k*v
2 楼
nubi!
m*d
3 楼
g*s
4 楼
做multi-color荧光，
如果是wide field，是要转filter set一个一个成像吗？能多个filter和camera同时成
像么？
如果是confocal，是不是都是用多个filter和PMT同时成像的？
理论上知道一些，但是不清楚实际应用里是怎么做的。谢谢。
如果是wide field，是要转filter set一个一个成像吗？能多个filter和camera同时成
像么？
如果是confocal，是不是都是用多个filter和PMT同时成像的？
理论上知道一些，但是不清楚实际应用里是怎么做的。谢谢。
m*e
5 楼
同问。。。
l*o
6 楼
我怎么觉得该得乱七八糟的。
o*1
7 楼
难道第一个不应该 翻译 成“我擦了个擦，耶稣他妈”。
【在 m**d 的大作中提到】
【在 m**d 的大作中提到】
s*y
8 楼
一般都是要一个一个的成像。
也有专门的仪器是用棱镜来把光谱分开，可以同时成几个不同颜色的像，但是那种仪器
很贵。
不可以，除非有上面说的那个仪器。
【在 g***s 的大作中提到】
: 做multi-color荧光，
: 如果是wide field，是要转filter set一个一个成像吗？能多个filter和camera同时成
: 像么？
: 如果是confocal，是不是都是用多个filter和PMT同时成像的？
: 理论上知道一些，但是不清楚实际应用里是怎么做的。谢谢。
h*8
9 楼
普通装修，$15,000-$20,000.不装bathroom会便宜＄３０００－＄５０００。
c*e
10 楼
我个人觉得她唱英文歌从声线到风格都和CA很像。
g*s
11 楼
谢谢，你说不可以是指前面的filter会把后面的信号滤掉？我不用dichroic用bandpass
级联行么？
不过不管什么方法，包括你说得专门仪器，是不是都会有一个荧光光谱overlap的问题
？overlap部分的信号就没办法分开吧，会有crosstalk，我查了一下常用label的光谱
，好像如果同时三个或更多，大多会有很强的重叠，如果滤掉重叠部分，光强就太弱了。
【在 s******y 的大作中提到】
:
: 一般都是要一个一个的成像。
: 也有专门的仪器是用棱镜来把光谱分开，可以同时成几个不同颜色的像，但是那种仪器
: 很贵。
: 不可以，除非有上面说的那个仪器。
级联行么？
不过不管什么方法，包括你说得专门仪器，是不是都会有一个荧光光谱overlap的问题
？overlap部分的信号就没办法分开吧，会有crosstalk，我查了一下常用label的光谱
，好像如果同时三个或更多，大多会有很强的重叠，如果滤掉重叠部分，光强就太弱了。
【在 s******y 的大作中提到】
:
: 一般都是要一个一个的成像。
: 也有专门的仪器是用棱镜来把光谱分开，可以同时成几个不同颜色的像，但是那种仪器
: 很贵。
: 不可以，除非有上面说的那个仪器。
m*1
12 楼
同问，你在啊里啊，不装卫生间才$3000-$5000?太便宜了，有可推荐的装修公司吗？
【在 h********8 的大作中提到】
: 普通装修，$15,000-$20,000.不装bathroom会便宜＄３０００－＄５０００。
【在 h********8 的大作中提到】
: 普通装修，$15,000-$20,000.不装bathroom会便宜＄３０００－＄５０００。
D*0
13 楼
niubigepi
y*u
14 楼
confocal的话，multi-photon和spectrum／white laser都可以同时成像
不能同时成像的一个原因是laser的变换吧，signal是可以同时由几个channel来
collect的
【在 g***s 的大作中提到】
: 做multi-color荧光，
: 如果是wide field，是要转filter set一个一个成像吗？能多个filter和camera同时成
: 像么？
: 如果是confocal，是不是都是用多个filter和PMT同时成像的？
: 理论上知道一些，但是不清楚实际应用里是怎么做的。谢谢。
不能同时成像的一个原因是laser的变换吧，signal是可以同时由几个channel来
collect的
【在 g***s 的大作中提到】
: 做multi-color荧光，
: 如果是wide field，是要转filter set一个一个成像吗？能多个filter和camera同时成
: 像么？
: 如果是confocal，是不是都是用多个filter和PMT同时成像的？
: 理论上知道一些，但是不清楚实际应用里是怎么做的。谢谢。
m*s
15 楼
中文阅读理解，阅读理解
【在 m********1 的大作中提到】
: 同问，你在啊里啊，不装卫生间才$3000-$5000?太便宜了，有可推荐的装修公司吗？
【在 m********1 的大作中提到】
: 同问，你在啊里啊，不装卫生间才$3000-$5000?太便宜了，有可推荐的装修公司吗？
S*k
16 楼
李玟牛逼到家了。 国内没有任何歌手可以接近这个水准，这声线高音编曲转音气息屌
炸天。
就像演唱之后其他歌手的评价，就是grammy 水准。
金志文很逗，直接要回家了。
【在 k******v 的大作中提到】
: nubi!
