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请教Qiagen质粒中提kit
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请教Qiagen质粒中提kit# Biology - 生物学
q*w
1 楼
我有一个关于修改学生文章的问题，不知道大家怎么看。
我的实验室学生的文章，无论谁写的，我都觉得没法投出去。一般都必须重新写。特别
是introduction, conclusion and key discussions。但是这个总是要花很多时间和精
力，也影响进度。想想我当年做博后的时候，老板基本不怎么修改我们的文章。最近我
恰好审老板的一篇文章。是一个中国博后的第一作者。文章写的那叫一个烂。奇怪的是
，这些文章最后都发表了。杂志有好有坏，至少是中等吧(IF>4)。
我的问题是，为什么我对我的学生的文章怎么也看不惯。到底是我的眼光和感觉有问题
，还是所有学生的文章必须这样反复修改？我怎么就做不到象前老板一样把写得不好的
文章投出去？有时候，我自己就想试试，把学生这样的文章直接投出去，看看如何，也
可以让那些审稿人来教育教育学生。但是最终还是忍不住把文章修改后再发出去。
看到很多很牛的实验室每年都发几十篇文章（比如我的前老板），老板不可能象我这样
一篇篇文章反复修改。有人可能说，牛实验室的学生也牛。其实也不尽然。我觉得自己
实验室有个别学生并不比那些牛实验室的学生差。但是他们的文章我还是不得不重写。
诸位老板在这方面有没有什么经验之谈？
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w*o
2 楼
谢谢。
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l*t
3 楼
大家好，有个情况要求助。
我在美国是F-1学生，在学校有收入。一年前我妈要在美国买保健品，所以她找了一个
代购，我妈想用我的SSN注册了一个产品会员，然后注册后购物一定金额会立马奖励80
美元，有点像返现，她说是bonus，同时订购产品会有折扣，我妈不懂法律，图便宜省
钱就注册了。我现在才知道那是一个保健品的直销公司。
最近那个代购告诉我我有一个1099-MISC要报税，我当时就傻眼了。那个1099-MISC表上
第7栏nonemployee income那一项有80美元，F-1是不允许收到这个表的，我现在很着急
。我确实没有参与过任何与直销有关的活动，也不知情，都是我妈去注册图便宜。
我想问下，这种情况严重吗？我应该会如实报税，但按理来说移民局是禁止F-1有这样
的收入，不过金额比较小，仅80美元，会不会有什么后果，我应该做些什么？
谢谢了
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s*0
4 楼
刚才在砖头兄的冬瓜帖子里，问了个冬瓜问题，可是大拿们都在吵架，没有人理我。。
。只好另开一贴。。。。
我种了一颗冬瓜，目前只结了两个冬瓜，一大一小，目前不断的有雄花
和雌花开放，但是雌花的小瓜都不断的死掉。。。。即使人工授粉了也会死掉，这个是
为啥呢？
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a*l
5 楼
【 以下文字转载自 PhotoGear 讨论区 】
发信人: garfieldking (千情万怨已皆愁), 信区: PhotoGear
标 题: 【本周系列】10/18/2013 秋天红叶黄叶，2013，这个秋天并不凄冷
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Oct 15 01:40:40 2013, 美东)
贴啥都行， 秋天的就可以。。。秋天其实是最美好的季节
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m*9
6 楼
T400的4芯电池在连着外接电源时也会用电么？
我的T400是最普通的4芯电池，平常的时候都是插着电源的，可是我发现电池的电量还
是会慢慢减少，请问这个是正常的么？还是说所有的电池都这样？
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C*e
7 楼
Qiagen Mini Prep很好用
可是Midi Kit我用过很多次了，没有哪次能成功的
提出来的量如果计算ng DNA/ml culture的话比Mini Kit少了近10倍啊
搞得我还不如Mini提好多，然后乙醇沉淀呢
可是每次看到有Midi Kit放在那里闲置，又会觉得是不是该物尽其用
版上经常用Midi Kit的来说说有没有什么trick？
我是严格按照protocol做的
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gr
8 楼
大胆投就是了。

【在 q****w 的大作中提到】
: 我有一个关于修改学生文章的问题，不知道大家怎么看。
: 我的实验室学生的文章，无论谁写的，我都觉得没法投出去。一般都必须重新写。特别
: 是introduction, conclusion and key discussions。但是这个总是要花很多时间和精
: 力，也影响进度。想想我当年做博后的时候，老板基本不怎么修改我们的文章。最近我
: 恰好审老板的一篇文章。是一个中国博后的第一作者。文章写的那叫一个烂。奇怪的是
: ，这些文章最后都发表了。杂志有好有坏，至少是中等吧(IF>4)。
: 我的问题是，为什么我对我的学生的文章怎么也看不惯。到底是我的眼光和感觉有问题
: ，还是所有学生的文章必须这样反复修改？我怎么就做不到象前老板一样把写得不好的
: 文章投出去？有时候，我自己就想试试，把学生这样的文章直接投出去，看看如何，也
: 可以让那些审稿人来教育教育学生。但是最终还是忍不住把文章修改后再发出去。
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w*o
9 楼
在北京。

