厚切片做confocal怎么封片不被压扁？ - 未名空间MITBBS历史存档

国际科技财经博客移民网络热点娱乐民生时事公众号

Redian新闻

>未名空间

>Biology - 生物学

厚切片做confocal怎么封片不被压扁？

厚切片做confocal怎么封片不被压扁？# Biology - 生物学

s*e2014-01-17 08:01

1 楼

我的一个朋友，因工作关系到外州工作去了，在我们这有个出租的condo。头三个月时
，房客还基本能按时交房租，从6月份开始到现在半年多了，再也不付房租了。我这个
朋友打电话给她从来不接，邮件从来不回。因为这个人以前给过她老爸的联系电话，好
不容易我这个朋友联系到了她老爸，她老爸说她有mental问题，现在在住院治疗。当时
这个人来找房时说了她是single mom，有个14岁的孩子和她一起住。第二个孩子09年出
生几个月就死了。我朋友和她老爸联系了多次，他们一直强调说因为这个人有mental问
题，你找警察，上法庭都没用。更甚的是，有一次这个女的半夜给我朋友发短信，说我
朋友老是给她打电话，harrass her要sue him。现在她的lease已经到期，我朋友都明
说了，你赶快搬走，以前的房租都不要了，结果这个人还在这赖着说要慢慢找其他房子
，找到就搬。我老早就建议我这朋友到court file eviction，由于他在外州，不知道
要不要本人到court，还是online file就行。我这朋友是他们领域内很有名的教授，科
研经费都几百万，半年了被这事搞的焦头烂额。他一直想避免请律师，嫌麻烦，看来到
这份上不请律师不行了。哪位给出个主意。多谢了。

v*62014-01-17 08:01

2 楼

14周的小猫，每天吃几顿，每次该吃多少？是不是宁少勿多？不想养成大肥猫，估计现
在已经有2-3磅
猫不喝水，怎么强制让它喝？拿灌药的吸管给它灌了一点，喝进去的不多，反抗的很厉
害。
14周的小猫，平均每天大便几次，小便几次？
小便完需要清理沙盆吗？小便后猫砂会结块吗，还是一点也不结块？
除了翻检沙盆查看之外，有没有别的办法知道需要清理沙盆了？
正常的kitten大便，是干的还是会粘在手套上一点？
大家清理沙盆是用手套吗？一次性的还是厚实的塑料手套？还是用铲子？清理出来的粪
便大家是怎样处理的？马桶冲掉，还是装袋马上送垃圾桶？
清理了粪便，还是臭的很，怎么除味？pet oder control是不是就可以了？
身上虱子不少，洗了个澡除了至少3，40只，可是还有很多洗不掉的。很快去见VET。可
是见VET除虱子之前，虱子问题怎么办？现在关在大笼子里没敢让出来。
14周大还没有打过任何疫苗，见兽医的时候是不是会把前两针一起打了？14周的猫可以
喀嚓了吧？
晚上睡觉的时候鼻子很干，早上眼睛下面，鼻子下面都有分泌物，正常吗？
剪指甲剪到多短合适？
小猫刚来一天，嗓子干，痒，有想打喷嚏的感觉。是不

D*a2014-01-17 08:01

3 楼

比如切50微米，或者更厚一点的切片，然后放到片子上做confocal，求能保存组织厚度
做Z轴的产品，或者大家都是怎么封的，求推荐。50微米只是暂定的，如果能再厚一点
更好。

N*s2014-01-17 08:01

4 楼

收不到房租的第一天就该启动赶人程序。句号。
in general,
serve pay or quit notice immediately
file claim to court after 5-10 days
wait xxx days till the court issues order to evict it
if its second child did not die, court may not issue eviction order citing
the child is too little to survive the cold weather.
do not rent to single mom with little child, unless she is making good $$$
and having excellent credit.

a*a2014-01-17 08:01

5 楼

消灭0回复
lz先逛精华区吧
剪指甲剪到多短合适？
一点点，就是指甲的tip, 不要剪到里面是粉红色的部位

s*j2014-01-17 08:01

6 楼

加 spacer

【在 D*a 的大作中提到】

: 比如切50微米，或者更厚一点的切片，然后放到片子上做confocal，求能保存组织厚度
: 做Z轴的产品，或者大家都是怎么封的，求推荐。50微米只是暂定的，如果能再厚一点
: 更好。

n*e2014-01-17 08:01

7 楼

single mom不太好处理,出租时不能有怜悯之心.

