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求助Hela transfection# Biology - 生物学
c*7
1
2010年总结:
据国家水分局统计,改革开放三十年来,升值最快的是住房、墓地、乌纱帽、月饼
和二奶。
贬值最快的是职称、文凭、道德、诚信和人民币。(PS:这个人民币在贬值吗?不
是吧)
中国已初步建设成为一个由月光族、啃老族、打工族、蜗居族、蚁族、牢骚族、抱
怨族、行骗族、逐利族和隐婚族组成的多民族国家。
这是一个给力的一年,这是一个杯具的一年,这也是一个纠结的一年。
这一年,中国依然举办了一年一度的春节联欢晚会,只是赵本山的小品越来越像冯
小刚的电影,刘谦的魔术越来越像话剧,小虎队的貌合神离也只能让人感叹时光飞逝。
这一年,加拿大举办了冬奥会,这届冬奥会的话题不是点火失败,而是周洋没有“
先感谢国家”。
这一年,阿sa从未婚到离婚再到热恋,让人感慨Twins不仅长得像,连做人也是一
样的套路。
这一年,中国的考古学家们在曹操墓里发现了两块头盖骨,一块曹操的,一块曹操
小时侯的。
这一年,江西的一个钉子户用最无奈的方式结束了自己的生命,他的死证明不了有
关部门的野蛮与无耻,只能证明汽油一点就着。
这一年,8名香港游客死在了菲律宾pol.ice的枪口下,让香港人知道菲律宾除了有
“菲佣”,还有“菲警”。
这一年,一个叫《非诚勿扰》的相亲节目将挂羊头卖狗肉诠释的淋漓尽致,坐在宝
马车里哭什么的都是浮云。
这一年,局长们纷纷养成了爱写“日记”的好习惯,只是关键时刻步了陈摄影艺术
家的后尘。
这一年,富士康的员工在工作的闲暇之余玩儿起了连环接力“跳”。
这一年,上海世博会的圆满落幕成功改写了上海解放日。   这一年,期待已久
的世界杯如约而至,只是比赛的胜负好像都是“保罗”说了算。
这一年,郭德纲从一个非着名相声演员变成了一个非常着名的相声演员,又说相声
又做主持,偶尔还打打人,足以说明不打人的相声演员不是好主持。
这一年,海地地震震死了8个中国人,而玉树的地震却震死了许多中国人,更可恨
的是新西兰的地震居然没死人,中国表示鸭梨很大。
这一年,智利不但发生了地震还发生了矿难,33名矿工在井下呆了两三个月都没死
,不但证明了大地可以“孕育”人类,更像是在提醒某些国家,矿难不一定要死人。
这一年,上海的大楼火灾让电焊工搬运工们开始考虑是否需要办个证以及证明中国
的菊花市场有巨大的潜力。
这一年,一部《盗梦空间》的电影让我在写这篇文章的时候还在怀疑是不是在做梦