【在 w***o 的大作中提到】
: 谢谢。
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b*8
10 楼
nonemployee income有什么关系？
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l*y
11 楼
我的丝瓜也有同样的问题
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Z*0
13 楼
正常啊。电池本身会少量放电。为了保护电池，一般都是电量低于某个值时，才会充电
。你可以看那个power manager里边的设定。
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R*w
14 楼
不会吧。肯定是哪里弄错了。
我用了很多，觉得最初几步特别重要。
1。加入P1后一定要充分混匀，光votex有时不行，还得反复吹打,知道看不见任何颗粒
状的东西
2. 加入P2后摇匀，变成均匀的蓝色，一般比较粘稠
3. 加入P3不要混的太猛（千万别Votex)，晃动几下，又变成白色。（如果摇的太猛容
易堵住过滤的管子）
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t*g
15 楼
问个实际点的问题，你为什么对自己的写作水平这么自信？

【在 q****w 的大作中提到】
: 我有一个关于修改学生文章的问题，不知道大家怎么看。
: 我的实验室学生的文章，无论谁写的，我都觉得没法投出去。一般都必须重新写。特别
: 是introduction, conclusion and key discussions。但是这个总是要花很多时间和精
: 力，也影响进度。想想我当年做博后的时候，老板基本不怎么修改我们的文章。最近我
: 恰好审老板的一篇文章。是一个中国博后的第一作者。文章写的那叫一个烂。奇怪的是
: ，这些文章最后都发表了。杂志有好有坏，至少是中等吧(IF>4)。
: 我的问题是，为什么我对我的学生的文章怎么也看不惯。到底是我的眼光和感觉有问题
: ，还是所有学生的文章必须这样反复修改？我怎么就做不到象前老板一样把写得不好的
: 文章投出去？有时候，我自己就想试试，把学生这样的文章直接投出去，看看如何，也
: 可以让那些审稿人来教育教育学生。但是最终还是忍不住把文章修改后再发出去。
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d*r
16 楼
北京不知道，上海要求提前一个小时
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c*n
17 楼
我办了个银行checking 拿了$50 refer奖励也被发1099-misc
写的是3.other income
我看网上说只要解释这是银行的bonus就好 并没有干不该干的事
你的情况就不清楚了
但是税肯定是要报的 因为你收到这张表的同时 银行也会给IRS发一份copy
不报就是偷税漏税了
而且我的$50被扣了$8的税 :(
事情已经发生了 先报了税再说吧 不报要是被IRS抽查到或者今后申绿卡被IRS翻旧账那
可是罚款坐牢都有可能的

大家好，有个情况要求助。
我在美国是F-1学生，在学校有收入。一年前我妈要在美国买保健品，所以她找了一个
代购，我妈想用我的SSN注册了一个产品会员，然后注册后购物一定金额会立马奖励80
美元，有点像返现，她说是bonus，同时订购产品会有折扣，我妈不懂法律，图便宜省
钱就注册了。我现在才知道那是一个保健品的直销公司。
最近那个代购告诉我我有一个1099-MISC要报税，我当时就傻眼了。那个1099-MISC表上
第7栏nonemployee income那一项有80美元，F-1是不允许收到这个表的，我现在很着急
。我确实没有参与过任何与直销有关的活动，也不知情，都是我妈去注册图便宜。
我想问下，这种情况严重吗？我应该会如实报税，但按理来说移民局是禁止F-1有这样
的收入，不过金额比较小，仅80美元，会不会有什么后果，我应该做些什么？
谢谢了

【在 l**********t 的大作中提到】
: 大家好，有个情况要求助。
: 我在美国是F-1学生，在学校有收入。一年前我妈要在美国买保健品，所以她找了一个
: 代购，我妈想用我的SSN注册了一个产品会员，然后注册后购物一定金额会立马奖励80
: 美元，有点像返现，她说是bonus，同时订购产品会有折扣，我妈不懂法律，图便宜省
: 钱就注册了。我现在才知道那是一个保健品的直销公司。
: 最近那个代购告诉我我有一个1099-MISC要报税，我当时就傻眼了。那个1099-MISC表上
: 第7栏nonemployee income那一项有80美元，F-1是不允许收到这个表的，我现在很着急
: 。我确实没有参与过任何与直销有关的活动，也不知情，都是我妈去注册图便宜。
: 我想问下，这种情况严重吗？我应该会如实报税，但按理来说移民局是禁止F-1有这样
: 的收入，不过金额比较小，仅80美元，会不会有什么后果，我应该做些什么？
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y*l
18 楼
可能是养分不够，　我的毛瓜就是这样的,一根藤上只能养一个,大的不摘,小的就会变
黄化掉.
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m*9
20 楼
可是我设的是75%以下再充电，那电池就不断的少量放电，直到75%？我以为插着电源，
电池就不工作了……

【在 Z**0 的大作中提到】
: 正常啊。电池本身会少量放电。为了保护电池，一般都是电量低于某个值时，才会充电
: 。你可以看那个power manager里边的设定。
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C*e
21 楼
我就是这么做的啊，但是Mini的时候很好用，Midi的时候怎么都不行

