老板非让用Bioruptor做ChIP，结果给bug啦，求教啊啊啊。。。# Biology - 生物学
a*s
1 楼
rt，whole foods的黄豆粉，还有鹰嘴豆粉，图片见下，跟我们做传统小吃的黄豆粉是
一回事吗，比如做驴打滚用到的黄豆粉？谢谢！
一回事吗，比如做驴打滚用到的黄豆粉？谢谢！
w*r
2 楼
3个礼拜了，至今没有收到
xt
3 楼
先讲讲今年老农的苗圃新设备：填土机
这台机器是用来制造potting soil，然后把土装到育苗
用的flat里面的。potting soil具体成分有椰子纤维，
泥炭，化肥等等四五种东西，把椰子纤维用水泡开，然后
倒入机器和泥炭等混合，就可以了。这台机器用来装填
flat快速而且质量稳定，一小时弄两三百个flat应该不
是问题。而每个flat根据规格可以是能装二十到四十八棵苗
把空flat放在平台上，打开机器
装满
机器上有个可以调节高度的挡板，把flat从下面抽出来，就抹平了
这台机器是用来制造potting soil，然后把土装到育苗
用的flat里面的。potting soil具体成分有椰子纤维，
泥炭，化肥等等四五种东西，把椰子纤维用水泡开，然后
倒入机器和泥炭等混合，就可以了。这台机器用来装填
flat快速而且质量稳定，一小时弄两三百个flat应该不
是问题。而每个flat根据规格可以是能装二十到四十八棵苗
把空flat放在平台上，打开机器
装满
机器上有个可以调节高度的挡板，把flat从下面抽出来，就抹平了
y*a
4 楼
之前博后用超声仪ChIP结果好好滴。。。。
后来隔壁平台买了个diagenode的bioruptor，老板非让我用bioruptor做超声。结果一
样的引物ChIP-qPCR没显著性差异。
想了想，感觉是在超声之后，离心一把，发现lysate里有些白色漂浮的不溶絮状物，离
心也沉不到管底。
记得原来冻过的蛋白有时候化了会析出来这样的絮状物，怀疑是不是超声太猛把蛋白给
析出来了。
超声条件是30s on，30s off，总共30个cycle。。。
求大神给指点指点。。。。
后来隔壁平台买了个diagenode的bioruptor，老板非让我用bioruptor做超声。结果一
样的引物ChIP-qPCR没显著性差异。
想了想，感觉是在超声之后，离心一把，发现lysate里有些白色漂浮的不溶絮状物，离
心也沉不到管底。
记得原来冻过的蛋白有时候化了会析出来这样的絮状物，怀疑是不是超声太猛把蛋白给
析出来了。
超声条件是30s on，30s off，总共30个cycle。。。
求大神给指点指点。。。。
r*v
5 楼
soybean flour一定要熟来才吃，否则伤身体
怎么说也是豆子磨出来的。
whole foods那种问起来就有强烈的生豆子味道
可以在stove上用平底锅热熟，也可以在oven烤熟
但都比较麻烦，搞不好的话会乌烟瘴气，呵呵，别惹响了smoke detector就好
还可以蒸熟。蒸的时候小心不要沾水就行。若是嫌味道不够焦香，可以先蒸熟后再在平
底锅里干热熟。
熟的黄豆粉 跟国内那种驴打滚外面裹着的黄豆粉味道一样。
用糯米粉蒸或煮出来的mochi，外面裹着熟黄豆粉，蛮好吃的
米饭上面加些熟黄豆粉，吃起来也香喷喷的
还可以跟迷糊一起吃，也香香的
【在 a*****s 的大作中提到】
: rt，whole foods的黄豆粉，还有鹰嘴豆粉，图片见下，跟我们做传统小吃的黄豆粉是
: 一回事吗，比如做驴打滚用到的黄豆粉？谢谢！
怎么说也是豆子磨出来的。
whole foods那种问起来就有强烈的生豆子味道
可以在stove上用平底锅热熟，也可以在oven烤熟
但都比较麻烦，搞不好的话会乌烟瘴气，呵呵，别惹响了smoke detector就好
还可以蒸熟。蒸的时候小心不要沾水就行。若是嫌味道不够焦香，可以先蒸熟后再在平
底锅里干热熟。
熟的黄豆粉 跟国内那种驴打滚外面裹着的黄豆粉味道一样。
用糯米粉蒸或煮出来的mochi，外面裹着熟黄豆粉，蛮好吃的
米饭上面加些熟黄豆粉，吃起来也香喷喷的
还可以跟迷糊一起吃，也香香的
【在 a*****s 的大作中提到】
: rt，whole foods的黄豆粉，还有鹰嘴豆粉，图片见下，跟我们做传统小吃的黄豆粉是
: 一回事吗，比如做驴打滚用到的黄豆粉？谢谢！
s*s
6 楼
cancel了,还没到4周就开始charge钱了.
