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help:小鼠脑片组化(without perfusion)如何避免鼠二抗bakckground
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help:小鼠脑片组化(without perfusion)如何避免鼠二抗bakckground# Biology - 生物学
b*e
1 楼
因为样品宝贵,取了一半脑做WB,一半固定(没有灌流),结果发现anti-mouse 2nd Ab识别
很多血管的非特异信号.请问有什么办法可以降低background吗?只能选择灌流吗?出生
几天(P10)的小鼠也能灌流吗? 谢谢了
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S*9
2 楼
脑子如果灌注以后很容易没有背景的
10天的老鼠可以，直接左心室灌注，用30G的针头
现在可以试一下blocking buffer： 5%BSA+5%FBS+0.3%Triton 100
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t*k
3 楼
p10可以灌注的，我们实验室有人胎鼠也灌注的
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g*n
4 楼
在一抗前，用anti-m 抗体封蔽。脑子都抠出来了，切一半做WB, 那还怎么灌？
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b*e
5 楼
谢谢大家.我现在用的是5%NGS,0.1%Tx100 blocking, 有什么区别吗? HRP coupled
anti-mouse Ab 可以用来做封蔽吗?我们lab没有uncoupled Ab. 1:5000 1hr?
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h*o
6 楼
换个rabbit的抗体是最简单的方法
或者就像楼上说的，用anti－mouse IgG block
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g*n
7 楼
在5%NGS,0.1%Tx100溶液里加点抗体。NGS还得要。HRP coupled
anti-mouse Ab 可以用，只要你不用其底物来检测。1:500－1000 1hr。
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w*r
8 楼
也可以用fab block吧
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