问一个关于CRISPR的幼稚问题# Biology - 生物学
e*1
1 楼
关于 Applicant's residence last five years. 如果中间回中国 3个月，这个中国的
address 也应该写上吗？
address 也应该写上吗？
k*l
2 楼
做construct，要切的地方没有合适的内切酶
想用NEB的 Cas9 做体外的 CRISPR来切质粒，需要sgRNA，网页上建议做 in vitro
transcription
不知化学合成 sgRNA oligo 是否可行，会有folding 方面的问题吗？
谢谢大家！
想用NEB的 Cas9 做体外的 CRISPR来切质粒，需要sgRNA，网页上建议做 in vitro
transcription
不知化学合成 sgRNA oligo 是否可行，会有folding 方面的问题吗？
谢谢大家！
s*k
3 楼
为何一定要切？用Primer 和DNA polymerase来linearize plasmid？外行抛砖引玉的回
复
复
k*l
4 楼
你说的很好，
只是我的plasmid 15k，PCR可能会比较困难
【在 s***k 的大作中提到】
: 为何一定要切？用Primer 和DNA polymerase来linearize plasmid？外行抛砖引玉的回
: 复
只是我的plasmid 15k，PCR可能会比较困难
【在 s***k 的大作中提到】
: 为何一定要切？用Primer 和DNA polymerase来linearize plasmid？外行抛砖引玉的回
: 复
s*i
5 楼
左右各多切一段，再gibson assembly把它们连回去
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7
【在 k****l 的大作中提到】
: 你说的很好，
: 只是我的plasmid 15k，PCR可能会比较困难
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7
【在 k****l 的大作中提到】
: 你说的很好，
: 只是我的plasmid 15k，PCR可能会比较困难
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