m*h
7 楼
高级!
D*a
8 楼
bioruptor很好用。30cycle太多了，我一般就用6个。
【在 y*****a 的大作中提到】
: 之前博后用超声仪ChIP结果好好滴。。。。
: 后来隔壁平台买了个diagenode的bioruptor，老板非让我用bioruptor做超声。结果一
: 样的引物ChIP-qPCR没显著性差异。
: 想了想，感觉是在超声之后，离心一把，发现lysate里有些白色漂浮的不溶絮状物，离
: 心也沉不到管底。
: 记得原来冻过的蛋白有时候化了会析出来这样的絮状物，怀疑是不是超声太猛把蛋白给
: 析出来了。
: 超声条件是30s on，30s off，总共30个cycle。。。
: 求大神给指点指点。。。。
【在 y*****a 的大作中提到】
: 之前博后用超声仪ChIP结果好好滴。。。。
: 后来隔壁平台买了个diagenode的bioruptor，老板非让我用bioruptor做超声。结果一
: 样的引物ChIP-qPCR没显著性差异。
: 想了想，感觉是在超声之后，离心一把，发现lysate里有些白色漂浮的不溶絮状物，离
: 心也沉不到管底。
: 记得原来冻过的蛋白有时候化了会析出来这样的絮状物，怀疑是不是超声太猛把蛋白给
: 析出来了。
: 超声条件是30s on，30s off，总共30个cycle。。。
: 求大神给指点指点。。。。
g*1
9 楼
4周了也没收到
【在 w****r 的大作中提到】
: 3个礼拜了，至今没有收到
【在 w****r 的大作中提到】
: 3个礼拜了，至今没有收到
y*2
10 楼
三个字 ＂高 大 上＂ :）potting soil好专业呀！
【在 xt 的大作中提到】
: 先讲讲今年老农的苗圃新设备：填土机
: 这台机器是用来制造potting soil，然后把土装到育苗
: 用的flat里面的。potting soil具体成分有椰子纤维，
: 泥炭，化肥等等四五种东西，把椰子纤维用水泡开，然后
: 倒入机器和泥炭等混合，就可以了。这台机器用来装填
: flat快速而且质量稳定，一小时弄两三百个flat应该不
: 是问题。而每个flat根据规格可以是能装二十到四十八棵苗
: 把空flat放在平台上，打开机器
: 装满
: 机器上有个可以调节高度的挡板，把flat从下面抽出来，就抹平了
【在 xt 的大作中提到】
: 先讲讲今年老农的苗圃新设备：填土机
: 这台机器是用来制造potting soil，然后把土装到育苗
: 用的flat里面的。potting soil具体成分有椰子纤维，
: 泥炭，化肥等等四五种东西，把椰子纤维用水泡开，然后
: 倒入机器和泥炭等混合，就可以了。这台机器用来装填
: flat快速而且质量稳定，一小时弄两三百个flat应该不
: 是问题。而每个flat根据规格可以是能装二十到四十八棵苗
: 把空flat放在平台上，打开机器
: 装满
: 机器上有个可以调节高度的挡板，把flat从下面抽出来，就抹平了
k*n
11 楼
同意楼上分析，DNA打成太小BP的碎片就不能再拉PCR了。你在超声破碎之后上清液处理
一下直接用引物拉一次PCR看看，顺便摸摸条件，免得浪费抗体。
[在 yinyeya (yinyeya) 的大作中提到：]
：
：之前博后用超声仪ChIP结果好好滴。。。。
：...........
