这种情况一定要做Southern Blot吗 - 未名空间MITBBS历史存档

这种情况一定要做Southern Blot吗# Biology - 生物学

s*n2013-07-02 07:07

1 楼

实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠，是他自己做的，但是他说
只能用southern blot来鉴定杂合和纯和，因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
同源的序列，他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
但是我不想做Southern Blot啊啊啊，主要是要摸索，而且要花好多时间啊。。。
想问真的没有其他的办法了吗？

s*a2013-07-02 07:07

2 楼

southern一般在ES克隆的时候就做了吧，后来PCR做genotyping就可以了。Southern不
会不PCR简单的。

【在 s******n 的大作中提到】

: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠，是他自己做的，但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和，因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列，他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊，主要是要摸索，而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗？

n*32013-07-02 07:07

3 楼

PCR 是最简单的了，再多试试不同的引物组合。pcr产物也可以酶切看产物大小。good
luck

b*r2013-07-02 07:07

4 楼

人都说了试了好久都不行，你就肯定比人家聪明？
做实验不要想着cut corner，southern也不是那么可怕的东西。实验有比什么都重要

good

【在 n****3 的大作中提到】

: PCR 是最简单的了，再多试试不同的引物组合。pcr产物也可以酶切看产物大小。good
: luck

h*n2013-07-02 07:07

5 楼

设计一些taqman probe + primer

【在 s******n 的大作中提到】

: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠，是他自己做的，但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和，因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列，他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊，主要是要摸索，而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗？

m*52013-07-02 07:07

6 楼

不亲手试一下不甘心

【在 b****r 的大作中提到】

: 人都说了试了好久都不行，你就肯定比人家聪明？
: 做实验不要想着cut corner，southern也不是那么可怕的东西。实验有比什么都重要
:
: good

l*b2013-07-02 07:07

7 楼

请把这个KO模型的cloning strategy拿出来讲一讲，这样大家才好出谋划策啊。

【在 s******n 的大作中提到】

: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠，是他自己做的，但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和，因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列，他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊，主要是要摸索，而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗？

r*e2013-07-02 07:07

8 楼

要不用roche的那个AP标记，做southern?
灵敏度比isotope略差，做genotyping应该够了，至少比较安全。

【在 s******n 的大作中提到】

: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠，是他自己做的，但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和，因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列，他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊，主要是要摸索，而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗？

m*52013-07-02 07:07

9 楼

是啊大家看着都很好奇

【在 l****b 的大作中提到】

: 请把这个KO模型的cloning strategy拿出来讲一讲，这样大家才好出谋划策啊。