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求助PCR试验

求助PCR试验# Biology - 生物学

i*k2014-07-23 07:07

1 楼

背景：
2005年的国内PhD，2006-2009，加拿大3年博后，2010年1月来美一个TOP90的私校做
tenure track assistant prof.
周围人都说大学的快，没问题，学校有专门指定的移民律师，所以从来没仔细考虑过这
个问题，直到这两天看了论坛的朋友们的情况才发现自己的条件是多么多么多么的弱：
Paper：已发表英文文章5篇，影响因子均在一点几到二点几之间，均为第一作者，2008年1篇，2009年1篇，2010年4篇
引用：没有，自己引用过自己2次
Reviewer：4篇，影响因子也都差不多同上！
没有在国外获过奖，国内有个教育部的二等奖还是第8排名，干脆不能考虑吧。更没有
什么媒体报道
推荐信还没请人写，6、7个没问题吧，但都不是什么大牛
别的什么都没有了
出国这几年一直就相当于自己单打独斗，在加拿大做博士后期间的老板就是拉关系找项
目的，学术不行，也不管。在这边我们系我们专业算我就2个教授，另外那个也是早我
一年半来的印度人，更没有人帮我。
怎么办呢，我这条件一年半载也改善不大啊，我自己好说，有多次往返的签证（我
们为加拿大永久居民），可老婆要找工作啊，愁死我了，大家帮我看看我是不是就干脆
不要递交申请了？

c*r2014-07-23 07:07

2 楼

以前曾经能够P出结果的实验，现在不行了。
所有可能的试剂原因都分析过了，找不出原因。
我的问题可能对版上各位大牛来说太SIMPLE，请大家不吝指点。
谢谢！

n*p2014-07-23 07:07

3 楼

我也在准备EB-1a,我觉得你的条件好像有点弱，估计如果找律师们评估的话，顶多NIW。

2008年1篇，2009年
1篇，2010年4篇

【在 i*****k 的大作中提到】

: 背景：
: 2005年的国内PhD，2006-2009，加拿大3年博后，2010年1月来美一个TOP90的私校做
: tenure track assistant prof.
: 周围人都说大学的快，没问题，学校有专门指定的移民律师，所以从来没仔细考虑过这
: 个问题，直到这两天看了论坛的朋友们的情况才发现自己的条件是多么多么多么的弱：
: Paper：已发表英文文章5篇，影响因子均在一点几到二点几之间，均为第一作者，2008年1篇，2009年1篇，2010年4篇
: 引用：没有，自己引用过自己2次
: Reviewer：4篇，影响因子也都差不多同上！
: 没有在国外获过奖，国内有个教育部的二等奖还是第8排名，干脆不能考虑吧。更没有
: 什么媒体报道

c*r2014-07-23 07:07

4 楼

我不会贴图片上来，抱歉了，否则可以把实验结果贴上来。如果需要，我可以想法把图
片发给各位大侠，请多帮忙呀。

d*i2014-07-23 07:07

5 楼

既然是AP，为什么不申请EB1B呢？那肯定容易多了。

s*22014-07-23 07:07

6 楼

改变条件；增加循环
改变配方比例，
从新设计选择新的Ｐｒｉｍｅｒ

x*02014-07-23 07:07

7 楼

加拿大永久居民NIW要排期吗？？

x*e2014-07-23 07:07

8 楼

用什么做的模板？有没有可以作为positive ctrl的模板？

【在 c*********r 的大作中提到】

: 以前曾经能够P出结果的实验，现在不行了。
: 所有可能的试剂原因都分析过了，找不出原因。
: 我的问题可能对版上各位大牛来说太SIMPLE，请大家不吝指点。
: 谢谢！

I*I2014-07-23 07:07

9 楼

makes no difference if you were born in china

【在 x*******0 的大作中提到】

: 加拿大永久居民NIW要排期吗？？

H*g2014-07-23 07:07

10 楼

Have you included a positive control in your PCR? Also a negative control
too.