一下直接用引物拉一次PCR看看，顺便摸摸条件，免得浪费抗体。
[在 yinyeya (yinyeya) 的大作中提到：]
：
：之前博后用超声仪ChIP结果好好滴。。。。
：...........
B*g
12 楼
早就收到了啊，估计一周到10天左右就收到了
b*y
13 楼
厉害啊！请问楼主是开苗圃的吗？否则要把几千苗移到地里。。。壮举！
【在 xt 的大作中提到】
: 先讲讲今年老农的苗圃新设备：填土机
: 这台机器是用来制造potting soil，然后把土装到育苗
: 用的flat里面的。potting soil具体成分有椰子纤维，
: 泥炭，化肥等等四五种东西，把椰子纤维用水泡开，然后
: 倒入机器和泥炭等混合，就可以了。这台机器用来装填
: flat快速而且质量稳定，一小时弄两三百个flat应该不
: 是问题。而每个flat根据规格可以是能装二十到四十八棵苗
: 把空flat放在平台上，打开机器
: 装满
: 机器上有个可以调节高度的挡板，把flat从下面抽出来，就抹平了
【在 xt 的大作中提到】
: 先讲讲今年老农的苗圃新设备：填土机
: 这台机器是用来制造potting soil，然后把土装到育苗
: 用的flat里面的。potting soil具体成分有椰子纤维，
: 泥炭，化肥等等四五种东西，把椰子纤维用水泡开，然后
: 倒入机器和泥炭等混合，就可以了。这台机器用来装填
: flat快速而且质量稳定，一小时弄两三百个flat应该不
: 是问题。而每个flat根据规格可以是能装二十到四十八棵苗
: 把空flat放在平台上，打开机器
: 装满
: 机器上有个可以调节高度的挡板，把flat从下面抽出来，就抹平了
g*6
14 楼
可能是SDS
【在 y*****a 的大作中提到】
: 之前博后用超声仪ChIP结果好好滴。。。。
: 后来隔壁平台买了个diagenode的bioruptor，老板非让我用bioruptor做超声。结果一
: 样的引物ChIP-qPCR没显著性差异。
: 想了想，感觉是在超声之后，离心一把，发现lysate里有些白色漂浮的不溶絮状物，离
: 心也沉不到管底。
: 记得原来冻过的蛋白有时候化了会析出来这样的絮状物，怀疑是不是超声太猛把蛋白给
: 析出来了。
: 超声条件是30s on，30s off，总共30个cycle。。。
: 求大神给指点指点。。。。
【在 y*****a 的大作中提到】
: 之前博后用超声仪ChIP结果好好滴。。。。
: 后来隔壁平台买了个diagenode的bioruptor，老板非让我用bioruptor做超声。结果一
: 样的引物ChIP-qPCR没显著性差异。
: 想了想，感觉是在超声之后，离心一把，发现lysate里有些白色漂浮的不溶絮状物，离
: 心也沉不到管底。
: 记得原来冻过的蛋白有时候化了会析出来这样的絮状物，怀疑是不是超声太猛把蛋白给
: 析出来了。
: 超声条件是30s on，30s off，总共30个cycle。。。
: 求大神给指点指点。。。。
t*r
15 楼
YMMV
cancel吧
【在 w****r 的大作中提到】
: 3个礼拜了，至今没有收到
cancel吧
【在 w****r 的大作中提到】
: 3个礼拜了，至今没有收到
xt
16 楼
给别人育的。要我照顾几千棵菜，哪有那个时间啊
【在 b**y 的大作中提到】
: 厉害啊！请问楼主是开苗圃的吗？否则要把几千苗移到地里。。。壮举！
【在 b**y 的大作中提到】
: 厉害啊！请问楼主是开苗圃的吗？否则要把几千苗移到地里。。。壮举！
