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请教一个P2A linker的问题

请教一个P2A linker的问题# Biology - 生物学

h*w2012-12-12 08:12

1 楼

首先，那个登场说自己感冒的女生的确有点儿撒娇的嫌疑，象柯这样的评委可能很看不
惯这种仗着自己年轻就用无知当可爱来赢得别人的喜欢，所以她当时让这个女生滚完全
可以理解，潜台词就是，你别给我装了
当然了，这件事还可以说双方各错一半，评委和选手都有错
但是后来炮轰唱金海心的那个选手就太过份了，而且三个评委还集火，很明显另外两个
帮凶，因为实力没有柯强大，名气没有她大，还想靠着柯一起出名吧，所以几乎任何时
候都在给柯帮腔。他们对选手的刻薄，完全都是欲加之罪，比如一开始话说急了，然后
柯就模仿人家，人家肯定吓倒了，柯是几十岁的人了，怎么还跟小孩儿一样，于是这种
场合下选手继续说错话，被嘲讽为结巴，其实就是几秒钟的事，正常人要是被呛估计都
反应不过来吧
所以象这样缺乏专业素质的人怎么可以被邀请来当超女的评委呢？难怪网友会一边倒的
讨伐她

h*n2012-12-12 08:12

2 楼

用P2A链接两个基因在plasmid里面表达, gene1-P2A-gene2,
是不是P2A后面紧接着gene2的ATG....
谢谢谢谢.

c*e2012-12-12 08:12

3 楼

找柯来肯定是想搞话题炒热度，双方一拍即合，没想到弄砸了。不过好像以前重庆
卫视一档什么选秀节目就是因为她炒作给搞黄过，也算有前科了。

w*e2012-12-12 08:12

4 楼

第二个基因不要ATG；
同时第一个基因也不要TAA, TAG, TGA这些stop codon

p*y2012-12-12 08:12

5 楼

热门新闻的一个视频，三个主持都很mean
如果刻薄是一种炒作方式，这个方式很low

【在 c******e 的大作中提到】

: 找柯来肯定是想搞话题炒热度，双方一拍即合，没想到弄砸了。不过好像以前重庆
: 卫视一档什么选秀节目就是因为她炒作给搞黄过，也算有前科了。

g*52012-12-12 08:12

6 楼

第二个基因不要ATG?
why?

h*w2012-12-12 08:12

7 楼

重庆台那个好惨，害了一帮人呀，包括节目组，选秀选手，还有杨二从此也消失了，应
该是她和柯都有嫌疑参与那个炒作的事，别的节目分不清只好对她也敬而远之了，不敢
再请这个人

【在 c******e 的大作中提到】

: 找柯来肯定是想搞话题炒热度，双方一拍即合，没想到弄砸了。不过好像以前重庆
: 卫视一档什么选秀节目就是因为她炒作给搞黄过，也算有前科了。

h*n2012-12-12 08:12

8 楼

太感谢了.

