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如何在没有抗体的情况下快速CONFIRM CRISPR KO

如何在没有抗体的情况下快速CONFIRM CRISPR KO# Biology - 生物学

m*t2015-03-22 07:03

1 楼

有什么实实在在的好处？
看见好多人最近拿到卡了，分享一下？

k*n2015-03-22 07:03

2 楼

在组织里转染了CRISPR和GFP, FACS了GFP细胞，提了DNA，如果想看又KO的效率，除开
PCR后送几十个克隆测序的方法，有什么其他更快更简单的方法没有？多谢了！！

r*c2015-03-22 07:03

3 楼

俺想拿到卡就回国。。

【在 m********t 的大作中提到】

: 有什么实实在在的好处？
: 看见好多人最近拿到卡了，分享一下？

b*k2015-03-22 07:03

4 楼

混在一起测序或者qPCR呗

【在 k********n 的大作中提到】

: 在组织里转染了CRISPR和GFP, FACS了GFP细胞，提了DNA，如果想看又KO的效率，除开
: PCR后送几十个克隆测序的方法，有什么其他更快更简单的方法没有？多谢了！！

H*r2015-03-22 07:03

5 楼

在485批下来之前俺已经订了回国机票~~

w*r2015-03-22 07:03

6 楼

Surveyor assay

【在 k********n 的大作中提到】

p*h2015-03-22 07:03

7 楼

先回国，再找工作

T*a2015-03-22 07:03

8 楼

我最近刚开始在做这个，强烈推荐这个网站。
http://tide.nki.nl/
我是将gRNAs连接到pSpCas9(BB)-2A-GFP质粒里，然后将连接成功的CRISPRs plasmid转
染到细胞中，再sort GFP positive cells for culture (sort 50,000 cells for 1
well in 12-well plate。等差不多长满了，取genomic DNA，PCR，再用PCR primer
for sequencing。
如果一切顺利，出来的sequence file应该是从gRNA起作用的地方开始有chaos。将
sequence file和guide sequence upload上去，这个网站就会很快计算出来mutation
percentage。