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免疫沉淀时抗体+珠子+细胞裂解液摇一晚上靠谱么?

免疫沉淀时抗体+珠子+细胞裂解液摇一晚上靠谱么?# Biology - 生物学

t*y2010-04-15 07:04

1 楼

当然也在4度下.
看文章多数是抗体+细胞裂解液两样摇过夜,第二天再上珠子,可我这样做拉不下蛋白.
如果三样同摇,条带倒有了,又怕是非特异.卖我抗体的说他们就这么做(摇三样过夜)没
问题,IgG也不会有条带,结果我这么做IgG对照又有条带!(不过我这个IgG质量也有些可
疑)
其他方法也在试,如果加大IP抗体的量吧,似乎珠子就有些凝聚成坨,似乎也加大非特异
的风险.
有没有人有经验指点一下,这么做行么?谢谢了

b*e2010-04-15 07:04

2 楼

我都是这么做的，没问题，IgG有非特异性带的问题你再摸下条件，可能抗体本身有交
叉反应。

【在 t********y 的大作中提到】

: 当然也在4度下.
: 看文章多数是抗体+细胞裂解液两样摇过夜,第二天再上珠子,可我这样做拉不下蛋白.
: 如果三样同摇,条带倒有了,又怕是非特异.卖我抗体的说他们就这么做(摇三样过夜)没
: 问题,IgG也不会有条带,结果我这么做IgG对照又有条带!(不过我这个IgG质量也有些可
: 疑)
: 其他方法也在试,如果加大IP抗体的量吧,似乎珠子就有些凝聚成坨,似乎也加大非特异
: 的风险.
: 有没有人有经验指点一下,这么做行么?谢谢了

t*y2010-04-15 07:04

3 楼

唉会不会也有可能使santa crutz的珠子质量不佳