炸天。
就像演唱之后其他歌手的评价，就是grammy 水准。
金志文很逗，直接要回家了。
【在 k******v 的大作中提到】
: nubi!
g*s
17 楼
这句话不是太明白，能解释一下么。
如果laser要换得话，那也没必要多个channel同时检测吧？因为一个时间只有一个信号。
【在 y**u 的大作中提到】
: confocal的话，multi-photon和spectrum／white laser都可以同时成像
: 不能同时成像的一个原因是laser的变换吧，signal是可以同时由几个channel来
: collect的
h*8
18 楼
IL
S*k
19 楼
后面的湖南师大合唱团的美女们都不错
Z*9
20 楼
不能。
一般最多同时成像两种颜色，用不同的激光，两个PMT
如果有那种检察spectrum的detector，如zeiss Meta detector可以做多个通道的同时
成像
通过后期的数据分析（non-linear unmixing)来把不同的信号分离出来。在brainbow的
实验中，很多都是才用这种技术
【在 g***s 的大作中提到】
: 做multi-color荧光，
: 如果是wide field，是要转filter set一个一个成像吗？能多个filter和camera同时成
: 像么？
: 如果是confocal，是不是都是用多个filter和PMT同时成像的？
: 理论上知道一些，但是不清楚实际应用里是怎么做的。谢谢。
g*9
21 楼
Just frame, sheet rock, paint and carpet does not cost much, but if you want
to make it nice, could cost a lot.
【在 a***u 的大作中提到】
: 装修一个1400尺的地下室要多少刀？有人做过吗？
to make it nice, could cost a lot.
【在 a***u 的大作中提到】
: 装修一个1400尺的地下室要多少刀？有人做过吗？
S*k
22 楼
因为水平太低根本就不懂
【在 l******o 的大作中提到】
: 我怎么觉得该得乱七八糟的。
【在 l******o 的大作中提到】
: 我怎么觉得该得乱七八糟的。
g*s
23 楼
你说这个后期数据分析，是指根据每个emission spectrum的shape和检测到的combined
spectrum，作一个类似拟合之类的分析来把不同emission分离开么？
【在 Z****9 的大作中提到】
:
: 不能。
: 一般最多同时成像两种颜色，用不同的激光，两个PMT
: 如果有那种检察spectrum的detector，如zeiss Meta detector可以做多个通道的同时
: 成像
: 通过后期的数据分析（non-linear unmixing)来把不同的信号分离出来。在brainbow的
: 实验中，很多都是才用这种技术
spectrum，作一个类似拟合之类的分析来把不同emission分离开么？
【在 Z****9 的大作中提到】
:
: 不能。
: 一般最多同时成像两种颜色，用不同的激光，两个PMT
: 如果有那种检察spectrum的detector，如zeiss Meta detector可以做多个通道的同时
: 成像
: 通过后期的数据分析（non-linear unmixing)来把不同的信号分离出来。在brainbow的
: 实验中，很多都是才用这种技术
a*u
24 楼
Builder quote $54k.一个Full Bathroom，一个8尺长的吧台， 两个6尺长的Closet，
其余都是drywall。太贵了，准备自己干了。请问有什么建议吗？
want
【在 g*****9 的大作中提到】
: Just frame, sheet rock, paint and carpet does not cost much, but if you want
: to make it nice, could cost a lot.
其余都是drywall。太贵了，准备自己干了。请问有什么建议吗？
want
【在 g*****9 的大作中提到】
: Just frame, sheet rock, paint and carpet does not cost much, but if you want
: to make it nice, could cost a lot.
