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这种情况一定要做Southern Blot吗
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这种情况一定要做Southern Blot吗# Biology - 生物学
s*n
1
实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠,是他自己做的,但是他说
只能用southern blot来鉴定杂合和纯和,因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
同源的序列,他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
但是我不想做Southern Blot啊啊啊,主要是要摸索,而且要花好多时间啊。。。
想问真的没有其他的办法了吗?
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s*a
2
southern一般在ES克隆的时候就做了吧,后来PCR做genotyping就可以了。Southern不
会不PCR简单的。

【在 s******n 的大作中提到】
: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠,是他自己做的,但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和,因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列,他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊,主要是要摸索,而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗?

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n*3
3
PCR 是最简单的了,再多试试不同的引物组合。pcr产物也可以酶切看产物大小。good
luck
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b*r
4
人都说了试了好久都不行,你就肯定比人家聪明?
做实验不要想着cut corner,southern也不是那么可怕的东西。实验有比什么都重要

good

【在 n****3 的大作中提到】
: PCR 是最简单的了,再多试试不同的引物组合。pcr产物也可以酶切看产物大小。good
: luck

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h*n
5
设计一些taqman probe + primer

【在 s******n 的大作中提到】
: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠,是他自己做的,但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和,因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列,他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊,主要是要摸索,而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗?

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m*5
6
不亲手试一下不甘心

【在 b****r 的大作中提到】
: 人都说了试了好久都不行,你就肯定比人家聪明?
: 做实验不要想着cut corner,southern也不是那么可怕的东西。实验有比什么都重要
:
: good

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l*b
7
请把这个KO模型的cloning strategy拿出来讲一讲,这样大家才好出谋划策啊。

【在 s******n 的大作中提到】
: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠,是他自己做的,但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和,因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列,他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊,主要是要摸索,而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗?

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r*e
8
要不用roche的那个AP标记,做southern?
灵敏度比isotope略差,做genotyping应该够了,至少比较安全。

【在 s******n 的大作中提到】
: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠,是他自己做的,但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和,因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列,他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊,主要是要摸索,而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗?

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m*5
9
是啊大家看着都很好奇

【在 l****b 的大作中提到】
: 请把这个KO模型的cloning strategy拿出来讲一讲,这样大家才好出谋划策啊。
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