这一年,嫦娥二着奔月去了,到现在还没回,国人疾呼:这眼看着就要奔三了,怎
么还没二够呢?
这一年,中国开发了一块新的戈壁滩叫“马勒戈壁”,并且发现一种新马种“草泥
马”,国人对其喜爱的程度将会很快成为这个民族的图腾。
这一年,一个卖汽车的和一个卖运动鞋的在关于谁“给力”和谁“不给力”的问题
上发生了分歧从而引发了“3Q大战”,最后“狗日的腾讯”做出了“一个艰难的决定”
,末了才知道这俩孙子何止是“坑爹”,简直就是“坑爹”。
这一年,中国举行了两次全国哀悼日,广大同胞们在哀悼的同时也深刻的体会到只
要一举行哀悼日,网游的服务器就要停了。
这一年,喜欢看《知音》和《故事会》的凤姐横空出世并出名,为了能够让做奥巴
马情人的梦想成真,她还去了美国,但由于英语的地方口音太重被拒之门外了。
这一年,奥利奥、香蕉、皮蛋、瘦肉粥、梅干菜、盖浇饭等食品被一个娇嗔似黛玉
体态似玉环的“小月月”糟践的身首异处、体无完肤。
这一年,一个我童年非常喜欢玩的游戏“躲猫猫”开始变得越来越危险。
这一年,广州不但举办了亚运会还举办了亚残运会,从点火仪式上看就知道这个国
家有多么爱玩火。
这一年,中国的高房价让很多人从还没来得及考虑是否“蜗居”到不得不“蚁族”
的现实中意识到你能建我也能建。
这一年,超女王贝整容失败了,不但脸没了,连命也没了,东北人常说的——我整
死你,是不是这个意思。
这一年,黄晓明告诉了我们,穿鞋内增高什么的早就OUT了,把增高鞋垫放在袜子
里才叫有才华。
这一年,让我认识到没有iphone4,都不好意思用手机织围脖。
这一年,大S的闪婚证明了一见钟情神马的都是浮云。   这一年,国产奶粉开始
有了丰胸的功能。
这一年,李刚没有出名,李刚的儿子也没有出名,但是李刚的儿子的爸爸出名了。
这一年,伟哥不但可以随便叫了还可以随便生产了
这一年,一向淡定的王菲带着对哪吒的思念亮相春晚,最近还穿了一个连过了英语
四级的人都不认识的马甲在微博上臭贫,让人认识到闷骚这个词不但适合男人,还适合
女人。
这一年,朝鲜的小金接了老金的班,但很快就跟隔壁的老李干起来了,原因竟然是
小金在微博上关注老李却被老李拒绝了。
这一年,最后几天,在钱云会村长的头颅配合下,无情的车轮在历史前进的道路上
又留下了深深的印迹。
这一年,祖国的人民依然生活在水深火热之中,但值得庆幸的是,大部分中国人都
还坚强的活着。作为21世纪社会主义事业的接班人,强烈的社会责任感无数次的敲打着
我的心灵,没能让广大的人民群众过上好日子,我倍感惭愧,每念及于此,都潸然泪下
,不能自己。
再见2010!
你好2011!
一个国家的文明程度,不在于能不能办奥运会,不在于能不能办世博会,能不能办
亚运会,也不在于能买多少美国垃圾国债,更不在于能去国外几十亿几百亿下订单,而
是在于让公民坐在家里不会被烧死、上街摆摊不会被扇耳光,走路不会被李刚家的宝马
车撞,想吃什么都不用担心会有毒。
这个世界就是:不吸烟的得肺癌,不工作的做老板,不爱国的当大官;真正的爱不
能要,真正的事不能干,真正的人不能做;需要书的读不起,需要房的买不起,需要人
的娶不起;有文化的留不了学,有能力的找不到活,有良知的赚不了钱。
三聚氰胺害了那么多儿童,最后抓了几个养奶牛的;央视大火烧掉10几亿,抓了几
个运烟火的;上海静安大火烧死53人,是4个电焊工的责任!跟西游记一样,有背景的
妖怪都被带走了,没背景的妖怪都被乱棍打死 豹子办了个澡堂子,包给狐狸,狐狸包
给松鼠,松鼠雇几只蚂蚁搓澡接客。有一天,狮子去洗澡,掉脸盆里淹死了。。。。虎
大王震怒,派pol.ice调查情况,骂了狐狸,打了松鼠,最后,抓了8只蚂蚁。。。。因
为他们,竟然没搓澡证!
最近,国家某部公布了一项统计数据,告诉人们:你要不是三大式人物(大款,大
官,大腕)而想在北京买套100平方米总价300万的房,社会阶层所付出的代价请看: 1
农民:种三亩地每亩纯收入400元的话要从唐朝开始至今才能凑齐(还不能有灾年);
2 工人:每月工资1500元需从鸦片战争上班至今(双休日不能休); 3 白领:年薪6
万,需从1960年上班就拿这么多钱至今不吃不喝(取消法定假日); 4 抢劫犯:连续
作案2500次(必须事主是白领)约30年。 5:妓 女:连续接客10000次,以每天都接一
次客,需备战10000天,从18岁起按此频率接客到46岁(中间还不能来例假) 以上还不
算装修、家具、家电等等费用。