S*k
25 楼
张信哲唱，歌曲难度低，适合全场大合唱，于是观众投票本期第一名。
不过他伴音的那三个大妈太尼玛胖了
不过他伴音的那三个大妈太尼玛胖了
Z*9
26 楼
是的
combined
【在 g***s 的大作中提到】
: 你说这个后期数据分析，是指根据每个emission spectrum的shape和检测到的combined
: spectrum，作一个类似拟合之类的分析来把不同emission分离开么？
combined
【在 g***s 的大作中提到】
: 你说这个后期数据分析，是指根据每个emission spectrum的shape和检测到的combined
: spectrum，作一个类似拟合之类的分析来把不同emission分离开么？
g*9
27 楼
太贵
If you DIY, 10K should be enough, if you hire out, 20K at most.
Depending on what you plan to use the space for, upgrade to better material
(such as sound proofing if you plan to make it a home theater) could cost
more, but it is best to make it future proof right now. Running cable or
pipe later on could cost a lot more.
【在 a***u 的大作中提到】
: Builder quote $54k.一个Full Bathroom，一个8尺长的吧台， 两个6尺长的Closet，
: 其余都是drywall。太贵了，准备自己干了。请问有什么建议吗？
:
: want
If you DIY, 10K should be enough, if you hire out, 20K at most.
Depending on what you plan to use the space for, upgrade to better material
(such as sound proofing if you plan to make it a home theater) could cost
more, but it is best to make it future proof right now. Running cable or
pipe later on could cost a lot more.
【在 a***u 的大作中提到】
: Builder quote $54k.一个Full Bathroom，一个8尺长的吧台， 两个6尺长的Closet，
: 其余都是drywall。太贵了，准备自己干了。请问有什么建议吗？
:
: want
g*m
28 楼
太烂了，糟蹋了Sam的好歌
【在 k******v 的大作中提到】
: nubi!
【在 k******v 的大作中提到】
: nubi!
g*s
29 楼
谢谢。对于excitation的选择，是不是要求波长长的laser也要在波长短的emission下
面，这样一个dichroic可以把信号和所有激发光完全分开？
如果是，则很难同时搞三或四个颜色，难免会有激发光在别的emission band里面。
【在 Z****9 的大作中提到】
: 是的
:
: combined
面，这样一个dichroic可以把信号和所有激发光完全分开？
如果是，则很难同时搞三或四个颜色，难免会有激发光在别的emission band里面。
【在 Z****9 的大作中提到】
: 是的
:
: combined
D*C
30 楼
靠，地下室都比我家大
R*3
31 楼
she sucks
【在 S******k 的大作中提到】
: 李玟牛逼到家了。 国内没有任何歌手可以接近这个水准，这声线高音编曲转音气息屌
: 炸天。
: 就像演唱之后其他歌手的评价，就是grammy 水准。
: 金志文很逗，直接要回家了。
【在 S******k 的大作中提到】
: 李玟牛逼到家了。 国内没有任何歌手可以接近这个水准，这声线高音编曲转音气息屌
: 炸天。
: 就像演唱之后其他歌手的评价，就是grammy 水准。
: 金志文很逗，直接要回家了。
a*q
32 楼
405 nm 激发 450 nm 荧光 （例如DAPI）
488 nm 激发 510 nm 荧光 （例如GFP，Alexa 488）
561 nm 激发 570 nm 荧光 （例如mCherry，Alexa 555）
647 nm 激发 670 nm 荧光 （例如Cy5，Alexa 647）
以上为四色同时成像的常见选择，基本没有太多Crosstalk。
488 nm 激发 510 nm 荧光 （例如GFP，Alexa 488）
561 nm 激发 570 nm 荧光 （例如mCherry，Alexa 555）
647 nm 激发 670 nm 荧光 （例如Cy5，Alexa 647）
以上为四色同时成像的常见选择，基本没有太多Crosstalk。
a*u
33 楼
Thanks. I don't want to do a very fancy basement, just want to use the
basement for kid's play area , small gym and tv room. I decide to do it
myself, I may need hire out some parts of work, and I will come here too to
ask questions.
material
【在 g*****9 的大作中提到】
: 太贵
: If you DIY, 10K should be enough, if you hire out, 20K at most.
: Depending on what you plan to use the space for, upgrade to better material
: (such as sound proofing if you plan to make it a home theater) could cost
: more, but it is best to make it future proof right now. Running cable or
: pipe later on could cost a lot more.
basement for kid's play area , small gym and tv room. I decide to do it
myself, I may need hire out some parts of work, and I will come here too to
ask questions.
material
【在 g*****9 的大作中提到】
: 太贵
: If you DIY, 10K should be enough, if you hire out, 20K at most.
