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求助:微量RNA做RNA-seq
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求助:微量RNA做RNA-seq# Biology - 生物学
V*8
1
【 以下文字转载自 Piebridge 讨论区 】
发信人: kidodo621 (kido), 信区: Piebridge
标 题: 奔了,终于奔了,太不容易啦!
发信站: BBS 未名空间站 (Tue May 17 22:54:59 2011, 美东)
你姐姐终于奔了!童鞋们快投票吧!
http://www.cssany.org/fcwr/vote/
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s*8
2
有人有经验吗?
手上的课题需要从极少量的FACSed细胞中提取RNA做RNAseq.现在一次sorting只能拿到
差不多3000个细胞,运气好的话应该一次可以拿到6000个细胞.
本来打算直接sort到Trizol里面冻起来,这样多sort几次,攒在一起提RNA.可是FACS
facility又不让我用Trizol,所以现在是sort到 RNaqueous micro kit 的lysis buffer
里.提完了RNA一测,几乎啥也测不出来,因为大概也只有十几个ng的样子.
所以我是不是应该考虑用commercial kit来做个amplification?求大牛推荐kit或者好
的方法!
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V*8
3
2号居然得票率最高,什么眼神。。。
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s*s
4
哺乳动物细胞么?3000个足够了。
我以前用的是roche 的magna pure kit,你看看facility有没有这玩意儿。

buffer

【在 s********8 的大作中提到】
: 有人有经验吗?
: 手上的课题需要从极少量的FACSed细胞中提取RNA做RNAseq.现在一次sorting只能拿到
: 差不多3000个细胞,运气好的话应该一次可以拿到6000个细胞.
: 本来打算直接sort到Trizol里面冻起来,这样多sort几次,攒在一起提RNA.可是FACS
: facility又不让我用Trizol,所以现在是sort到 RNaqueous micro kit 的lysis buffer
: 里.提完了RNA一测,几乎啥也测不出来,因为大概也只有十几个ng的样子.
: 所以我是不是应该考虑用commercial kit来做个amplification?求大牛推荐kit或者好
: 的方法!

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v*s
5
NYU选TA?

【在 V*****8 的大作中提到】
: 2号居然得票率最高,什么眼神。。。
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D*a
6
单细胞的都能做了,3000个不少了。kit不熟,直接问做rna seq的地方吧,如果他们不
知道,就问问他们跟谁合作做过这种然后再去问那个实验室。别自己闷头瞎搞。
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x*s
7
非要选的话,我选3号吧
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c*r
8
理论上够了,关键看你用什么试剂盒来做library。和有经验的sequencing facility交
流交流。
测低浓度RNA不要用nanodrop,用Qubit HS(High Sensitivity)或者bioanalyzer。
我去年暑假做的,500 ng可以作常规的RNA-seq,而且当时担心Ribo-Zero那一步会不会
有很多损失。实际上现在需要的RNA量可以比这个低很多。
单细胞的测序也开始流行,就是成本高。。。

buffer

【在 s********8 的大作中提到】
: 有人有经验吗?
: 手上的课题需要从极少量的FACSed细胞中提取RNA做RNAseq.现在一次sorting只能拿到
: 差不多3000个细胞,运气好的话应该一次可以拿到6000个细胞.
: 本来打算直接sort到Trizol里面冻起来,这样多sort几次,攒在一起提RNA.可是FACS
: facility又不让我用Trizol,所以现在是sort到 RNaqueous micro kit 的lysis buffer
: 里.提完了RNA一测,几乎啥也测不出来,因为大概也只有十几个ng的样子.
: 所以我是不是应该考虑用commercial kit来做个amplification?求大牛推荐kit或者好
: 的方法!

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d*f
9
3女6男,这是打算3P么?

【在 V*****8 的大作中提到】
: 2号居然得票率最高,什么眼神。。。
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a*g
10
样品在lysis buffer中可以冻起来,等收集几次之后pool在一起提取,不用扩增的话,
100ng就可以做sequence了。如果你需要测的样品比较多,嫌麻烦的话,10ng可以扩增
的。总体上,人们倾向不扩增。提起少量rna,有life tech的picropure和qigen的
rneasy micro kit,测浓度用life tech的quit,质量用aligent的picro chip。
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x*2
11
显然拉票了 22票 一场足球赛

【在 V*****8 的大作中提到】
: 2号居然得票率最高,什么眼神。。。
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s*8
12
谢谢楼上各位的回复!我们的sequencing facility好像没有amplification的经验,他
们说要200ng RNA。我再去问问吧。
我也不太想扩增,尽量多做几次FACS,冻起来一起提吧。
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V*8
13
非要选我都选不出来,3号看上去很花的样子

【在 x**********s 的大作中提到】
: 非要选的话,我选3号吧
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G*n
14
少量肯定没问题,就像你们core说的,200ng就可以做了。200ng不用做太多的primer
specific amp,普通的20cycle AMP不影响结果。我是说你的两组或者多组sample都要
有同样的protocol
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x*s
15
不是说了吗,男人不管是帅的还是衰的,都一样花心。所以不如找个帅的

【在 V*****8 的大作中提到】
: 非要选我都选不出来,3号看上去很花的样子
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N*w
16
帅的显然周围女的更多
你不吃醋?

【在 x**********s 的大作中提到】
: 不是说了吗,男人不管是帅的还是衰的,都一样花心。所以不如找个帅的
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x*s
17
有道理
那到底咋办呢。。。

【在 N****w 的大作中提到】
: 帅的显然周围女的更多
: 你不吃醋?

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l*c
18
选9号,我同学
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l*c
19
选9号,我同学
avatar
l*i
20
1号看的还行

【在 V*****8 的大作中提到】
: 非要选我都选不出来,3号看上去很花的样子
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