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三个片段连接的问题
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d*9
2 楼
一个质粒上只有两个酶切位点NheI和AscI，但是我要连接两个不同来源的PCR产物，酶
切后一段含NheI和BamHI,另一段含BamHI和AscI,可不可以直接将3段连接？有什么办法
可以提高效率？请求高手帮忙，多谢多谢！
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g*e
3 楼
It's entry level card

【在 x****s 的大作中提到】
: 请教一下citi Dividend
: Earn $200 cash back after $500
: http://citi.bridgetrack.com/usc/Dividend/Dec2011/200cb/external
: 5%cb 是1/1-3/31, 不过主要是对200感兴趣，请教一下板油，这连接算还活着的吧？
: PS，刚查了experian，4年历史，734分。。 会很难通过么？
: 谢谢呀
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p*e
4 楼
可以先放到两个载体上， 再从上面切下来做三段连， 比直接做三段连效率高些。

【在 d**********9 的大作中提到】
: 一个质粒上只有两个酶切位点NheI和AscI，但是我要连接两个不同来源的PCR产物，酶
: 切后一段含NheI和BamHI,另一段含BamHI和AscI,可不可以直接将3段连接？有什么办法
: 可以提高效率？请求高手帮忙，多谢多谢！
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f*i
5 楼
should be ok
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w*e
6 楼
直接把三个扔在一起，把载体 (最长的那个）
的量相对少一半（减少载体自连），运气只要不太差的话，一下子就成了；

【在 d**********9 的大作中提到】
: 一个质粒上只有两个酶切位点NheI和AscI，但是我要连接两个不同来源的PCR产物，酶
: 切后一段含NheI和BamHI,另一段含BamHI和AscI,可不可以直接将3段连接？有什么办法
: 可以提高效率？请求高手帮忙，多谢多谢！
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x*s
7 楼
thx
希望5%cb 能match
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s*s
8 楼
四个base互补，问题不大

【在 d**********9 的大作中提到】
: 一个质粒上只有两个酶切位点NheI和AscI，但是我要连接两个不同来源的PCR产物，酶
: 切后一段含NheI和BamHI,另一段含BamHI和AscI,可不可以直接将3段连接？有什么办法
: 可以提高效率？请求高手帮忙，多谢多谢！
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x*s
9 楼
thx
希望5%cb 能match
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H*i
10 楼
直接连就行了，PCR产物要保证没有小的杂带可以提高效率
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s*i
11 楼
一般情况下PCR产物切胶回收比直接purify要好得多，也避免了这种杂带的问题
个人经验可以考虑直接三段连，但是不如从质粒上切下来效率高。
可以适当延长PCR产物的酶切时间，因为酶切不完全是导致三段连法连接失败的主要原因

【在 H*******i 的大作中提到】
: 直接连就行了，PCR产物要保证没有小的杂带可以提高效率
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s*n
12 楼
直接连没问题，做个colony PCR screen一下就可
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