m*s
2 楼
首先还是老生重谈：
奥斯卡到底要的是什么样的影片？
在很多人看来一个漫无边际的话题，实际上不是，纵观历年来的奥斯卡获奖电影，总还
是有一个大方向是可以去摸索的。
一类是政治正确，近些年来愈发占据上风，代表作品：
《为奴十二年》（2013）《普通女人》（2017）
此类作品导演技巧、电影演技大多在水准线之上，但是远还没有好到可以获奖的地步，
但由于题材讨巧，例如《为奴十二年》，讲的是一个寻寻常常的普通黑人变成黑奴，然
后翻身的故事，天然便占着政治正确这四个字的光辉，再例如《普通女人》——变性女
人政治正不正确？更可怕的是变性女人拿起法律武器去追寻自己合法权利。
得了，政治正确×3。这奖您老且先拿走，小的家小业小，可不敢和人家民意对着干。
言归正传，我不是药神政治正不正确？
正确。
但是是属于东亚的政治正确，显然不符合美国人的观点，故而在题材上并没有加分，比
如韩国拍过很多类似的电影：《恐怖直播》、《辩护人》，《素媛》、《熔炉》，但韩
国至今没有一部电影获得过奥斯卡提名。
哪怕一部。
西方惯来讽刺政府讽刺的多，花样层出不穷，直白的如《v字仇杀队》，委婉的如《发
条橙》，讽刺到如今，都嫌腻了，好比一个成天吃大鱼大肉的人，再给他端上一盆红烧
肉，管你烧的再怎么滑而不腻，再怎么喷香四溢，耐不住人家看见了就想吐——没辙。
二来是故事拍的好。
故事拍的好有很多种，比如说故事写的好（编剧厉害）、故事讲的好（导演牛逼）、故
事演的好（演技在线），无论哪一种，足够拔尖就行。
可如今电影拍了百多年，拍过的电影数以百万计，没点让人眼前一亮的手法，是很难从
中杀出的。
我们回过头来看看《我不是药神》。
剧本不谈，第一点已经提到过，平淡无奇，而从导演手法上来看，这片子属于最最典型
的线性叙事电影，即时间地点人物都是按着时间线发展的，没有插叙，没有倒叙，更没
有如同《恐怖游轮》、《低俗小说》一般的环形叙事，这种线性叙事方法的好处显而易
见——观众看着不吃力，不烧脑，但人家奥斯卡评委少说看了上万部电影，对于观众不
吃力不烧脑的电影，在他们眼里就和幼儿动画没什么区别。
就像你不会把奖项颁给喜羊羊一样，奥斯卡评委也不会把奖项颁给《我不是药神》。
电影演员的演技怎么样？
不错。但只是不错。商业化电影有一个通病，即过于在乎观众的感受而舍弃了艺术上的
追求。我不是药神本质上是一部商业电影，当商业利益与艺术追求起到矛盾时，必然是
选择商业利益而不是艺术，所以电影充斥了大量只为博人一笑的片段，演员的演技在这
些片段时显得尤为浮夸。
邪不压正我也看了，显然是一部具有姜文风格、但却算不上特别优质的电影，导演风格
一如既往。即便遮住导演名字，一看这电影就知道只能是姜文拍的出来。编剧天马行空
，演员演技也还行，但依然存在些许浮夸，在得奖概率上，要比我不是药神高许多，但
冲奥，哪怕只是提名，想来还是有那么些许难度。
今年大概率又是陪跑了。
奥斯卡到底要的是什么样的影片？
在很多人看来一个漫无边际的话题，实际上不是，纵观历年来的奥斯卡获奖电影，总还
是有一个大方向是可以去摸索的。
一类是政治正确，近些年来愈发占据上风，代表作品：
《为奴十二年》（2013）《普通女人》（2017）
此类作品导演技巧、电影演技大多在水准线之上，但是远还没有好到可以获奖的地步，
但由于题材讨巧，例如《为奴十二年》，讲的是一个寻寻常常的普通黑人变成黑奴，然
后翻身的故事，天然便占着政治正确这四个字的光辉，再例如《普通女人》——变性女
人政治正不正确？更可怕的是变性女人拿起法律武器去追寻自己合法权利。
得了，政治正确×3。这奖您老且先拿走，小的家小业小，可不敢和人家民意对着干。
言归正传，我不是药神政治正不正确？