【在 w*e 的大作中提到】

: 第二个基因不要ATG；
: 同时第一个基因也不要TAA, TAG, TGA这些stop codon

h*w2012-12-12 08:12

9 楼

柯这种是属于半失业状态了，当然舍不得离开这个选秀节目，不过还好芒果台比较果断
把她炒了

【在 c******e 的大作中提到】

: 找柯来肯定是想搞话题炒热度，双方一拍即合，没想到弄砸了。不过好像以前重庆
: 卫视一档什么选秀节目就是因为她炒作给搞黄过，也算有前科了。

r*e2012-12-12 08:12

10 楼

第二个基因可以有ATG。
要在同一个reading frame里面。

【在 w*e 的大作中提到】

: 第二个基因不要ATG；
: 同时第一个基因也不要TAA, TAG, TGA这些stop codon

h*w2012-12-12 08:12

11 楼

而且mean得没有什么特点

【在 p****y 的大作中提到】

: 热门新闻的一个视频，三个主持都很mean
: 如果刻薄是一种炒作方式，这个方式很low

h*n2012-12-12 08:12

12 楼

BTW, 能说说为什么吗?
谢谢

【在 w*e 的大作中提到】

: 第二个基因不要ATG；
: 同时第一个基因也不要TAA, TAG, TGA这些stop codon

c*e2012-12-12 08:12

13 楼

她俩应该是那次后上了总局的黑名单，所以后来没有卫视台敢请她们了。这次超女其
实也不是芒果本台的节目，是所属视频网站芒果TV自制的纯网络节目，不用总局预先
审查的，所以才又试用了她。不过闹这么一出，搞不好又会引起总局的注意，所以
壮士断腕，先自己咔嚓了。

【在 h******w 的大作中提到】

: 重庆台那个好惨，害了一帮人呀，包括节目组，选秀选手，还有杨二从此也消失了，应
: 该是她和柯都有嫌疑参与那个炒作的事，别的节目分不清只好对她也敬而远之了，不敢
: 再请这个人

c*r2012-12-12 08:12

14 楼

Essentially, you are trying to generate a construct to expression a fused
protein (with a self cleaving poly-protein in the middle),so you need to
have two proteins in frame. ATG codes for Met. You can include atg, in my
opinion.

w*e2012-12-12 08:12

15 楼

因为翻译是从第一个基因的ATG开始的，只要这个准确，后面的只要in frame就没问题
了，而且一般met氨基酸最后都去掉了，所以我们lab的vector种第2个基因都没有用ATG.

【在 h********n 的大作中提到】

: BTW, 能说说为什么吗?
: 谢谢

h*n2012-12-12 08:12

16 楼

这样. 那如果带上ATG会有问题吗?

ATG.

【在 w*e 的大作中提到】

: 因为翻译是从第一个基因的ATG开始的，只要这个准确，后面的只要in frame就没问题
: 了，而且一般met氨基酸最后都去掉了，所以我们lab的vector种第2个基因都没有用ATG.

w*e2012-12-12 08:12

17 楼

应该没有问题，多一个met后来也会被切掉。
我查了几个商用的2a vector，有的有第二个atg, 有的没有

【在 h********n 的大作中提到】

: 这样. 那如果带上ATG会有问题吗?
:
: ATG.

d*d2012-12-12 08:12

18 楼

Why do you want to use P2A? I suggest you use T2A. Before I use 2A strategy
to make a knockin mouse, I tested all four 2A and found that T2A is the best
(and the shortest too).

【在 h********n 的大作中提到】

: 用P2A链接两个基因在plasmid里面表达, gene1-P2A-gene2,
: 是不是P2A后面紧接着gene2的ATG....
: 谢谢谢谢.

h*n2012-12-12 08:12

19 楼

thank you for your suggestion

strategy
best

【在 d****d 的大作中提到】

: Why do you want to use P2A? I suggest you use T2A. Before I use 2A strategy
: to make a knockin mouse, I tested all four 2A and found that T2A is the best
: (and the shortest too).

g*52012-12-12 08:12

20 楼

P2A is the best according one plosone work.
http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.p

strategy
best

【在 d****d 的大作中提到】

: Why do you want to use P2A? I suggest you use T2A. Before I use 2A strategy
: to make a knockin mouse, I tested all four 2A and found that T2A is the best
: (and the shortest too).

d*d2012-12-12 08:12

21 楼

The difference might be due to different constructs were used for testing.
In this plosOne paper, the coding sequences of two fluorescent proteins are
linked by different 2A sequences. In my experiment, the coding sequences of
a membrane protein and a fluorescent protein were linked by different 2A
sequences. So it is possible that even the same 2A can function differently
in the context of different constructs.

【在 g*********5 的大作中提到】

: P2A is the best according one plosone work.
: http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.p
:
: strategy
: best