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制备iPS cell 的疑惑请教

制备iPS cell 的疑惑请教# Biology - 生物学

Z*t2013-12-07 08:12

1 楼

制造iPS的四个基因oct4 klf4 sox2 myc
可不可以先做stable cell line stably 表达其中三个
再转染剩下的那个基因得到iPS cell
这样生成iPS的效率会不会比同时转染四个基因高？
生成的iPS cell里外源基因表达都会被silenced
那如果只转染其中三个基因再做selection 是不是可以稳定表达这三个外源基因不被
silenced？

j*i2013-12-07 08:12

2 楼

你这样的做目的是什么呢如果是效率问题完全没有必要啊 IPCs长的很快而且有四个
因子连在一起的lentivirus可用

b*e2013-12-07 08:12

3 楼

做iPS一般用原代细胞，体外最多可以传代50次？表达3个基因的话，可能还没有做成
stable cell line，细胞就死翘翘了。做过iPS的同学建议一下呗。

【在 Z******t 的大作中提到】

: 制造iPS的四个基因oct4 klf4 sox2 myc
: 可不可以先做stable cell line stably 表达其中三个
: 再转染剩下的那个基因得到iPS cell
: 这样生成iPS的效率会不会比同时转染四个基因高？
: 生成的iPS cell里外源基因表达都会被silenced
: 那如果只转染其中三个基因再做selection 是不是可以稳定表达这三个外源基因不被
: silenced？

s*r2013-12-07 08:12

4 楼

可以先转c-myc啊，转完就不怕细胞不长了哈哈

【在 b********e 的大作中提到】

: 做iPS一般用原代细胞，体外最多可以传代50次？表达3个基因的话，可能还没有做成
: stable cell line，细胞就死翘翘了。做过iPS的同学建议一下呗。

c*y2013-12-07 08:12

5 楼

首先我认为这个方法不太靠谱，其次也没有什么科学意义。如果是机制研究，mouse已
经实现small molecule reprogramming了，human也已早有单一OCT4实现Neural
progenitor cells reprogramming的案例。
如果是应用研究，那么现在主流的reprogramming都采用非整合方法了，质粒和mRNA都
很成熟方便，也已经都商业化了。用Retro和Lenti做出来的绝大多数iPS也被认为是质
量较差的细胞株，实用价值很低。