正确。
但是是属于东亚的政治正确，显然不符合美国人的观点，故而在题材上并没有加分，比
如韩国拍过很多类似的电影：《恐怖直播》、《辩护人》，《素媛》、《熔炉》，但韩
国至今没有一部电影获得过奥斯卡提名。
哪怕一部。
西方惯来讽刺政府讽刺的多，花样层出不穷，直白的如《v字仇杀队》，委婉的如《发
条橙》，讽刺到如今，都嫌腻了，好比一个成天吃大鱼大肉的人，再给他端上一盆红烧
肉，管你烧的再怎么滑而不腻，再怎么喷香四溢，耐不住人家看见了就想吐——没辙。
二来是故事拍的好。
故事拍的好有很多种，比如说故事写的好（编剧厉害）、故事讲的好（导演牛逼）、故
事演的好（演技在线），无论哪一种，足够拔尖就行。
可如今电影拍了百多年，拍过的电影数以百万计，没点让人眼前一亮的手法，是很难从
中杀出的。
我们回过头来看看《我不是药神》。
剧本不谈，第一点已经提到过，平淡无奇，而从导演手法上来看，这片子属于最最典型
的线性叙事电影，即时间地点人物都是按着时间线发展的，没有插叙，没有倒叙，更没
有如同《恐怖游轮》、《低俗小说》一般的环形叙事，这种线性叙事方法的好处显而易
见——观众看着不吃力，不烧脑，但人家奥斯卡评委少说看了上万部电影，对于观众不
吃力不烧脑的电影，在他们眼里就和幼儿动画没什么区别。
就像你不会把奖项颁给喜羊羊一样，奥斯卡评委也不会把奖项颁给《我不是药神》。
电影演员的演技怎么样？
不错。但只是不错。商业化电影有一个通病，即过于在乎观众的感受而舍弃了艺术上的
追求。我不是药神本质上是一部商业电影，当商业利益与艺术追求起到矛盾时，必然是
选择商业利益而不是艺术，所以电影充斥了大量只为博人一笑的片段，演员的演技在这
些片段时显得尤为浮夸。
邪不压正我也看了，显然是一部具有姜文风格、但却算不上特别优质的电影，导演风格
一如既往。即便遮住导演名字，一看这电影就知道只能是姜文拍的出来。编剧天马行空
，演员演技也还行，但依然存在些许浮夸，在得奖概率上，要比我不是药神高许多，但
冲奥，哪怕只是提名，想来还是有那么些许难度。
今年大概率又是陪跑了。
D*A
3 楼
用GPS自带的吸在挡风玻璃上好像有点挡着视线了。
n*3
4 楼
近来克隆了一个3kb片段到31kb质粒内，然后做单切如lane 1 和双切如lane 2，lane 3
为2切后回收31kb 的大片段，ladder 最大为12kb。 胶0.8%
正常吗，问题在哪里？
为2切后回收31kb 的大片段，ladder 最大为12kb。 胶0.8%
正常吗，问题在哪里？
w*p
5 楼
too old.我同事四五年前就天天放这个了
【在 M****b 的大作中提到】
: http://www.youtube.com/watch?v=jCIp7eo4MvY
【在 M****b 的大作中提到】
: http://www.youtube.com/watch?v=jCIp7eo4MvY
c*x
6 楼
ebay 搜搜看
s*s
7 楼
啥不正常？
3
【在 n****3 的大作中提到】
: 近来克隆了一个3kb片段到31kb质粒内，然后做单切如lane 1 和双切如lane 2，lane 3
: 为2切后回收31kb 的大片段，ladder 最大为12kb。 胶0.8%
: 正常吗，问题在哪里？
3
【在 n****3 的大作中提到】
: 近来克隆了一个3kb片段到31kb质粒内，然后做单切如lane 1 和双切如lane 2，lane 3
: 为2切后回收31kb 的大片段，ladder 最大为12kb。 胶0.8%
: 正常吗，问题在哪里？
p*h
8 楼
http://lastcall.dailysteals.com/