: Depending on what you plan to use the space for, upgrade to better material
: (such as sound proofing if you plan to make it a home theater) could cost
: more, but it is best to make it future proof right now. Running cable or
: pipe later on could cost a lot more.
S*k
34 楼
尼玛沙克斯
【在 R********3 的大作中提到】
: she sucks
【在 R********3 的大作中提到】
: she sucks
g*s
35 楼
多谢，那每个荧光是不是要用bandpass filter而非dichroic mirror来分离，因为要同
时滤掉长波长和短波长的激发光背景？
有哪个商用机器可以做这个么？想了解一下内部构造。谢谢。
【在 a*q 的大作中提到】
: 405 nm 激发 450 nm 荧光 （例如DAPI）
: 488 nm 激发 510 nm 荧光 （例如GFP，Alexa 488）
: 561 nm 激发 570 nm 荧光 （例如mCherry，Alexa 555）
: 647 nm 激发 670 nm 荧光 （例如Cy5，Alexa 647）
: 以上为四色同时成像的常见选择，基本没有太多Crosstalk。
时滤掉长波长和短波长的激发光背景？
有哪个商用机器可以做这个么？想了解一下内部构造。谢谢。
【在 a*q 的大作中提到】
: 405 nm 激发 450 nm 荧光 （例如DAPI）
: 488 nm 激发 510 nm 荧光 （例如GFP，Alexa 488）
: 561 nm 激发 570 nm 荧光 （例如mCherry，Alexa 555）
: 647 nm 激发 670 nm 荧光 （例如Cy5，Alexa 647）
: 以上为四色同时成像的常见选择，基本没有太多Crosstalk。
g*a
36 楼
支持coco
a*q
37 楼
这个一般只有迫不得已的时候才会用的吧。一般都是尽量把染色的波长分开，以便能够
直接多色成像。Brainbow的三个荧光蛋白是不需要做unmixing的，Cremer他们做的
Chromatin Territory用了七个通道，才必需用unmixing。
【在 Z****9 的大作中提到】
: 是的
:
: combined
直接多色成像。Brainbow的三个荧光蛋白是不需要做unmixing的，Cremer他们做的
Chromatin Territory用了七个通道，才必需用unmixing。
【在 Z****9 的大作中提到】
: 是的
:
: combined
M*0
38 楼
很一般，味同嚼蜡
a*q
39 楼
Dichroic Mirror和bandpass filter是干不同的事情的。Dichroic Mirror是用来把激
发光和荧光分开的，但是Dichroic Mirror不能完全挡住从样品反射和散射回来的激发
光（大概能挡住99％，剩下的1％足以完全超出荧光信号了），所以必需再加Bandpass
Filter（好的只能透过10^-7的激发光）。
基本上绝大多数商用机器都可以做这四种颜色，要看买的时候装了哪些激发激光（或者
用汞灯），买了哪些滤色片了。具体实现的方法有很多，一个经典的方案叫做Sedat
Filter Set（根据UCSF John Sedat的要求设计的）。这个方案用了一个四通道
Dichroic Mirror（反射上面说的每四个激发波长而且透射所有四个荧光波长），然后
有四组激发滤色片和荧光带通滤色片，可以依次对四个波长顺序成像。
http://www.chroma.com/product/complete-filter-sets/widefield-mi
在Confocal上，四个PMT同时检测是没有什么问题的，这样要是用上面的四通道
Dichroic Mirror，四个激光同时激发，是可以四色同时成像的——只要软件支持。
【在 g***s 的大作中提到】
: 多谢，那每个荧光是不是要用bandpass filter而非dichroic mirror来分离，因为要同
: 时滤掉长波长和短波长的激发光背景？
: 有哪个商用机器可以做这个么？想了解一下内部构造。谢谢。
发光和荧光分开的，但是Dichroic Mirror不能完全挡住从样品反射和散射回来的激发
光（大概能挡住99％，剩下的1％足以完全超出荧光信号了），所以必需再加Bandpass
Filter（好的只能透过10^-7的激发光）。
基本上绝大多数商用机器都可以做这四种颜色，要看买的时候装了哪些激发激光（或者
用汞灯），买了哪些滤色片了。具体实现的方法有很多，一个经典的方案叫做Sedat