中国的现状(经典) 1、ATM取出假钱--->银行无责 2、网上银行被盗--->储户责
任 3、银行多给了钱--->储户义务归还 4、银行少给了钱--->离开柜台概不负责 5、
ATM机出现故障少给钱--->用户负责 6、ATM机出现故障多给钱--->用户盗窃 7、广东开
平银行行长贪污4亿--->判2年 8、ATM多吐7万给老百姓许霆--->判无期
声明:转发不会送人民币,但如果觉得作为消费者,全中国十三亿储户不公平的,
请转发 ,有多少群转发多少群
中国现状:生不起,剖腹一刀五千起;读不起,选个学校三万起;住不起,二万多元
一平米;老婆不是娶不起,没房没车谁嫁你?养不起,父母下岗儿下地;病不起,药费
利润十倍起;活不起,一月辛劳一千几;死不起,火化下葬三万几。
总结(八个大字): 求生不得,求死不能

有群的都转发 加一句:谁看到谁最少转发一个群,转发2个以上群的愿他买彩票
中500万
教育:希望进去,绝望出来;
医疗:小病进去,大病出来;
房产:蜗居进去,房奴出来;
演艺:玉女进去,小姐出来;
信访:窦娥进去,疯子出来;
官场:海瑞进去,和绅出来;
煤窑:蹲着进去,躺着出来;
大学:校花进去,残花出来!
股市:杨百万进去,杨百劳出来,宝马进去,自行车出来,西装革履进去,三角裤出来
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c*n
2
不知道你们的都是多快,
NAS-我的电脑 大概就是70-80MB跳来跳去的,
是硬盘瓶颈还是路由瓶颈?
用的openwrt固件
CAT5E的线
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m*o
3
想在Hela转一个GFP tag的蛋白,试过lipofectamine和xtremegene效果都不好,基本上
看不到荧光。同样的条件在293细胞里转得还不错。求助哪位有经验的有没有别的
transfection reagent推荐,或者有没有什么tips?谢谢~
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c*7
4
转军版不知道会不会也有包子呢。。。那边的童鞋们应该喜欢讨论这些事情吧。。
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S*A
5
你如果是跑 Linux 很容易用 Linux 的 ncat, mbuffer 之类
的网络工具测量传输 /dev/zero 可以多快。
这样避免了读硬盘。
然后可以测量 dd 硬盘多块。
然后测量 dd 硬盘网络过去多快,跳过文件系统。
文件系统也有些 overhead 的。

【在 c********n 的大作中提到】
: 不知道你们的都是多快,
: NAS-我的电脑 大概就是70-80MB跳来跳去的,
: 是硬盘瓶颈还是路由瓶颈?
: 用的openwrt固件
: CAT5E的线

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s*y
6
这个听起来太奇怪了。Hela 是最容易转的细胞之一。
你确实自己亲手用同一批做出来的同一个plamid 和同样的试剂来转染过293cell 么?

【在 m********o 的大作中提到】
: 想在Hela转一个GFP tag的蛋白,试过lipofectamine和xtremegene效果都不好,基本上
: 看不到荧光。同样的条件在293细胞里转得还不错。求助哪位有经验的有没有别的
: transfection reagent推荐,或者有没有什么tips?谢谢~

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c*e
7
军版有人mark么?

【在 c*******7 的大作中提到】
: 转军版不知道会不会也有包子呢。。。那边的童鞋们应该喜欢讨论这些事情吧。。
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g*t
8
nas的速度很多因素决定,不用纠结,
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g*5
9
transit-lt1
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c*7
10
所以我去都不去,想都有罪。

【在 c********e 的大作中提到】
: 军版有人mark么?
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c*n
11
nas影响因素太多了
cpu smb设置都能影响
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c*0
12
Lipotransfectamine LTX&PLUS.
It is very good for Hela.
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W*o
13
中国网民也就是鲁鲁管骂骂娘写写这些东西了

【在 c*******7 的大作中提到】
: 2010年总结:
: 据国家水分局统计,改革开放三十年来,升值最快的是住房、墓地、乌纱帽、月饼
: 和二奶。
: 贬值最快的是职称、文凭、道德、诚信和人民币。(PS:这个人民币在贬值吗?不
: 是吧)
: 中国已初步建设成为一个由月光族、啃老族、打工族、蜗居族、蚁族、牢骚族、抱
: 怨族、行骗族、逐利族和隐婚族组成的多民族国家。
: 这是一个给力的一年,这是一个杯具的一年,这也是一个纠结的一年。
: 这一年,中国依然举办了一年一度的春节联欢晚会,只是赵本山的小品越来越像冯
: 小刚的电影,刘谦的魔术越来越像话剧,小虎队的貌合神离也只能让人感叹时光飞逝。