y*a
17 楼
多谢提醒，很有这个可能，我在sonication的时候用了0.1% SDS，然后超声完了lysate
就在4度离心了，离心完看到的。只是不懂0.1% SDS这个量算高算低啊，要是析出来能
看到么。。。
【在 g********6 的大作中提到】
: 可能是SDS
就在4度离心了，离心完看到的。只是不懂0.1% SDS这个量算高算低啊，要是析出来能
看到么。。。
【在 g********6 的大作中提到】
: 可能是SDS
w*r
18 楼
看来只能cancel了
还好我用的是Giftcard付款，他也charge不到
还好我用的是Giftcard付款，他也charge不到
l*d
19 楼
这样potting soil 的成本就很低了，是不是？
【在 xt 的大作中提到】
: 先讲讲今年老农的苗圃新设备：填土机
: 这台机器是用来制造potting soil，然后把土装到育苗
: 用的flat里面的。potting soil具体成分有椰子纤维，
: 泥炭，化肥等等四五种东西，把椰子纤维用水泡开，然后
: 倒入机器和泥炭等混合，就可以了。这台机器用来装填
: flat快速而且质量稳定，一小时弄两三百个flat应该不
: 是问题。而每个flat根据规格可以是能装二十到四十八棵苗
: 把空flat放在平台上，打开机器
: 装满
: 机器上有个可以调节高度的挡板，把flat从下面抽出来，就抹平了
【在 xt 的大作中提到】
: 先讲讲今年老农的苗圃新设备：填土机
: 这台机器是用来制造potting soil，然后把土装到育苗
: 用的flat里面的。potting soil具体成分有椰子纤维，
: 泥炭，化肥等等四五种东西，把椰子纤维用水泡开，然后
: 倒入机器和泥炭等混合，就可以了。这台机器用来装填
: flat快速而且质量稳定，一小时弄两三百个flat应该不
: 是问题。而每个flat根据规格可以是能装二十到四十八棵苗
: 把空flat放在平台上，打开机器
: 装满
: 机器上有个可以调节高度的挡板，把flat从下面抽出来，就抹平了
y*a
20 楼
input的Ct值在22左右啊，用genomic DNA做了标准曲线Ct值依次大概是25,28，31吧，
这样判断应该超声后的片段是扩增是没有问题的啊。。。还有之前超声其实做了条件优
化，差不多30 cycle的话，跑胶看主要富集在200-600bp吧，当然没用定量机子看片段
大小具体分布。。。
【在 k*******n 的大作中提到】
: 同意楼上分析，DNA打成太小BP的碎片就不能再拉PCR了。你在超声破碎之后上清液处理
: 一下直接用引物拉一次PCR看看，顺便摸摸条件，免得浪费抗体。
: [在 yinyeya (yinyeya) 的大作中提到：]
: ：
: ：之前博后用超声仪ChIP结果好好滴。。。。
: ：...........
这样判断应该超声后的片段是扩增是没有问题的啊。。。还有之前超声其实做了条件优
化，差不多30 cycle的话，跑胶看主要富集在200-600bp吧，当然没用定量机子看片段
大小具体分布。。。
【在 k*******n 的大作中提到】
: 同意楼上分析，DNA打成太小BP的碎片就不能再拉PCR了。你在超声破碎之后上清液处理
: 一下直接用引物拉一次PCR看看，顺便摸摸条件，免得浪费抗体。
: [在 yinyeya (yinyeya) 的大作中提到：]
: ：
: ：之前博后用超声仪ChIP结果好好滴。。。。
: ：...........