v*62014-01-17 08:01

8 楼

谢谢ahha,大概过了一遍精华区，新手上路还是很多问题啊，猫猫期待的很，叫它奔一
个第一张标准照谢谢大家

D*a2014-01-17 08:01

9 楼

没用过，求推荐几个啊~

【在 s*****j 的大作中提到】

: 加 spacer

h*82014-01-17 08:01

10 楼

这是那种“professional renter"。。。楼上几位说的对。

u*g2014-01-17 08:01

11 楼

14周的猫，已经3个半月了，才2-3磅，有点瘦了。小猫多吃没事的，长身体要紧。
最要紧快带去vet除虱打针，其他慢慢看精华区～

s*y2014-01-17 08:01

12 楼

最简单的办法，就是用parafilm剪一个洞，然后贴在玻璃片上，然后小心的把样品放在
中间的空洞里，然后加mounting medium, 然后封装。
如果你要更fancy 的话，貌似某些公司有一定厚度的spacer 卖。但是我实在想不起是
哪个公司了。

【在 D*a 的大作中提到】

: 没用过，求推荐几个啊~

m*t2014-01-17 08:01

13 楼

请个律师赶人2000USD吧。。。
估计请她走要3个月，抓紧时间。。。

【在 s********e 的大作中提到】

: 我的一个朋友，因工作关系到外州工作去了，在我们这有个出租的condo。头三个月时
: ，房客还基本能按时交房租，从6月份开始到现在半年多了，再也不付房租了。我这个
: 朋友打电话给她从来不接，邮件从来不回。因为这个人以前给过她老爸的联系电话，好
: 不容易我这个朋友联系到了她老爸，她老爸说她有mental问题，现在在住院治疗。当时
: 这个人来找房时说了她是single mom，有个14岁的孩子和她一起住。第二个孩子09年出
: 生几个月就死了。我朋友和她老爸联系了多次，他们一直强调说因为这个人有mental问
: 题，你找警察，上法庭都没用。更甚的是，有一次这个女的半夜给我朋友发短信，说我
: 朋友老是给她打电话，harrass her要sue him。现在她的lease已经到期，我朋友都明
: 说了，你赶快搬走，以前的房租都不要了，结果这个人还在这赖着说要慢慢找其他房子
: ，找到就搬。我老早就建议我这朋友到court file eviction，由于他在外州，不知道

a*a2014-01-17 08:01

14 楼

聚焦到天竺去了。。

【在 v***6 的大作中提到】

: 谢谢ahha,大概过了一遍精华区，新手上路还是很多问题啊，猫猫期待的很，叫它奔一
: 个第一张标准照谢谢大家

c*r2014-01-17 08:01

15 楼

我的一点个人经验，没在于切片上用过，也许适用。
1. 两边或者四边贴胶带
2. 盖玻片四角粘一丁点儿modeling clay，用镊子轻轻挤压可以调节高度
3. 注射器里装vaseline后装200 ul枪头，在载玻片上划一圈，但是要留个孔来排空气
，然后加样本和盖玻片。这个方法不熟练的话会弄得vaseline到处都是。不推荐。不过
我经常用
4. 也许可以用PAP pen多涂几层。我觉得这个方法如果可行的话应该是最方便的了。

【在 D*a 的大作中提到】

d*e2014-01-17 08:01

16 楼

“他一直想避免请律师，嫌麻烦”
自己折腾了半年不嫌麻烦，请个人帮他处理嫌麻烦。说到底是心疼钱。

b*e2014-01-17 08:01

17 楼

一岁以前敞开吃，爱吃多少吃多少，宁多勿少
大小便完都要清，会结块，用铲子
如果你用flushable的沙就直接冲马桶，不然就拿塑料袋装着扔掉
petco就有wellness core，不过小猫还不能吃吧
要吃小猫猫粮，也有小猫罐头

