his-tagged蛋白纯化问题# Biology - 生物学
j*a
1 楼
有两个跨膜区，不可溶，大量存在内涵体中。问题在于，把蛋白分离出来很容易，产量
很高，电泳后蛋白大小正常，与理论值相符。
可是：
1. 和cobalt 或者镍resin混合后，混合物中出现很多块状物（聚集在一起，RESIN很难
沉下来，与溶液清晰分层）
2. 过柱子后，蛋白莫名其妙就消失了，看到的那些带比理论值小很多。比如，理论值
90kDa，那些小带只有40左右。
同时我们纯化去掉跨膜区的同一个蛋白，一点问题都没有。
很高，电泳后蛋白大小正常，与理论值相符。
可是：
1. 和cobalt 或者镍resin混合后，混合物中出现很多块状物（聚集在一起，RESIN很难
沉下来，与溶液清晰分层）
2. 过柱子后，蛋白莫名其妙就消失了，看到的那些带比理论值小很多。比如，理论值
90kDa，那些小带只有40左右。
同时我们纯化去掉跨膜区的同一个蛋白，一点问题都没有。