【在 c*********r 的大作中提到】

m*e2014-07-23 07:07

11 楼

加拿大PR也要排期的。

c*u2014-07-23 07:07

12 楼

如果是有非特异的杂带的话
减少模版减少 primer 减少dntp 加一点dmso

m*a2014-07-23 07:07

13 楼

我也是新手，不过我觉得你的CASE EB1A希望不大

m*u2014-07-23 07:07

14 楼

check water. Usually that is the last component that is often ignored by
people.

s*g2014-07-23 07:07

15 楼

EB1B

T*e2014-07-23 07:07

16 楼

模板降解了？
重新订引物？

h*e2014-07-23 07:07

17 楼

D*a2014-07-23 07:07

18 楼

什么叫不行了？没有图也可以描述啊。。。或者google下如何贴图

y*y2014-07-23 07:07

19 楼

你老婆如果是加拿大公民，可以用TN签证工作，　很方便的。

s*s2014-07-23 07:07

20 楼

说对了。有一次，实验室滤水器报警坏了，一个有机物过滤失效了没有发现。
足足花了4个月debug啊，所以试剂从头到尾换，包括pcr仪器，就是做不出啊

【在 m******u 的大作中提到】

: check water. Usually that is the last component that is often ignored by
: people.

i*k2014-07-23 07:07

21 楼

忘记密码啦，加上这阵子比较忙，也没顾上再注册一个，多谢各位的热心指点！

x*e2014-07-23 07:07

22 楼

这个用commercial的水就好了。很多试剂盒都带的

【在 s******s 的大作中提到】

: 说对了。有一次，实验室滤水器报警坏了，一个有机物过滤失效了没有发现。
: 足足花了4个月debug啊，所以试剂从头到尾换，包括pcr仪器，就是做不出啊

J*L2014-07-23 07:07

23 楼

我比较奇怪，如果这么弱，是怎么申请上AP的呢？？？
AP比个绿卡可是要难得多得多啊在我看来
楼主什么专业的啊？

s*s2014-07-23 07:07

24 楼

想不到啊。而且那水做其他实验没问题

【在 x********e 的大作中提到】

: 这个用commercial的水就好了。很多试剂盒都带的

d*t2014-07-23 07:07

25 楼

楼主得说说自己是什么专业。否则无法判断。就目前的信息看，就是EB-1B也很难呀。
不想打击人，但实话实说罢了。。。

x*e2014-07-23 07:07

26 楼

你是P不出东西？
我要是以前做得出的实验不work，会把所有reagent都换了再试一遍

【在 s******s 的大作中提到】

: 想不到啊。而且那水做其他实验没问题

i*k2014-07-23 07:07

27 楼

地球科学，可能专业稍偏吧，当时申请的还算顺利，我自己都没有料到竟然就过了。

s*s2014-07-23 07:07

28 楼

对呀。所有东西全换，包括水。问题是新水也是同一个装置过滤出来的，
所以老是不行，惨死

【在 x********e 的大作中提到】

: 你是P不出东西？
: 我要是以前做得出的实验不work，会把所有reagent都换了再试一遍

w*82014-07-23 07:07

29 楼

你这情况只能走EB1-B。

x*e2014-07-23 07:07

30 楼

我做PCR对水很小心，最担心水被污染。一般我用过滤的水，autoclave一大瓶，然后
aliquot出来用。其实做PCR，只要某reagent换了做不出，就肯定是那个reagent的问题
。buffer啊酶啊都不太可能出问题。最容易出问题的就是水和模版。

【在 s******s 的大作中提到】

: 对呀。所有东西全换，包括水。问题是新水也是同一个装置过滤出来的，
: 所以老是不行，惨死

i*k2014-07-23 07:07

31 楼

是啊，看了大家的回复，现在我觉得连EB1-B可能都够呛

【在 w**********8 的大作中提到】

: 你这情况只能走EB1-B。

c*r2014-07-23 07:07

32 楼

多谢大家的热情帮助。
我现在是P出了一片亮光，但是换过了别的引物就没有问题。
所以重新合成了引物，但是还是不行。
我有点怀疑是PCR管的问题，正在换管重新做实验。
期待ing。。。。。
应该不是水的问题，我的水都是灭菌后分装很多，冻存在-20。每次取一管用，而且换
别的引物是可以P出来的。
不知道能否给大家说清楚问题了。
PCR仪器的问题也排除了，因为是新机器，而且也换不同仪器了。