【在 v***6 的大作中提到】

: 14周的小猫，每天吃几顿，每次该吃多少？是不是宁少勿多？不想养成大肥猫，估计现
: 在已经有2-3磅
: 猫不喝水，怎么强制让它喝？拿灌药的吸管给它灌了一点，喝进去的不多，反抗的很厉
: 害。
: 14周的小猫，平均每天大便几次，小便几次？
: 小便完需要清理沙盆吗？小便后猫砂会结块吗，还是一点也不结块？
: 除了翻检沙盆查看之外，有没有别的办法知道需要清理沙盆了？
: 正常的kitten大便，是干的还是会粘在手套上一点？
: 大家清理沙盆是用手套吗？一次性的还是厚实的塑料手套？还是用铲子？清理出来的粪
: 便大家是怎样处理的？马桶冲掉，还是装袋马上送垃圾桶？

c*r2014-01-17 08:01

18 楼

2. 用熟了也很方便。

【在 c*********r 的大作中提到】

: 我的一点个人经验，没在于切片上用过，也许适用。
: 1. 两边或者四边贴胶带
: 2. 盖玻片四角粘一丁点儿modeling clay，用镊子轻轻挤压可以调节高度
: 3. 注射器里装vaseline后装200 ul枪头，在载玻片上划一圈，但是要留个孔来排空气
: ，然后加样本和盖玻片。这个方法不熟练的话会弄得vaseline到处都是。不推荐。不过
: 我经常用
: 4. 也许可以用PAP pen多涂几层。我觉得这个方法如果可行的话应该是最方便的了。

m*t2014-01-17 08:01

19 楼

9-month rent...
that is much more than hiring a lawyer...

【在 d*e 的大作中提到】

: “他一直想避免请律师，嫌麻烦”
: 自己折腾了半年不嫌麻烦，请个人帮他处理嫌麻烦。说到底是心疼钱。

h*d2014-01-17 08:01

20 楼

猫沙推荐world's best cat litter，尿尿可以结块，而且可以直接冲马桶，放塑料袋
里还是有点恶。。用铲子清理猫沙

D*a2014-01-17 08:01

21 楼

parafilm 能被mounting medium粘住吗，四周还是照样指甲油封？会不会干掉了？

【在 s******y 的大作中提到】

: 最简单的办法，就是用parafilm剪一个洞，然后贴在玻璃片上，然后小心的把样品放在
: 中间的空洞里，然后加mounting medium, 然后封装。
: 如果你要更fancy 的话，貌似某些公司有一定厚度的spacer 卖。但是我实在想不起是
: 哪个公司了。

d*a2014-01-17 08:01

22 楼

你就是闲的蛋疼，明显是皇帝不急急太监。

b*22014-01-17 08:01

23 楼

14周的小猫，每天吃几顿，每次该吃多少？是不是宁少勿多？不想养成大肥猫，估计现
在已经有2-3磅
//////一岁以前敞开吃，碗空了就加，长身体的时候不要限制，否则不健康，成年后再控制体重
猫不喝水，怎么强制让它喝？拿灌药的吸管给它灌了一点，喝进去的不多，反抗的很厉
害。
//////买喷泉，如果不管用就喂罐头兑水
14周的小猫，平均每天大便几次，小便几次？
//////这个你也要管？
小便完需要清理沙盆吗？小便后猫砂会结块吗，还是一点也不结块？
//////结块
除了翻检沙盆查看之外，有没有别的办法知道需要清理沙盆了？
//////懒人一天清两次，早一次晚一次差不多了，勤快的话就多清
正常的kitten大便，是干的还是会粘在手套上一点？
大家清理沙盆是用手套吗？一次性的还是厚实的塑料手套？还是用铲子？清理出来的粪
便大家是怎样处理的？马桶冲掉，还是装袋马上送垃圾桶？
///////用flushable的猫沙，直接冲马桶，用铲子，用手套太恶了吧。。。
清理了粪便，还是臭的很，怎么除味？pet oder control是不是就可以了？
//////开窗
身上虱子不少，洗了个澡除了至少3，