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t*d
14
这个速度基本正常。你可以在PC上搞个RAM盘,从nas copy到ram 盘来测试你的NAS的真
实速度,这样不受本机硬盘速度的影响。

【在 c********n 的大作中提到】
: 不知道你们的都是多快,
: NAS-我的电脑 大概就是70-80MB跳来跳去的,
: 是硬盘瓶颈还是路由瓶颈?
: 用的openwrt固件
: CAT5E的线

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a*n
15
毒性大不大?
我用2000毒性有点大啊

【在 c*******0 的大作中提到】
: Lipotransfectamine LTX&PLUS.
: It is very good for Hela.

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c*e
16
版里有12万伪币啊!!!你去做版主吧。哈哈

【在 c*******7 的大作中提到】
: 所以我去都不去,想都有罪。
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c*n
17

用的黑裙灰。。。也有个windows server还没测,想想速度应该差不多。。。
现在基本不用windows server了。。。基本功能nas都能实现

【在 S*A 的大作中提到】
: 你如果是跑 Linux 很容易用 Linux 的 ncat, mbuffer 之类
: 的网络工具测量传输 /dev/zero 可以多快。
: 这样避免了读硬盘。
: 然后可以测量 dd 硬盘多块。
: 然后测量 dd 硬盘网络过去多快,跳过文件系统。
: 文件系统也有些 overhead 的。

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j*i
18
你记错了吧 HeLa是有名的hard to transfect的细胞 大概只有10-20%能transfect到

【在 s******y 的大作中提到】
: 这个听起来太奇怪了。Hela 是最容易转的细胞之一。
: 你确实自己亲手用同一批做出来的同一个plamid 和同样的试剂来转染过293cell 么?

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c*7
19
因为保命要紧。。。
上访比这个写这个的危险系数要大。

【在 W**o 的大作中提到】
: 中国网民也就是鲁鲁管骂骂娘写写这些东西了
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w*u
20
这速度ok啦我家也是这速度
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c*0
21
Just lower down the Plus reagent dosage by half from the protocol they
provided. The cytotoxicity is not a problem.

【在 a*****n 的大作中提到】
: 毒性大不大?
: 我用2000毒性有点大啊

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c*7
22
5555555老大,我不敢,想都有罪。。
5555555你饶了我吧。。。。。。。。
我真没有想过啊。。。。5555555555
你做老大,我做小三,日子过得很好啊。

【在 c********e 的大作中提到】
: 版里有12万伪币啊!!!你去做版主吧。哈哈
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s*y
23
啊?为什么我用的HeLa都能轻松的达到80%呢?
而且我用的还是最普通的Lipofectamine。
刚才我上Lipofectamine2000的网站查了一下,上面说的效率是:
293F: 99%
HeLa: 94%
MDCK: 43%
这个和我印象中的一样。
http://tools.lifetechnologies.com/Content/SFS/ProductNotes/F_Li

【在 j******i 的大作中提到】
: 你记错了吧 HeLa是有名的hard to transfect的细胞 大概只有10-20%能transfect到
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c*e
24
我说你去军版做老大,弄堆马甲天天吃国库。。。。我也可以吃。。哈哈

【在 c*******7 的大作中提到】
: 5555555老大,我不敢,想都有罪。。
: 5555555你饶了我吧。。。。。。。。
: 我真没有想过啊。。。。5555555555
: 你做老大,我做小三,日子过得很好啊。

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X*n
25
多浪费,快去sigma买一瓶Pei,配上1升够你实验室用几十年了。效率不比lipo2000差。

【在 s******y 的大作中提到】
: 啊?为什么我用的HeLa都能轻松的达到80%呢?
: 而且我用的还是最普通的Lipofectamine。
: 刚才我上Lipofectamine2000的网站查了一下,上面说的效率是:
: 293F: 99%
: HeLa: 94%
: MDCK: 43%
: 这个和我印象中的一样。
: http://tools.lifetechnologies.com/Content/SFS/ProductNotes/F_Li

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c*7
26
这样啊。。。。
他。。。
他们。。。
他们咋。。。
他们咋那。。。
他们咋那么。。。
他们咋那么多。。。
他们咋那么多包。。。
他们咋那么多包子。。。
他们咋那么多包子呢。。。
咋能去军版做版大呢?
恩。。。。。。。。。
去版主之家申请?