【在 D********A 的大作中提到】
: 用GPS自带的吸在挡风玻璃上好像有点挡着视线了。
【在 D********A 的大作中提到】
: 用GPS自带的吸在挡风玻璃上好像有点挡着视线了。
n*3
9 楼
大片段锯齿状，而且拉的比较宽，不象ladder清晰的带
s*s
10 楼
你load这么多，当然这样了。
【在 n****3 的大作中提到】
: 大片段锯齿状，而且拉的比较宽，不象ladder清晰的带
【在 n****3 的大作中提到】
: 大片段锯齿状，而且拉的比较宽，不象ladder清晰的带
n*3
11 楼
也就几十 纳克，莫非还搞个脉冲场电泳？
c*r
12 楼
你确定只有几十纳克？最小那个条带如果只有几十纳克我信。如果最下边的的小片段是
3k，有几十纳克的话，31k的质粒上样有几百纳克了吧。
【在 n****3 的大作中提到】
: 也就几十 纳克，莫非还搞个脉冲场电泳？
3k，有几十纳克的话，31k的质粒上样有几百纳克了吧。
【在 n****3 的大作中提到】
: 也就几十 纳克，莫非还搞个脉冲场电泳？
s*s
13 楼
//nod
那个ladder至少每条50，3k不到的条带100,31k的说不定都有1ug了
【在 c*********r 的大作中提到】
: 你确定只有几十纳克？最小那个条带如果只有几十纳克我信。如果最下边的的小片段是
: 3k，有几十纳克的话，31k的质粒上样有几百纳克了吧。
那个ladder至少每条50，3k不到的条带100,31k的说不定都有1ug了
【在 c*********r 的大作中提到】
: 你确定只有几十纳克？最小那个条带如果只有几十纳克我信。如果最下边的的小片段是
: 3k，有几十纳克的话，31k的质粒上样有几百纳克了吧。
s*m
14 楼
你样品的buffer是什么？
会不会是盐太高了？
3
【在 n****3 的大作中提到】
: 近来克隆了一个3kb片段到31kb质粒内，然后做单切如lane 1 和双切如lane 2，lane 3
: 为2切后回收31kb 的大片段，ladder 最大为12kb。 胶0.8%
: 正常吗，问题在哪里？
会不会是盐太高了？
3
【在 n****3 的大作中提到】
: 近来克隆了一个3kb片段到31kb质粒内，然后做单切如lane 1 和双切如lane 2，lane 3
: 为2切后回收31kb 的大片段，ladder 最大为12kb。 胶0.8%
: 正常吗，问题在哪里？
n*3
15 楼
看来可能是bufferr，lane 1 and lane 2 are 1x digestion buffer, lane 3 is
microinjection buffer with salt
microinjection buffer with salt
q*8
16 楼
上样太多了吧。。。我做切胶回收的时候都是这个样子的。。。。。。
n*3
17 楼
公司认为smear是降解的dna, 让我重新提供用于注射的dna，我再调整一下上样量
t*t
18 楼
microinjection 你用的哪个公司？
k*n
19 楼
DNA load 太多了。。。。。
n*3
20 楼
稀释后效果好多了，没有降解。我在scripps,老板最后决定在所里的transgenic core
做，主要原因是生出来的是b6背景，2250刀一次，不保证是否能得到转基因动物，因为
我的片段大
做，主要原因是生出来的是b6背景，2250刀一次，不保证是否能得到转基因动物，因为
我的片段大
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