Filter Set（根据UCSF John Sedat的要求设计的）。这个方案用了一个四通道
Dichroic Mirror（反射上面说的每四个激发波长而且透射所有四个荧光波长），然后
有四组激发滤色片和荧光带通滤色片，可以依次对四个波长顺序成像。
http://www.chroma.com/product/complete-filter-sets/widefield-mi
在Confocal上，四个PMT同时检测是没有什么问题的，这样要是用上面的四通道
Dichroic Mirror，四个激光同时激发，是可以四色同时成像的——只要软件支持。
【在 g***s 的大作中提到】
: 多谢，那每个荧光是不是要用bandpass filter而非dichroic mirror来分离，因为要同
: 时滤掉长波长和短波长的激发光背景？
: 有哪个商用机器可以做这个么？想了解一下内部构造。谢谢。
g*s
40 楼
学习了，多谢。
Bandpass
【在 a*q 的大作中提到】
: Dichroic Mirror和bandpass filter是干不同的事情的。Dichroic Mirror是用来把激
: 发光和荧光分开的，但是Dichroic Mirror不能完全挡住从样品反射和散射回来的激发
: 光（大概能挡住99％，剩下的1％足以完全超出荧光信号了），所以必需再加Bandpass
: Filter（好的只能透过10^-7的激发光）。
: 基本上绝大多数商用机器都可以做这四种颜色，要看买的时候装了哪些激发激光（或者
: 用汞灯），买了哪些滤色片了。具体实现的方法有很多，一个经典的方案叫做Sedat
: Filter Set（根据UCSF John Sedat的要求设计的）。这个方案用了一个四通道
: Dichroic Mirror（反射上面说的每四个激发波长而且透射所有四个荧光波长），然后
: 有四组激发滤色片和荧光带通滤色片，可以依次对四个波长顺序成像。
: http://www.chroma.com/product/complete-filter-sets/widefield-mi
Bandpass
【在 a*q 的大作中提到】
: Dichroic Mirror和bandpass filter是干不同的事情的。Dichroic Mirror是用来把激
: 发光和荧光分开的，但是Dichroic Mirror不能完全挡住从样品反射和散射回来的激发
: 光（大概能挡住99％，剩下的1％足以完全超出荧光信号了），所以必需再加Bandpass
: Filter（好的只能透过10^-7的激发光）。
: 基本上绝大多数商用机器都可以做这四种颜色，要看买的时候装了哪些激发激光（或者
: 用汞灯），买了哪些滤色片了。具体实现的方法有很多，一个经典的方案叫做Sedat
: Filter Set（根据UCSF John Sedat的要求设计的）。这个方案用了一个四通道
: Dichroic Mirror（反射上面说的每四个激发波长而且透射所有四个荧光波长），然后
: 有四组激发滤色片和荧光带通滤色片，可以依次对四个波长顺序成像。
: http://www.chroma.com/product/complete-filter-sets/widefield-mi
s*j
41 楼
"也有专门的仪器是用棱镜来把光谱分开"
what equipment?
【在 s******y 的大作中提到】
:
: 一般都是要一个一个的成像。
: 也有专门的仪器是用棱镜来把光谱分开，可以同时成几个不同颜色的像，但是那种仪器
: 很贵。
: 不可以，除非有上面说的那个仪器。
what equipment?
【在 s******y 的大作中提到】
:
: 一般都是要一个一个的成像。
: 也有专门的仪器是用棱镜来把光谱分开，可以同时成几个不同颜色的像，但是那种仪器
: 很贵。
: 不可以，除非有上面说的那个仪器。
相关阅读
You guys over-reacted to Callaway's allegation请问论文的讨论中要这样写吗热烈祝贺Nature就叶诗文事件道歉！！ (转载)由饶毅email再谈nature事件反应过度有些人根本不懂被压迫族裔争取权力的原则Nature 道歉了反击Nature不宜过度渲染“无罪推定”的概念中国游泳选手的基因都是被改造过的关于callaway的文章，叶诗文可以complain as the least哈哈,这下lao xiang有nature可质疑是好事饶毅的信看来写得是不错，公知们都开始到这里来消除影响了Re: Nature 被迫道歉Oncogene 封某版版主 Bestbeer 在 Biology 版拿个Phd比拿个世界冠军强吗？觉得胜利的人可以进来看看Re: 饶毅的公开信到底能起多大作用？ (转载)这次NATURE事件是一次标志性事件。我猜里面那个以匿名faculty名义攻击中国学生学者的评论就是noa简单update下我们的抗议活动吧