02 07:10

21 楼

粤菜馆里面的“豉汁（炒）XX”都是放的豆豉。
罐头的“豆豉鲮鱼”也挺常见。
蒜蓉豆豉蒸排骨/鱼也是传统曲目。

g*32012-10-02 07:10

22 楼

说起来比较尴尬，找了一圈没找到谁有ires-CFP的载体，现在想把已经有的GFP换成CFP
, 又不想设计Overlap primer,干脆加一个方便克隆的位点。先把IRES装进去（屁股后
面带个那个位点），然后再把头上加那个位点的CFP PCR产物装进去（我们有个CFP的
老鼠，准备从基因组里直接把CFP,PCR出来）。就是图个方便，无他。

【在 r***e 的大作中提到】

: 可以试试，但是如果不行就算了，很难搞。
: 另外，我没看懂你问什么加酶切位点。

t*e2012-10-02 07:10

23 楼

只要是蒸鱼最好是新鲜的红烧就无所谓了。。

【在 m*******e 的大作中提到】

: mm能推荐个菜不？豆豉蒸鱼也需要很新鲜的活鱼吗？

s*s2012-10-02 07:10

24 楼

能用2A的用2A, 实在不行再想ires

GFP

【在 g*******3 的大作中提到】

: 想在中间加个酶切位点，应该没问题吧。我的理解不需要IRES序列后就非要直接跟GFP
: 的ATG start codon.不知道理解的对不对。急，请回答。

m*d2012-10-02 07:10

25 楼

跟放酱，酱油，cheese一个意思，都是些蛋白质发酵的复杂产物

【在 m*******e 的大作中提到】

l*12012-10-02 07:10

26 楼

RE LZ
here you go
Plasmid Information
Toolbox-No. 114
Functional Description Retroviral expression vector derives from pMIG;
the GFP of the original IRES-GFP casette is exchanged with the enhanced cyan
flourescent protein. . The vector allows cloning of genes of interest on
the N-terminus of IRES for co-expression with CFP in cells.
web link:
http://www.bioss.uni-freiburg.de/toolbox/products.php?PL-62
then pls send mail to German side for it:
link:
http://www.bioss.uni-freiburg.de/toolbox/info.php?contact&osCsi
Ps:
LZ 有包子就给个

CFP

【在 g*******3 的大作中提到】

: 说起来比较尴尬，找了一圈没找到谁有ires-CFP的载体，现在想把已经有的GFP换成CFP
: , 又不想设计Overlap primer,干脆加一个方便克隆的位点。先把IRES装进去（屁股后
: 面带个那个位点），然后再把头上加那个位点的CFP PCR产物装进去（我们有个CFP的
: 老鼠，准备从基因组里直接把CFP,PCR出来）。就是图个方便，无他。

d*g2012-10-02 07:10

27 楼

豆瓣是蚕豆做的，像放辣椒酱一样使用
豆豉是黄豆做的，像咸菜一样吃，可以炒这样、煮那样的...

p*e2012-10-02 07:10

28 楼

you can, but you also have to be careful, the distance between the IRES and
the ATG is very important, which will influence the expression of the
following gene. therefore, you'd better use the same amount of bases as that
in the original vector.

GFP

【在 g*******3 的大作中提到】

: 想在中间加个酶切位点，应该没问题吧。我的理解不需要IRES序列后就非要直接跟GFP
: 的ATG start codon.不知道理解的对不对。急，请回答。

l*12012-10-02 07:10

29 楼

Mark.

and
that

【在 p*****e 的大作中提到】

: you can, but you also have to be careful, the distance between the IRES and
: the ATG is very important, which will influence the expression of the
: following gene. therefore, you'd better use the same amount of bases as that
: in the original vector.
:
: GFP