f*l
21 楼
貌似一周就收到了
xt
22 楼
potting soil成本肯定比店里买现成的低很多，我估计一个flat
大概50-75c的样子。一个flat可以装36棵苗。
另外自己做的potting soil质量有保障，店里的potting soil一般
就是用peat moss和珍珠岩，这个东西一旦干了，就需要很大力气
才能湿润。这个potting soi用的是椰子纤维，这个东西亲水性好，
而且保湿能力强
【在 l*********d 的大作中提到】
: 这样potting soil 的成本就很低了，是不是？
大概50-75c的样子。一个flat可以装36棵苗。
另外自己做的potting soil质量有保障，店里的potting soil一般
就是用peat moss和珍珠岩，这个东西一旦干了，就需要很大力气
才能湿润。这个potting soi用的是椰子纤维，这个东西亲水性好，
而且保湿能力强
【在 l*********d 的大作中提到】
: 这样potting soil 的成本就很低了，是不是？
y*a
23 楼
您用这么少的cycle数啊。。。
我估计你用的是bioruptor Pico吧，我用的是bioruptor Plus。看说明书，Pico一般是
6-9cycle，Plus是10-30cycle。。。ES细胞貌似有些robust，超声起来是有些费劲的。
。。
【在 D***a 的大作中提到】
: bioruptor很好用。30cycle太多了，我一般就用6个。
我估计你用的是bioruptor Pico吧，我用的是bioruptor Plus。看说明书，Pico一般是
6-9cycle，Plus是10-30cycle。。。ES细胞貌似有些robust，超声起来是有些费劲的。
。。
【在 D***a 的大作中提到】
: bioruptor很好用。30cycle太多了，我一般就用6个。
s*e
24 楼
re, canceled today
【在 g*******1 的大作中提到】
: 4周了也没收到
【在 g*******1 的大作中提到】
: 4周了也没收到
b*y
25 楼
专业啊！我连椰子纤维都不知道上哪买
【在 xt 的大作中提到】
: potting soil成本肯定比店里买现成的低很多，我估计一个flat
: 大概50-75c的样子。一个flat可以装36棵苗。
: 另外自己做的potting soil质量有保障，店里的potting soil一般
: 就是用peat moss和珍珠岩，这个东西一旦干了，就需要很大力气
: 才能湿润。这个potting soi用的是椰子纤维，这个东西亲水性好，
: 而且保湿能力强
【在 xt 的大作中提到】
: potting soil成本肯定比店里买现成的低很多，我估计一个flat
: 大概50-75c的样子。一个flat可以装36棵苗。
: 另外自己做的potting soil质量有保障，店里的potting soil一般
: 就是用peat moss和珍珠岩，这个东西一旦干了，就需要很大力气
: 才能湿润。这个potting soi用的是椰子纤维，这个东西亲水性好，
: 而且保湿能力强
g*3
26 楼
做好chip的关键其实就是sonication+antibody。哥们，你肯定没有仔细读过manual，
如果不肯花时间，还是找个人带吧，或者问有经验的。
1. 你如果读了bioruptor的manual，发现0.1%SDS绝对起不了作用的（甚至他们有专门
卖0.1%SDS的special kit for sonication），因为0.1%太弱了。当然branson的那种
probe，0.1%够了。
2. 单纯考虑多少cycle有意义吗？293和hepg2的cycle完全不一样。不过你用0.1%可能
需要100cycle 都有可能。
3. 30seconds on？？？？你这能有好结果吗？多查查protocol，一般都是10ON+30-40
OFF
4.絮状物？你知道是什么吗？lipids！这个很常见。尤其是你的SDS不够。另外lysis
buffer/cell也不对。
如果不肯花时间，还是找个人带吧，或者问有经验的。
1. 你如果读了bioruptor的manual，发现0.1%SDS绝对起不了作用的（甚至他们有专门
卖0.1%SDS的special kit for sonication），因为0.1%太弱了。当然branson的那种
probe，0.1%够了。
2. 单纯考虑多少cycle有意义吗？293和hepg2的cycle完全不一样。不过你用0.1%可能
需要100cycle 都有可能。
3. 30seconds on？？？？你这能有好结果吗？多查查protocol，一般都是10ON+30-40
OFF
4.絮状物？你知道是什么吗？lipids！这个很常见。尤其是你的SDS不够。另外lysis
buffer/cell也不对。
t*3
27 楼
4周也没收到，cancel了，多谢lz, otherwise i totally forgot it....
