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请教关于Regulatory T cells的问题
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请教关于Regulatory T cells的问题# Biology - 生物学
p*n
1
最近开始做tumor-infiltrating Treg,可是实验室不是这个背景。看了一堆文献发现
这个领域没有解决的问题和争议挺多。有几个问题希望能够得到澄清(物种是小鼠):
1. flow检测Treg,用CD4+ CD25+ CD127 low是不是就够了?不想用Foxp3因为将来会做
FACS
2. 区别nTreg和iTreg的最好方法是什么?neuropilin表达?如果用CD4+ CD25+ CD127
low Helios+行不行?
3. Treg体外扩增的话,是不是可以肯定这些细胞的phenotype会改变?
4. 有没有什么好的抗体或者kit推荐?用于分离或者扩增的。
多谢!!!
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z*8
2
1.cd25是il-2 receptor,cd25 hi只能说明T cell activated 状态,不能用cd25来充当
foxp3 treg的surrogate marker。 treg也有foxp3+和foxp3-
2. 我不是太懂treg,但是我感觉你用helios和用neuropilin的区别是前者你FACS时候
得用intracellular staining,后者是surface marker直接可以FACS。helios 和
neuropilin尤其是后者是前不久才发现的,能不能可靠得作为2者得区别还要经过时间
考验。
3. Treg本身要想阔增得话,我想il-2肯定需要,别的不知道,需要TGF-beta etc么?
不懂,不好意思啊!t cell subset有很多plasticity,各种subset identity未必那么
清楚的
4. 没有真正做过treg的试验,不知道。
以上都是上课时候学过的,不保证100%涵盖所有正确答案
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t*l
3
1. 如果用foxp3,纯度和准确度会大大提高,一般做Treg的LAB都有foxp3 reporter
mouse.
3. phenotype可能会改变,看你的culture condition了,因为Treg 也可以表达T-bet
RORgT.phenotype肯定会变的。
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t*l
4
如果你真的想做Treg这个圈子,foxp3 reporter mouse必须有,许多做cancer的人也开
始做免疫,而且发了一些paper说tumor cell express foxp3 too. 如果你不能在foxp3
reporter mouse的环境下做你的tumor model,你是不是用bead或者FACS surface
staining分离出来你tumor sample里面的Treg, 然后再做Foxp3 Intracellular stain
测纯度。
关键是不清楚你下部要做什么。
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