【在 c********e 的大作中提到】
: 我说你去军版做老大,弄堆马甲天天吃国库。。。。我也可以吃。。哈哈
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s*y
27
我惭愧的问一下,这个Pei 对于其他细胞,比方说MEF好用么?我们其实主要是转MEF更
多一些,用来做细胞生物。但是做生化的时候也用HeLa, 293.

【在 X******n 的大作中提到】
: 多浪费,快去sigma买一瓶Pei,配上1升够你实验室用几十年了。效率不比lipo2000差。
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W*o
28
其实吧,你要是谁了这些人的老婆,他也还就是上网发帖讽刺你

【在 c*******7 的大作中提到】
: 因为保命要紧。。。
: 上访比这个写这个的危险系数要大。

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X*n
29
MEF我很少瞬转,不过很多难转的肿瘤细胞都可以用PEI转的。 而且你可以它做病毒。
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c*7
30
=。=我可乖了,都等他们喝多了的时候我去。。。
http://www.mitbbs.com/article_t/Joke/31855605.html
给个链接。

【在 W**o 的大作中提到】
: 其实吧,你要是谁了这些人的老婆,他也还就是上网发帖讽刺你
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b*2
31
HeLa很好转的。会不会是质粒的问题。我用2000转PCDNA一点问题都没有。

【在 m********o 的大作中提到】
: 想在Hela转一个GFP tag的蛋白,试过lipofectamine和xtremegene效果都不好,基本上
: 看不到荧光。同样的条件在293细胞里转得还不错。求助哪位有经验的有没有别的
: transfection reagent推荐,或者有没有什么tips?谢谢~

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m*o
32
嗯,是同一支tube里的plasmid。要转的是一个细菌蛋白,如果有毒的话会影响转染效
率吗?但是细胞形态看起来都不错,也没什么漂浮的细胞。准备拿GFP vector再试一次
。不知道是不是因为HELA传代太多的原因?还有如果普通显微镜看不到荧光的话,
western有没有可能看到表达?问题太多了,谢谢大牛先~

【在 s******y 的大作中提到】
: 这个听起来太奇怪了。Hela 是最容易转的细胞之一。
: 你确实自己亲手用同一批做出来的同一个plamid 和同样的试剂来转染过293cell 么?

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m*o
33
谢谢~

【在 g*********5 的大作中提到】
: transit-lt1
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m*o
34
嗯 谢谢 正在试这个

【在 c*******0 的大作中提到】
: Lipotransfectamine LTX&PLUS.
: It is very good for Hela.

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m*o
35
同样质粒转293还好 你用western测还是用荧光?

【在 b***2 的大作中提到】
: HeLa很好转的。会不会是质粒的问题。我用2000转PCDNA一点问题都没有。
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s*y
36
如果你确定你们的显微镜没有问题的话(比方说,你会不会放错了荧光filter啊?)
如果看都看不到的话,用WB是很渺茫的,因为其实眼睛能看到的敏感度比WB高。不过你
们都这样了,那就死马当活马医用WB试试看吧。
如果蛋白对细胞有毒的话,凡是转成功的都死掉了,当然会影响效率,但是没有道理一
个细菌蛋白对293 一点毒性都没有但是对HeLa有那么高的选择毒性。
我赞同你用GFP vector试一试,看看到底是细胞的问题还是plasmid的问题。

【在 m********o 的大作中提到】
: 嗯,是同一支tube里的plasmid。要转的是一个细菌蛋白,如果有毒的话会影响转染效
: 率吗?但是细胞形态看起来都不错,也没什么漂浮的细胞。准备拿GFP vector再试一次
: 。不知道是不是因为HELA传代太多的原因?还有如果普通显微镜看不到荧光的话,
: western有没有可能看到表达?问题太多了,谢谢大牛先~

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m*o
37
谢谢~filter肯定不会错
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t*n
38
估计细胞代数太多状态太差了,Hela的转染效率随便就到80%的,我个人感觉比293还好
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f*9
39
用transIT X2
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