反转录起始的rna量不相同，可以比较内参做qpcr分析吗？ - 未名空间MITBBS历史存档

国际科技财经博客移民网络热点娱乐民生时事公众号

Redian新闻

>未名空间

>Biology - 生物学

反转录起始的rna量不相同，可以比较内参做qpcr分析吗？

反转录起始的rna量不相同，可以比较内参做qpcr分析吗？# Biology - 生物学

n*32014-06-26 07:06

1 楼

qPCR做的比较少，没有经验，求高人指点。
我现在有实验组和对照两个样品，反转录起始的rna量不相同，qpcr出来的结果内参和
靶基因的ct，可以比较吗？如何比较

n*32014-06-26 07:06

2 楼

n*32014-06-26 07:06

3 楼

L*T2014-06-26 07:06

4 楼

bias会比较大，有时候这样做出来的结果会很难repeat。你可以尝试把RNA量多的那个
样品dilute到和RNA量少的那个样品同样浓度去做RT。

m*f2014-06-26 07:06

5 楼

有时候即使用同样量的RNA做RT, 做出来的内参也是差别很大（同一个细胞，不同处理
）。

【在 L****T 的大作中提到】

: bias会比较大，有时候这样做出来的结果会很难repeat。你可以尝试把RNA量多的那个
: 样品dilute到和RNA量少的那个样品同样浓度去做RT。

s*y2014-06-26 07:06

6 楼

关键看看内参的差别有多大。如果内参的量做出来差别不超过四倍的话我觉得是可以用
的。
另外，反转录起始的RNA量说明不了什么的，因为很多都是不能被oligo-dT反转录的东
西(rRNA,tRNA, etc.)。

【在 n****3 的大作中提到】

: qPCR做的比较少，没有经验，求高人指点。
: 我现在有实验组和对照两个样品，反转录起始的rna量不相同，qpcr出来的结果内参和
: 靶基因的ct，可以比较吗？如何比较

n*32014-06-26 07:06

7 楼

谢谢了，给你们三个发包子吧

n*32014-06-26 07:06

8 楼

谢谢了，给你们三个发包子吧

m*o2014-06-26 07:06

9 楼

跟帖问个基础问题，大家不要见笑。
RNA 做RT 的时候，一个mRNA分子就逆转出一个cDNA吗？还是逆转录酶可以无限的
bindingRNA，得到很多cDNA?

K*R2014-06-26 07:06

10 楼

你觉得用oligo dt 好还是random primer好呢？

【在 s******y 的大作中提到】

: 关键看看内参的差别有多大。如果内参的量做出来差别不超过四倍的话我觉得是可以用
: 的。
: 另外，反转录起始的RNA量说明不了什么的，因为很多都是不能被oligo-dT反转录的东
: 西(rRNA,tRNA, etc.)。

r*e2014-06-26 07:06

11 楼

同问这个问题。
internal control不就是来主要control这个用于qPCR的cDNA的量的么？
cDNA多，内参的值就高；cDNA少，内参的值就低。
当然要保证cDNA在合理的范围内，不能太低也不能太高。
只要在合理浓度范围内，请问用内参有什么问题？有啥bias？

【在 n****3 的大作中提到】