D*a2014-01-17 08:01

24 楼

好经验！
贴胶带是那种纸的tap还塑料的？modeling clay是橡皮泥？vaseline是那个护手霜还是
实验室的产品？
同样的问题就是mounting medium是不是要多加，会不会干掉？
PAP pen感觉堆不起来，估计前三种选一种吧

【在 c*********r 的大作中提到】

c*o2014-01-17 08:01

25 楼

真是笨啊，谁不知道买买提上说“朋友”的事其实就是他（她）自己

【在 d********a 的大作中提到】

: 你就是闲的蛋疼，明显是皇帝不急急太监。

h*u2014-01-17 08:01

26 楼

别忘了给猫猫上个保险，给猫猫一个保障。这种小猫猫保险很便宜的。
另外，猫猫是源于沙漠的动物，不需要喝太多的水，如果喝水太多，要考虑是不是肾脏有了问题。如果平时希望猫猫多喝些水，可以喂湿猫粮，不要硬灌水。

c*r2014-01-17 08:01

27 楼

图片有点大贴不上来，放dropbox里了：
https://www.dropbox.com/s/yiajy9y6ppp6czh/WP_20140117_002.jpg
胶带如图一里的两种都可以，我没用过，我们实验室的在用，他们的样本在100微米左
右，可以贴多层。
其他两种方法见图二图三
mounting medium我会根据面积和厚度算好体积之后加差不多，然后指甲油封片，不容
易干。个人经验。

【在 D*a 的大作中提到】

: 好经验！
: 贴胶带是那种纸的tap还塑料的？modeling clay是橡皮泥？vaseline是那个护手霜还是
: 实验室的产品？
: 同样的问题就是mounting medium是不是要多加，会不会干掉？
: PAP pen感觉堆不起来，估计前三种选一种吧

d*a2014-01-17 08:01

28 楼

由西，由西。

【在 c****o 的大作中提到】

: 真是笨啊，谁不知道买买提上说“朋友”的事其实就是他（她）自己

g*x2014-01-17 08:01

29 楼

同是新近养猫的，看到很多细节问题还会会心一笑。所谓在摸索中前进，等过了两个
星期，这些问题都将不再是问题了。
14周的小猫，每天吃几顿，每次该吃多少？是不是宁少勿多？不想养成大肥猫，估计现
在已经有2-3磅

c*r2014-01-17 08:01

30 楼

modeling clay应该是橡皮泥一类的。

【在 D*a 的大作中提到】

N*s2014-01-17 08:01

31 楼

据说这种东西容易diy，不用请律师花冤枉钱。
最多自己跑一两趟court.

v*62014-01-17 08:01

32 楼

不好意思，这几天忙着伺候猫，给猫买东西，回复来迟，谢谢ahha,upsidedang,
beattie,happymermaid,bread22,hitosu,gkhjqx同学热心回复，很有帮助！尤其是
bread22和gkhjqx的详尽解答，解了不少疑惑，尤其是疫苗信息,thanks a lot!

z*62014-01-17 08:01

33 楼

我做动脉的whole mount staining，就用的sunnyday的方法，结果发现太厚了... 估计
下次就不用parafilm了... 估计动脉没那么厚...

【在 s******y 的大作中提到】

n*e2014-01-17 08:01

34 楼

纽约市最近有很多这类房客,审查要仔细,宁可错过1千,不可放过一个.

D*a2014-01-17 08:01

35 楼

太详细啦，感谢！

【在 c*********r 的大作中提到】

: 图片有点大贴不上来，放dropbox里了：
: https://www.dropbox.com/s/yiajy9y6ppp6czh/WP_20140117_002.jpg
: 胶带如图一里的两种都可以，我没用过，我们实验室的在用，他们的样本在100微米左
: 右，可以贴多层。
: 其他两种方法见图二图三
: mounting medium我会根据面积和厚度算好体积之后加差不多，然后指甲油封片，不容
: 易干。个人经验。

