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DNA recombination problem:restriction analysis shows the insert is longer than expected

DNA recombination problem:restriction analysis shows the insert is longer than expected# Biology - 生物学

m*k2013-06-21 07:06

1 楼

选举失利后，GOP内部开始有声音赞成CIR和非法移民relief。因此有很多评论说，共和
党可能会支持CIR通过。我认为这个可能性非常小，理由如下：
1. 美国民调、普查非常发达，选举之前GOP就知道能投票的老墨有多少，以及对两党的
支持率。要说等到大选之后才知道墨西哥人的力量，那是扯淡。
2. 即使GOP支持非移，老墨和黑人还是会把credit算到民主党身上。谁要是说GOP同意
了CIR，就肯定能拉到老墨的票，那也是扯淡。GOP的政策本身就不符合穷人利益，只有
民主党才从根本符合穷人利益。而如果GOP支持CIR，就会失去很多原本的支持者，反而
还不到穷人的选票。综合起来肯定是不划算。

l*y2013-06-21 07:06

2 楼

看来这部《那年花开月正圆》的评价比前几部电视剧好多了啊，群众的眼睛是雪亮的，
我也觉得这一部是演技在线的良心之作，其实不管孙俪其他方面如何，至少演戏还是很
认真的。
最近不是有很多中年女明星演少女么，我看了也就是孙俪演的最好，比杨幂、陈乔恩、
周迅、林心如等等演的都好。
林心如别提了，面部已经老的毫无少女的感觉了，鱼尾纹明显，面部浮肿，就不该演少
女的了，最起码也得颜值够得上也可以吧，都这样子了，还要演少女，而且导演居然也
用，真不知道是在拿观众当瞎子还是怎么的了。
陈乔恩，我不能说她演技多么的垃圾，但是我不喜欢台湾演员的那种嗲嗲的腔调，没理
由。
周迅则是演技没有进步，并且有点装了，没有孙俪这么自然，我觉得周迅不适合演活泼
的角色，看看《射雕英雄传》她演黄蓉的表现吧，太失望了。
杨幂当然只是个反面教材，她不能称之为演员，没有一部叫人喜欢的剧，一部都没有。
孙俪演少女，颜值上OK，没有违和感，主要是眼神很灵动，很有少女的感觉，也不面瘫
，主要是演技弥补了年龄，我觉得孙俪比周迅有灵性多了。

Z*C2013-06-21 07:06

3 楼

怎么iphone被有些小资们折腾的和开德车一样时髦了。
先声明我算iPhone 粉了，仅有过的7部smartphone 有4个是iPhone. 要说好用，可靠，
稳定，不需要维修和许多养护，iPhone 第一了。可是这难道不是矬人没钱人的选择吗？
如果我有很多的钱，我会买一堆android, 轮流使用，坏了大手一挥送维修。修不好每
年仍掉一些该淘汰掉的。
再说说保值的事情吧。大多数android 基本没有保值一说的。除了galaxy, 再转手卖还
能卖个合理的价钱。可是iPhone 硬是保值没商量。前年我的iPhone 5 , 买进和卖出一
个价。中间使用3个月。
去年一部iPhone 6, 买入价300美刀，使用5个月，二手网站不怎么费力就找到了买家，
280 美刀卖出。基本可以说是用iPhone 不用花钱了。
别的手机就根本不行，100 刀买的android, 使用4个月后情况好的话，能卖出40刀都该
谢天谢地了。最后30刀卖掉，买家还流露出一副给了我很大恩惠的神色。
最后说使用体验吧。其实是各有千秋。android 选择多，有些游戏苹果都没有。虽然
苹果手机的乐趣也是独一无二的。
所以说用android 就和开德车一样是很烧钱的事，既然烧钱那就该在有钱人堆里更时髦
啊。怎么越有钱越推崇iPhone 了呢，这不是世上颠倒颠哪。

j*a2013-06-21 07:06

4 楼

The insert should be 0.9 kb, which is correct on oagarose gel
electrophoresis analysis. However, after ligation, tranformation. Positive
transformants show plasmid (correct size( and insert (1.5 kb instead 0.9 kb)
. Then we expressed it and do not get the protein. Any suggstion? Thanks

d*p2013-06-21 07:06

5 楼

你先搞清楚历史上到底是哪个党在push cir吧？说得好象是共和党不愿意搞cir似的

T*u2013-06-21 07:06

6 楼

孙俪不错我喜欢。周迅在红高粱里很少女，四十岁演十九岁一点不违和。

q*72013-06-21 07:06

7 楼

既然知道插入的片段大小不对，怎么还进行下面的表达？首先测序列呀。你可以试一下
这个公司的DNA片断和PCR纯化KIT。可以提高克隆效率，便宜而且好用
http://www.greenbioresearch.com/gel-extraction-pcr-purification
http://www.greenbioresearch.com/plasmid-dna-isolation-miniprep-

l*r2013-06-21 07:06

8 楼

也许是发现选举的结果的民调结果差距太大

o*e2013-06-21 07:06

9 楼

前一段看了周迅演的电影，《明月几时有》觉得他现在的状态不是很好

g*n2013-06-21 07:06

10 楼

You should sequence the constructs, at least, to make sure that the ORF is
correct (with start and stop codons).