g*t
28 楼
太专业了，仰视
y*a
29 楼
多谢悉心指点。确实是第一回搞ChIP，而且用bioruptor，按理这应该很好用的。博后
被push的忙的没时间，而且新实验室，说实话ChIP也还在摸索中。
我在IP之前做了sonication的条件优化，确实是发现0.1%SDS+30cycle是最好
sonication效率，这里不知道怎么上图啊，您能看看我sonication的图指点指点就好啦。
其次，具体分析结果的话，我用了多对primer检测，对大部分来说抗体 IP和IgG IP差
距就1个cycle吧，换算成%input，分别是0.03%和0.02%。
再次，我是在ES细胞里用Oct4的抗体拉，用的抗体很多paper都用，应该是验证了很多
次的比较靠谱的，当然在我们这个实验室还在摸索。
最后呢，你分析的很对，很可能是lipids，那它对最后结果分析有影响么？
我现在分析可能原因，一是细胞不够，用了3 million去IP的（这个也是manual上推荐
的），但是看很多paper比这多啊；二是IP buffer是不是不对，抗体和lysate没结合上
。我是先lysate和抗体抚育过夜，在上G beads大概4小时吧，buffer就是shearing用的
buffer。
40
【在 g*********3 的大作中提到】
: 做好chip的关键其实就是sonication+antibody。哥们，你肯定没有仔细读过manual，
: 如果不肯花时间，还是找个人带吧，或者问有经验的。
: 1. 你如果读了bioruptor的manual，发现0.1%SDS绝对起不了作用的（甚至他们有专门
: 卖0.1%SDS的special kit for sonication），因为0.1%太弱了。当然branson的那种
: probe，0.1%够了。
: 2. 单纯考虑多少cycle有意义吗？293和hepg2的cycle完全不一样。不过你用0.1%可能
: 需要100cycle 都有可能。
: 3. 30seconds on？？？？你这能有好结果吗？多查查protocol，一般都是10ON+30-40
: OFF
: 4.絮状物？你知道是什么吗？lipids！这个很常见。尤其是你的SDS不够。另外lysis
被push的忙的没时间，而且新实验室，说实话ChIP也还在摸索中。
我在IP之前做了sonication的条件优化，确实是发现0.1%SDS+30cycle是最好
sonication效率，这里不知道怎么上图啊，您能看看我sonication的图指点指点就好啦。
其次，具体分析结果的话，我用了多对primer检测，对大部分来说抗体 IP和IgG IP差
距就1个cycle吧，换算成%input，分别是0.03%和0.02%。
再次，我是在ES细胞里用Oct4的抗体拉，用的抗体很多paper都用，应该是验证了很多
次的比较靠谱的，当然在我们这个实验室还在摸索。
最后呢，你分析的很对，很可能是lipids，那它对最后结果分析有影响么？
我现在分析可能原因，一是细胞不够，用了3 million去IP的（这个也是manual上推荐
的），但是看很多paper比这多啊；二是IP buffer是不是不对，抗体和lysate没结合上
。我是先lysate和抗体抚育过夜，在上G beads大概4小时吧，buffer就是shearing用的
buffer。
40
【在 g*********3 的大作中提到】
: 做好chip的关键其实就是sonication+antibody。哥们，你肯定没有仔细读过manual，
: 如果不肯花时间，还是找个人带吧，或者问有经验的。
: 1. 你如果读了bioruptor的manual，发现0.1%SDS绝对起不了作用的（甚至他们有专门
: 卖0.1%SDS的special kit for sonication），因为0.1%太弱了。当然branson的那种
: probe，0.1%够了。
: 2. 单纯考虑多少cycle有意义吗？293和hepg2的cycle完全不一样。不过你用0.1%可能
: 需要100cycle 都有可能。
: 3. 30seconds on？？？？你这能有好结果吗？多查查protocol，一般都是10ON+30-40
: OFF
: 4.絮状物？你知道是什么吗？lipids！这个很常见。尤其是你的SDS不够。另外lysis
l*8
30 楼
4个都收到了, 昨天刚取消的. 提个醒,要在4个星期内取消,不是一个月.
