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yeast knockout一问

yeast knockout一问# Biology - 生物学

u*d2014-07-09 07:07

1 楼

谢谢

c*e2014-07-09 07:07

2 楼

已经有手机买网上物品用来刷卡的东东出来了，但是没看见周围的朋友用。这么fancy
的东东，本版有几个人买了用来刷信用卡的？
手机上网购物，现在到底流行不？

h*r2014-07-09 07:07

3 楼

做一个基因的knockout,加两端同源臂到loxp-ura3-loxp，转化，挑克隆，提DNA，用
PCR鉴定。问题是上游片段能扩增出来（一个引物在5' flank用于做construct之外,反
向引物在ura3之内），然后下游片段（一个引物在3' flank用于做construct之外,正向
引物在ura3之内）怎么都不work。试了好几个克隆，也换了primer.别的基因knockout
都没问题。按道理上游能扩出来，就表明基因被knockout了。想double check,结果下
游就死活不work.
请教大家可能的原因。多谢！

e*t2014-07-09 07:07

4 楼

nope

A*D2014-07-09 07:07

5 楼

你在说啥？

s*y2014-07-09 07:07

6 楼

估计是下游有比较古怪的二级结构。建议加大DMSO的量，或者换一个Taq polymerase

knockout

【在 h**********r 的大作中提到】

: 做一个基因的knockout,加两端同源臂到loxp-ura3-loxp，转化，挑克隆，提DNA，用
: PCR鉴定。问题是上游片段能扩增出来（一个引物在5' flank用于做construct之外,反
: 向引物在ura3之内），然后下游片段（一个引物在3' flank用于做construct之外,正向
: 引物在ura3之内）怎么都不work。试了好几个克隆，也换了primer.别的基因knockout
: 都没问题。按道理上游能扩出来，就表明基因被knockout了。想double check,结果下
: 游就死活不work.
: 请教大家可能的原因。多谢！