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请教一个关于intracellular flow cytometry测膜蛋白的问题

请教一个关于intracellular flow cytometry测膜蛋白的问题# Biology - 生物学

w*a2012-12-09 08:12

1 楼

搬进来时是冬天,根本看不到草地情况.现在每天对着他家的一地杂草,真是恶心的要死.
而且大有蔓延过来的架势.好消息是,他们开始卖房了.坏消息是,卖了一个多月还没人来
买.这在我们这一片算是很慢的了.
我们暂时包给别人做,但是看样子,根本不值得在草地上花费钱和力,因为左右邻居的草
地都好差.原来还以为老美是很注重这些的.小区里其他人家倒还好,看来懒人都被我碰
上了.以后也只有冬天卖房子了.

w*g2012-12-09 08:12

2 楼

【以下文字转载自 Military 讨论区】
发信人: spzr (spzr), 信区: Military
标题: Re: 雷人物理学：智利33名被困矿工训练减肥准备升井
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Oct 7 15:52:34 2010, 美东)
【如果救出过程耗时15分钟，就意味着搭载舱将以近每秒1米的速度上升，矿工的重力
为平时的两倍，对人体造成较大负荷。】
这个每秒1m的速度，跟加速度有啥关系？

n*72012-12-09 08:12

3 楼

大家好。
我最近在用flow检测一种膜蛋白的表达。对于这种蛋白，现有的用于flow的抗体都是
recognize c－terminal的，所以只能做intracellular flow。我的基本步骤是分离细
胞后，加Fc block，fix，permeablize，0.5% BSA block buffer,然后分别染一抗和二
抗，只有single color。
现在遇到的问题是，这种蛋白在treatment之前，不仅在细胞表面有表达，也存在于
intracellular vesicles里，所以不知道permeablize之后会不会检测到的量不仅仅是
表面的表达量。具体应该怎么做才能够保证我仅仅检测到cell surface的量呢？或者除
了flow之外还有其他的方法更适合解决这个问题？
多谢了！
做这个实验有两个多月了，反复试结果都不好，真着急！！

b*a2012-12-09 08:12

4 楼

免费给你做分母，多好的事

死.

【在 w****a 的大作中提到】

: 搬进来时是冬天,根本看不到草地情况.现在每天对着他家的一地杂草,真是恶心的要死.
: 而且大有蔓延过来的架势.好消息是,他们开始卖房了.坏消息是,卖了一个多月还没人来
: 买.这在我们这一片算是很慢的了.
: 我们暂时包给别人做,但是看样子,根本不值得在草地上花费钱和力,因为左右邻居的草
: 地都好差.原来还以为老美是很注重这些的.小区里其他人家倒还好,看来懒人都被我碰
: 上了.以后也只有冬天卖房子了.

q*d2012-12-09 08:12

5 楼

说明加速时间是0.1秒

【在 w*******g 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 Military 讨论区】
: 发信人: spzr (spzr), 信区: Military
: 标题: Re: 雷人物理学：智利33名被困矿工训练减肥准备升井
: 发信站: BBS 未名空间站 (Thu Oct 7 15:52:34 2010, 美东)
: 【如果救出过程耗时15分钟，就意味着搭载舱将以近每秒1米的速度上升，矿工的重力
: 为平时的两倍，对人体造成较大负荷。】
: 这个每秒1m的速度，跟加速度有啥关系？

h*02012-12-09 08:12

6 楼

只检测膜蛋白为什么要permeablize？

y*n2012-12-09 08:12

7 楼

如果有HOA，可以向他们投诉

n*72012-12-09 08:12

8 楼

因为现有的抗体都只recognize 蛋白的c－terminal，在细胞膜的intracellular部分。

【在 h********0 的大作中提到】

: 只检测膜蛋白为什么要permeablize？

j*x2012-12-09 08:12

9 楼

我感觉还是上confocal看定位靠谱一点，否则确实很难说清楚。当然最好还是能搞定合
用的抗体

【在 n**********7 的大作中提到】

: 大家好。
: 我最近在用flow检测一种膜蛋白的表达。对于这种蛋白，现有的用于flow的抗体都是
: recognize c－terminal的，所以只能做intracellular flow。我的基本步骤是分离细
: 胞后，加Fc block，fix，permeablize，0.5% BSA block buffer,然后分别染一抗和二
: 抗，只有single color。
: 现在遇到的问题是，这种蛋白在treatment之前，不仅在细胞表面有表达，也存在于
: intracellular vesicles里，所以不知道permeablize之后会不会检测到的量不仅仅是
: 表面的表达量。具体应该怎么做才能够保证我仅仅检测到cell surface的量呢？或者除
: 了flow之外还有其他的方法更适合解决这个问题？
: 多谢了！

n*72012-12-09 08:12

10 楼

非常感谢！也在考虑confocal～phd读了两年，做的大部分实验都是用flow，感觉
tricky的地方太多，快被烦死了。。。

【在 j****x 的大作中提到】

: 我感觉还是上confocal看定位靠谱一点，否则确实很难说清楚。当然最好还是能搞定合
: 用的抗体

h*02012-12-09 08:12

11 楼

我感觉同种抗体识别膜蛋白和细胞内蛋白在信号强度上可能会有差别，不知道流式仪能
不能足够敏感去检测得到