c*a2013-06-21 07:06

11 楼

赞

【在 m***k 的大作中提到】

: 选举失利后，GOP内部开始有声音赞成CIR和非法移民relief。因此有很多评论说，共和
: 党可能会支持CIR通过。我认为这个可能性非常小，理由如下：
: 1. 美国民调、普查非常发达，选举之前GOP就知道能投票的老墨有多少，以及对两党的
: 支持率。要说等到大选之后才知道墨西哥人的力量，那是扯淡。
: 2. 即使GOP支持非移，老墨和黑人还是会把credit算到民主党身上。谁要是说GOP同意
: 了CIR，就肯定能拉到老墨的票，那也是扯淡。GOP的政策本身就不符合穷人利益，只有
: 民主党才从根本符合穷人利益。而如果GOP支持CIR，就会失去很多原本的支持者，反而
: 还不到穷人的选票。综合起来肯定是不划算。

g*12013-06-21 07:06

12 楼

为什么我觉得孙俪的眼神就没有灵动过。我觉得她演的最好的是小姨多鹤

b*n2013-06-21 07:06

13 楼

关于1：民调，普查没有你想的那么发达。普查一般的误差率3%左右，而这一次候选人
在摇摆州的差距非常小，普查是查不出来的。如果普查真的那么强大精确，那么根本就
不用再选了。
关于2：历史上西班牙语人比较支持民主党，但是支持率没有这么畸形的高。正式因为
非法移民问题玄而未决，西语选民认为民主党是唯一能拯救他们的政党，才导致现在的
情况。如果非法移民问题早就解决了，奥巴马选举前的大赦政策就失效了。所以，现在
解决这个问题，对共和党是有好处的。他们当然没有指望通过这个法案能正确大部分西
语选民，但是只要能使之回归正常，就足够了。
这次罗姆尼在争取共和党基本盘上做到最好了，后来的共和党人最好也不过如此，可是
还是输了。共和党必须做些什么改变现状，否则死路一条。

o*e2013-06-21 07:06

14 楼

孙俪的眼神也许不是最灵澈的，但到了中年还能这么干净温和很难得。她的生活比较平
衡，所以眼中没有沧桑感。王子文还有少女的颜，但是眼神却不年轻。

j*82013-06-21 07:06

15 楼

楼上讲的大部分有道理，最后几句话我不同意。如果Obama第二任还是这么不温不火的
话，我觉得4年后共和党希望很大。
罗姆尼其实是矮子里面选个高的。你看开始出来和他竞争的那几个人。Herman Cain,
Newt Gingrich, Rick Santorum, Michele Bachmann是像能选总统的人吗？都是为了出
点名，挣点钱而已。
形容罗姆尼最好的英文单词是"ambivalence", 共和党也知道他希望不大。看webster网
站上对他的形容：
Ambivalence – which refers to very different feelings (such as love and
hate) about someone or something at the same time – was widely used to
describe the Republican reaction to Mitt Romney's victories in New Hampshire
and Iowa.
For example:
"Romney is marching toward the Republican presidential nomination despite
doubts and ambivalence from much of the GOP's conservative base." – Adam C.
Smith, Tampa Bay Times, January 9, 2012.
Ambivalence came from a German term that was coined by the new field of
psychology in the early 1900s. It combines the Latin words ambi ("both") and
valence ("strength").
http://www.merriam-webster.com/trend-watch/2012/01/12/?&t=13530
现在还真不知道共和党下一步的动作是什么，只有静观其变了。

s*c2013-06-21 07:06

16 楼

孙俪演技如今这么好了么，记得以前看电影《画皮》，那时觉得孙俪演技在那里垫底。
周迅原是多好的演员呀，以前除了《射雕》差外，哪个演得不好。哎，她可能真是情商
太差了，管理不好自己的生活，感情总是多变，也不会保养自己，其实她原本五官长得
多好，却老得那么快

g*12013-06-21 07:06

17 楼

孙俪的电影都很难看，所以她果断转回电视圈。她的演技不细腻，五官长相在大屏幕也
很平淡。电视剧里总演美女，美妃，太后的，到了电影里总是小人物小跟班。

：孙俪演技如今这么好了么，记得以前看电影《画皮》，那时觉得孙俪演技在那里垫底
。周迅原是多好的演员呀，以前除了《射雕》差外，哪个演得不好。哎，她可能真是情
商太差了，管理不好自己的生活，感情总是多变，也不会保养自己，其实她原本五官长
得多好，却老得那么快