反转录起始的rna量不相同，可以比较内参做qpcr分析吗？# Biology - 生物学
n*3
1 楼
qPCR做的比较少，没有经验，求高人指点。
我现在有实验组和对照两个样品，反转录起始的rna量不相同，qpcr出来的结果内参和
靶基因的ct， 可以比较吗？如何比较
我现在有实验组和对照两个样品，反转录起始的rna量不相同，qpcr出来的结果内参和
靶基因的ct， 可以比较吗？如何比较
n*3
2 楼
up
n*3
3 楼
up
L*T
4 楼
bias会比较大，有时候这样做出来的结果会很难repeat。你可以尝试把RNA量多的那个
样品dilute到和RNA量少的那个样品同样浓度去做RT。
样品dilute到和RNA量少的那个样品同样浓度去做RT。
m*f
5 楼
有时候即使用同样量的RNA做RT, 做出来的内参也是差别很大（同一个细胞，不同处理
）。
【在 L****T 的大作中提到】
: bias会比较大，有时候这样做出来的结果会很难repeat。你可以尝试把RNA量多的那个
: 样品dilute到和RNA量少的那个样品同样浓度去做RT。
）。
【在 L****T 的大作中提到】
: bias会比较大，有时候这样做出来的结果会很难repeat。你可以尝试把RNA量多的那个
: 样品dilute到和RNA量少的那个样品同样浓度去做RT。
s*y
6 楼
关键看看内参的差别有多大。如果内参的量做出来差别不超过四倍的话我觉得是可以用
的。
另外，反转录起始的RNA量说明不了什么的，因为很多都是不能被oligo-dT反转录的东
西(rRNA,tRNA, etc.)。
【在 n****3 的大作中提到】
: qPCR做的比较少，没有经验，求高人指点。
: 我现在有实验组和对照两个样品，反转录起始的rna量不相同，qpcr出来的结果内参和
: 靶基因的ct， 可以比较吗？如何比较
的。
另外，反转录起始的RNA量说明不了什么的，因为很多都是不能被oligo-dT反转录的东
西(rRNA,tRNA, etc.)。
【在 n****3 的大作中提到】
: qPCR做的比较少，没有经验，求高人指点。
: 我现在有实验组和对照两个样品，反转录起始的rna量不相同，qpcr出来的结果内参和
: 靶基因的ct， 可以比较吗？如何比较
n*3
7 楼
谢谢了，给你们三个发包子吧
n*3
8 楼
谢谢了，给你们三个发包子吧
m*o
9 楼
跟帖问个基础问题，大家不要见笑。
RNA 做RT 的时候，一个mRNA分子就逆转出一个cDNA吗？还是逆转录酶可以无限的
bindingRNA，得到很多cDNA?
RNA 做RT 的时候，一个mRNA分子就逆转出一个cDNA吗？还是逆转录酶可以无限的
bindingRNA，得到很多cDNA?
K*R
10 楼
你觉得用oligo dt 好还是random primer好呢？
【在 s******y 的大作中提到】
: 关键看看内参的差别有多大。如果内参的量做出来差别不超过四倍的话我觉得是可以用
: 的。
: 另外，反转录起始的RNA量说明不了什么的，因为很多都是不能被oligo-dT反转录的东
: 西(rRNA,tRNA, etc.)。
r*e
11 楼
同问这个问题。
internal control不就是来主要control这个用于qPCR的cDNA的量的么？
cDNA多，内参的值就高；cDNA少，内参的值就低。
当然要保证cDNA在合理的范围内，不能太低也不能太高。
只要在合理浓度范围内，请问用内参有什么问题？有啥bias？
【在 n****3 的大作中提到】
: qPCR做的比较少，没有经验，求高人指点。
: 我现在有实验组和对照两个样品，反转录起始的rna量不相同，qpcr出来的结果内参和
: 靶基因的ct， 可以比较吗？如何比较
internal control不就是来主要control这个用于qPCR的cDNA的量的么？
cDNA多，内参的值就高；cDNA少，内参的值就低。
当然要保证cDNA在合理的范围内，不能太低也不能太高。
只要在合理浓度范围内，请问用内参有什么问题？有啥bias？
【在 n****3 的大作中提到】
: qPCR做的比较少，没有经验，求高人指点。
: 我现在有实验组和对照两个样品，反转录起始的rna量不相同，qpcr出来的结果内参和
: 靶基因的ct， 可以比较吗？如何比较
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