r*5
31 楼
厉害啊，你不会真的开苗圃了吧？
【在 xt 的大作中提到】
: 先讲讲今年老农的苗圃新设备：填土机
: 这台机器是用来制造potting soil，然后把土装到育苗
: 用的flat里面的。potting soil具体成分有椰子纤维，
: 泥炭，化肥等等四五种东西，把椰子纤维用水泡开，然后
: 倒入机器和泥炭等混合，就可以了。这台机器用来装填
: flat快速而且质量稳定，一小时弄两三百个flat应该不
: 是问题。而每个flat根据规格可以是能装二十到四十八棵苗
: 把空flat放在平台上，打开机器
: 装满
: 机器上有个可以调节高度的挡板，把flat从下面抽出来，就抹平了
【在 xt 的大作中提到】
: 先讲讲今年老农的苗圃新设备：填土机
: 这台机器是用来制造potting soil，然后把土装到育苗
: 用的flat里面的。potting soil具体成分有椰子纤维，
: 泥炭，化肥等等四五种东西，把椰子纤维用水泡开，然后
: 倒入机器和泥炭等混合，就可以了。这台机器用来装填
: flat快速而且质量稳定，一小时弄两三百个flat应该不
: 是问题。而每个flat根据规格可以是能装二十到四十八棵苗
: 把空flat放在平台上，打开机器
: 装满
: 机器上有个可以调节高度的挡板，把flat从下面抽出来，就抹平了
s*2
32 楼
搭车问下高手：
我把细胞悬浮在 1% SDS 的 buffer 里准备超声时，在冷室里 SDS 就析出了（我的 10
% SDS 储液在室温也会析出 -- 是不是有问题）。有没有什么解决办法？
谢谢！
40
【在 g*********3 的大作中提到】
: 做好chip的关键其实就是sonication+antibody。哥们，你肯定没有仔细读过manual，
: 如果不肯花时间，还是找个人带吧，或者问有经验的。
: 1. 你如果读了bioruptor的manual，发现0.1%SDS绝对起不了作用的（甚至他们有专门
: 卖0.1%SDS的special kit for sonication），因为0.1%太弱了。当然branson的那种
: probe，0.1%够了。
: 2. 单纯考虑多少cycle有意义吗？293和hepg2的cycle完全不一样。不过你用0.1%可能
: 需要100cycle 都有可能。
: 3. 30seconds on？？？？你这能有好结果吗？多查查protocol，一般都是10ON+30-40
: OFF
: 4.絮状物？你知道是什么吗？lipids！这个很常见。尤其是你的SDS不够。另外lysis
我把细胞悬浮在 1% SDS 的 buffer 里准备超声时，在冷室里 SDS 就析出了（我的 10
% SDS 储液在室温也会析出 -- 是不是有问题）。有没有什么解决办法？
谢谢！
40
【在 g*********3 的大作中提到】
: 做好chip的关键其实就是sonication+antibody。哥们，你肯定没有仔细读过manual，
: 如果不肯花时间，还是找个人带吧，或者问有经验的。
: 1. 你如果读了bioruptor的manual，发现0.1%SDS绝对起不了作用的（甚至他们有专门
: 卖0.1%SDS的special kit for sonication），因为0.1%太弱了。当然branson的那种
: probe，0.1%够了。
: 2. 单纯考虑多少cycle有意义吗？293和hepg2的cycle完全不一样。不过你用0.1%可能
: 需要100cycle 都有可能。
: 3. 30seconds on？？？？你这能有好结果吗？多查查protocol，一般都是10ON+30-40
: OFF
: 4.絮状物？你知道是什么吗？lipids！这个很常见。尤其是你的SDS不够。另外lysis
w*r
33 楼
怎么你能收到呢，我们都收不到呢，难道是人品问题，浪费了1.06
【在 l****8 的大作中提到】
: 4个都收到了, 昨天刚取消的. 提个醒,要在4个星期内取消,不是一个月.
【在 l****8 的大作中提到】
: 4个都收到了, 昨天刚取消的. 提个醒,要在4个星期内取消,不是一个月.
G*a
34 楼
看着就过瘾！请问专业猫，这个机器多少钱？在哪儿买呀？谢谢！
g*3
35 楼
正常。SDS is pretty sensitive to salt and Temperature.
the optimal temperature we have optimized for 1%sds sonication is 17 degree.
Others have reported this too.
Even if people claimed 4degree sonication (pump-cold water circulation),
the actual temperature is ~17degree.
We always dissolve nuclei in lysis buffer right before the sonication to
avoid the long stand of 1%sds+nuclei on ice, which will precipitate.
10
【在 s**2 的大作中提到】
: 搭车问下高手：
: 我把细胞悬浮在 1% SDS 的 buffer 里准备超声时，在冷室里 SDS 就析出了（我的 10
: % SDS 储液在室温也会析出 -- 是不是有问题）。有没有什么解决办法？
: 谢谢！
:
: 40
the optimal temperature we have optimized for 1%sds sonication is 17 degree.