a*y2014-07-23 07:07

33 楼

现在是AP，多写些文章
不是评价楼主背景，不过你这弄到AP的offer在我专业不可想象啊

x*e2014-07-23 07:07

34 楼

实验设计还是有问题啊
如果是pcr管有问题，其他的也p不出吧。p的时候一定要加一个正对照，检验证明试剂
，管子和仪器都正常。模板可能有问题。

【在 c*********r 的大作中提到】

: 多谢大家的热情帮助。
: 我现在是P出了一片亮光，但是换过了别的引物就没有问题。
: 所以重新合成了引物，但是还是不行。
: 我有点怀疑是PCR管的问题，正在换管重新做实验。
: 期待ing。。。。。
: 应该不是水的问题，我的水都是灭菌后分装很多，冻存在-20。每次取一管用，而且换
: 别的引物是可以P出来的。
: 不知道能否给大家说清楚问题了。
: PCR仪器的问题也排除了，因为是新机器，而且也换不同仪器了。

i*k2014-07-23 07:07

35 楼

你也是这个专业的？你这么一说真觉得自己挺幸运的。不过当时我面试的效果不错。

【在 a*******y 的大作中提到】

: 现在是AP，多写些文章
: 不是评价楼主背景，不过你这弄到AP的offer在我专业不可想象啊

D*a2014-07-23 07:07

36 楼

一片亮光。。。在marker的大概什么位置？
pcr也多了，你做pcr是什么？
换模版的话引物能不能用呢？
不是我说，你这两个帖子写得。。。

【在 c*********r 的大作中提到】

J*L2014-07-23 07:07

37 楼

地球科学的，那楼主真的是运气极好了啊
我是做大气科学的

g*j2014-07-23 07:07

38 楼

你这没说清楚啊
怎么帮

S*n2014-07-23 07:07

39 楼

你怎么就成了做大气的了。。。

【在 J********L 的大作中提到】

: 地球科学的，那楼主真的是运气极好了啊
: 我是做大气科学的

g*j2014-07-23 07:07

40 楼

我看你先做个阳性对照

c*r2014-07-23 07:07

41 楼

多谢大家指点。我的分子生物学确实做得少，博士毕业了才开始做分子生物学，可能表
述也不清楚。
我做PCR一般都没有对照，不管是阳性还是阴性。
模板我也怀疑有问题，已经换过了，但是还是不出结果，没办法。
跟我们做分子生物学的同事也讨论过了，他们也找不出原因，所以我已经拿给公司做了
，希望有结果。上帝保佑！
最近的实验好痛苦，ANYWAY，谢谢大家的热情帮助，如果有后续结果，我希望我能记得
来给大家汇报一下。

x*e2014-07-23 07:07

42 楼

都博士毕业了还不知道做实验要有对照。。。你没对照怎么troubleshooting啊

【在 c*********r 的大作中提到】

: 多谢大家指点。我的分子生物学确实做得少，博士毕业了才开始做分子生物学，可能表
: 述也不清楚。
: 我做PCR一般都没有对照，不管是阳性还是阴性。
: 模板我也怀疑有问题，已经换过了，但是还是不出结果，没办法。
: 跟我们做分子生物学的同事也讨论过了，他们也找不出原因，所以我已经拿给公司做了
: ，希望有结果。上帝保佑！
: 最近的实验好痛苦，ANYWAY，谢谢大家的热情帮助，如果有后续结果，我希望我能记得
: 来给大家汇报一下。

c*r2014-07-23 07:07

43 楼

我老板是学化学的出身，所以我们实验室基本不做分子生物学的东西，如果需要做，都
是请别的老师帮忙做。
解释一下。
再次感谢大家帮忙。
我把样品发到上海一家公司代做，马上就出结果了，带很亮，结果很好。
目前我也不知道该咋解释这个情况。