s*y2014-01-17 08:01

36 楼

能。
不要剪太大一张，小小的一张能够被盖玻片盖住就行了。
如果发现可能太厚（刚才有个网友说的），可以先拉一拉，拉薄了再剪就好了。

【在 D*a 的大作中提到】

: parafilm 能被mounting medium粘住吗，四周还是照样指甲油封？会不会干掉了？

D*a2014-01-17 08:01

37 楼

好办法，下次厚的试试parafilm，薄的试试胶带

【在 s******y 的大作中提到】

: 能。
: 不要剪太大一张，小小的一张能够被盖玻片盖住就行了。
: 如果发现可能太厚（刚才有个网友说的），可以先拉一拉，拉薄了再剪就好了。

a*q2014-01-17 08:01

38 楼

Grace Biolabs有spacer卖。
另外双面胶的厚度大概130微米左右。

【在 s******y 的大作中提到】

D*a2014-01-17 08:01

39 楼

多谢！

【在 a*q 的大作中提到】

: Grace Biolabs有spacer卖。
: 另外双面胶的厚度大概130微米左右。

l*12014-01-17 08:01

40 楼

which method worked now for 120 um sample depth ?
purchased spacer:
http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/S24737
or PAFilm by hand made ?
标题: Re: 厚切片做confocal怎么封片不被压扁？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jan 19 14:56:06 2014, 美东)
多谢！

【在 a*q 的大作中提到】

: Grace Biolabs有spacer卖。
: 另外双面胶的厚度大概130微米左右。

s*e2014-01-17 08:01

41 楼

我用过金属螺丝垫圈，英文是叫washer。就是要用能干的mounting medium
再厚的sample，比如整个embryo，我曾经自己用玻璃做holder，里面盛BABB
很简单的，裁几块slide，super glue

b*s2014-01-17 08:01

42 楼

要是你觉得很多垫片不容易封片的话，可以试试撒几粒arabidopsis seeds(要是你有朋
友做植物，可以要一管，够你用十年的）。可以垫高盖玻片。

【在 D*a 的大作中提到】

D*a2014-01-17 08:01

43 楼

话说我上次封了几个E11和E10,感觉激光完全透不过去啊，而且如果前几层有大量绿荧
光的话，后面几层荧光虽然变成背景了但是还是有绿噪点，我根本没找着我想看的器官
。不知道是不是我们confocal的问题？
那几个片子我后来又扒开把器官解剖出来了，简直是天上地下啊，后来的胚胎我只能先
解剖再做whole mount，不敢直接封了。
问题是这样的话我跟前人的数据比较起来就有问题，难道为了比较只能跟他那样把整个
胚胎切了...想偷懒也没偷成.....

c*r2014-01-17 08:01

44 楼

我们用Leica SP5，普通的confocal，激光最多穿透个100多micron。用two photon
confocal会更好些，但也只是几百micron吧。

【在 D*a 的大作中提到】

: 话说我上次封了几个E11和E10,感觉激光完全透不过去啊，而且如果前几层有大量绿荧
: 光的话，后面几层荧光虽然变成背景了但是还是有绿噪点，我根本没找着我想看的器官
: 。不知道是不是我们confocal的问题？
: 那几个片子我后来又扒开把器官解剖出来了，简直是天上地下啊，后来的胚胎我只能先
: 解剖再做whole mount，不敢直接封了。
: 问题是这样的话我跟前人的数据比较起来就有问题，难道为了比较只能跟他那样把整个
: 胚胎切了...想偷懒也没偷成.....

s*e2014-01-17 08:01

45 楼

E11不透明是肯定透不过去的
现在围绕这个透明的技术越来越多，但是都不好做……
最简单的还是染色，然后脱水，BABB，荧光强的话还是可以的
要不然就只有扒开tissue暴露你要的部分，我从前做过很多脑神经的microdissection
，只是花时间，image下来还是很好看的

D*a2014-01-17 08:01

46 楼

我的sample E11的爪子下面就看不着了，估计那肯定没有100 micron吧..

【在 c*********r 的大作中提到】

: 我们用Leica SP5，普通的confocal，激光最多穿透个100多micron。用two photon
: confocal会更好些，但也只是几百micron吧。

c*r2014-01-17 08:01

47 楼

我不做老鼠，我也不知道。。。

【在 D*a 的大作中提到】

: 我的sample E11的爪子下面就看不着了，估计那肯定没有100 micron吧..