Others have reported this too.
Even if people claimed 4degree sonication (pump-cold water circulation),
the actual temperature is ~17degree.
We always dissolve nuclei in lysis buffer right before the sonication to
avoid the long stand of 1%sds+nuclei on ice, which will precipitate.
10
【在 s**2 的大作中提到】
: 搭车问下高手：
: 我把细胞悬浮在 1% SDS 的 buffer 里准备超声时，在冷室里 SDS 就析出了（我的 10
: % SDS 储液在室温也会析出 -- 是不是有问题）。有没有什么解决办法？
: 谢谢！
:
: 40
n*l
36 楼
大家知道网上能cancel吗？
【在 w****r 的大作中提到】
: 3个礼拜了，至今没有收到
【在 w****r 的大作中提到】
: 3个礼拜了，至今没有收到
s*2
37 楼
devil is in the details. 果然是高人！
那循环水的温度，我是应该设成4C还是17C呢？
我每个cycle 用15sec ON / 45sec OFF，到cycle后期似乎就能看到一点点SDS沉淀开始
析出。
多谢指教！
degree.
【在 g*********3 的大作中提到】
: 正常。SDS is pretty sensitive to salt and Temperature.
: the optimal temperature we have optimized for 1%sds sonication is 17 degree.
: Others have reported this too.
: Even if people claimed 4degree sonication (pump-cold water circulation),
: the actual temperature is ~17degree.
: We always dissolve nuclei in lysis buffer right before the sonication to
: avoid the long stand of 1%sds+nuclei on ice, which will precipitate.
:
: 10
那循环水的温度，我是应该设成4C还是17C呢？
我每个cycle 用15sec ON / 45sec OFF，到cycle后期似乎就能看到一点点SDS沉淀开始
析出。
多谢指教！
degree.
【在 g*********3 的大作中提到】
: 正常。SDS is pretty sensitive to salt and Temperature.
: the optimal temperature we have optimized for 1%sds sonication is 17 degree.
: Others have reported this too.
: Even if people claimed 4degree sonication (pump-cold water circulation),
: the actual temperature is ~17degree.
: We always dissolve nuclei in lysis buffer right before the sonication to
: avoid the long stand of 1%sds+nuclei on ice, which will precipitate.
:
: 10
w*r
38 楼
不能，需要打电话
【在 n******l 的大作中提到】
: 大家知道网上能cancel吗？
【在 n******l 的大作中提到】
: 大家知道网上能cancel吗？
t*G
39 楼
同没收到, 已经开始收钱了, 要赶紧取消
g*1
40 楼
如何cancel的？账户里的cancel都没用。。。
【在 s*****e 的大作中提到】
: re, canceled today
【在 s*****e 的大作中提到】
: re, canceled today
w*r
41 楼
call
【在 g*******1 的大作中提到】
: 如何cancel的？账户里的cancel都没用。。。
【在 g*******1 的大作中提到】
: 如何cancel的？账户里的cancel都没用。。。
Y*o
42 楼
number?
Thanks.
【在 w****r 的大作中提到】
: call
Thanks.
【在 w****r 的大作中提到】
: call
相关阅读
厦门日报: 厦大确认女教授傅瑾文凭造假 by佘峥 (转载)生物版竟然还有人反对舟子打傅谨紧急求助：怎么溶解蛋白质沉淀啊？现在的问题是如何不让李鬼逃亡有没有人要买汉英生物学词汇？急求paper ，链接，邮箱，一个包子凭啥方舟子要人家亮出学位证？我的直觉告诉我，bsun这辟谣贴一发，张部长那里要炸锅别吵了，不是说辞职了么microRNA- miRNA profiling求paper, thanks (收到)大家觉得JBC和PLoS哪个更难投？分子调控领域RNA-seq map工具求助！哪位在UW (seattle)做电生理？求paper,发包子 John Wiley 的FJ 应该被继续追究问个文章交修改稿的问题shRNA in THP1 cells大家都是什么时候申请博后的用大鼠细胞制造硅胶水母