【在 R*****w 的大作中提到】
: 不会吧。肯定是哪里弄错了。
: 我用了很多，觉得最初几步特别重要。
: 1。加入P1后一定要充分混匀，光votex有时不行，还得反复吹打,知道看不见任何颗粒
: 状的东西
: 2. 加入P2后摇匀，变成均匀的蓝色，一般比较粘稠
: 3. 加入P3不要混的太猛（千万别Votex)，晃动几下，又变成白色。（如果摇的太猛容
: 易堵住过滤的管子）
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y*s
22 楼


【在 q****w 的大作中提到】
: 我有一个关于修改学生文章的问题，不知道大家怎么看。
: 我的实验室学生的文章，无论谁写的，我都觉得没法投出去。一般都必须重新写。特别
: 是introduction, conclusion and key discussions。但是这个总是要花很多时间和精
: 力，也影响进度。想想我当年做博后的时候，老板基本不怎么修改我们的文章。最近我
: 恰好审老板的一篇文章。是一个中国博后的第一作者。文章写的那叫一个烂。奇怪的是
: ，这些文章最后都发表了。杂志有好有坏，至少是中等吧(IF>4)。
: 我的问题是，为什么我对我的学生的文章怎么也看不惯。到底是我的眼光和感觉有问题
: ，还是所有学生的文章必须这样反复修改？我怎么就做不到象前老板一样把写得不好的
: 文章投出去？有时候，我自己就想试试，把学生这样的文章直接投出去，看看如何，也
: 可以让那些审稿人来教育教育学生。但是最终还是忍不住把文章修改后再发出去。
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z*n
23 楼
养分、水分不够，施肥，浇水，可以试试

【在 s**********0 的大作中提到】
: 刚才在砖头兄的冬瓜帖子里，问了个冬瓜问题，可是大拿们都在吵架，没有人理我。。
: 。只好另开一贴。。。。
: 我种了一颗冬瓜，目前只结了两个冬瓜，一大一小，目前不断的有雄花
: 和雌花开放，但是雌花的小瓜都不断的死掉。。。。即使人工授粉了也会死掉，这个是
: 为啥呢？
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v*a
24 楼
我也是严格按照manual
觉得挺好
至今还木发现问题

【在 C*******e 的大作中提到】
: Qiagen Mini Prep很好用
: 可是Midi Kit我用过很多次了，没有哪次能成功的
: 提出来的量如果计算ng DNA/ml culture的话比Mini Kit少了近10倍啊
: 搞得我还不如Mini提好多，然后乙醇沉淀呢
: 可是每次看到有Midi Kit放在那里闲置，又会觉得是不是该物尽其用
: 版上经常用Midi Kit的来说说有没有什么trick？
: 我是严格按照protocol做的
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y*s
25 楼
我感觉可能是每个人的习惯问题吧。我导师和你一样，我们学生写的文章他都说不行，
不合乎逻辑，贡献不突出，等等。然后有的文章他也重新写。有时候文章太多了，他改
不过来，就直接投出去了，也中了，如果杂志一般，他就说，杂志水平差；如果杂志好
，他就说，肯定是我的朋友审稿的。刚开始我们都以为他这么做只不过为了突出他的贡
献（因为我们的文章都是自己的想法，自己做的，老板一点贡献都没有，我们不需要做
实验），以便他可以名正言顺地做第一作者。但是看了你的情况，我想可能是每个人都
有自己的思维和逻辑习惯，所以觉得别人写的都是垃圾。我也能够理解我的老板了。

【在 q****w 的大作中提到】
: 我有一个关于修改学生文章的问题，不知道大家怎么看。
: 我的实验室学生的文章，无论谁写的，我都觉得没法投出去。一般都必须重新写。特别
: 是introduction, conclusion and key discussions。但是这个总是要花很多时间和精
: 力，也影响进度。想想我当年做博后的时候，老板基本不怎么修改我们的文章。最近我
: 恰好审老板的一篇文章。是一个中国博后的第一作者。文章写的那叫一个烂。奇怪的是
: ，这些文章最后都发表了。杂志有好有坏，至少是中等吧(IF>4)。
: 我的问题是，为什么我对我的学生的文章怎么也看不惯。到底是我的眼光和感觉有问题
: ，还是所有学生的文章必须这样反复修改？我怎么就做不到象前老板一样把写得不好的
: 文章投出去？有时候，我自己就想试试，把学生这样的文章直接投出去，看看如何，也
: 可以让那些审稿人来教育教育学生。但是最终还是忍不住把文章修改后再发出去。
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s*0
26 楼
谢谢小阳伞，那么大一个冬瓜要的养分估计太多了。。。。等熟了就赶紧把它摘下来～～

【在 y**l 的大作中提到】
: 可能是养分不够，　我的毛瓜就是这样的,一根藤上只能养一个,大的不摘,小的就会变
: 黄化掉.
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o*i
27 楼
isopropanal 沉淀 离心以后 你能否看见DNA pellet？
如果没有 加入isop以后要震荡混匀 不能简单摇摇了事
用kit提质粒 出不来还真不多见啊

【在 C*******e 的大作中提到】
: 我就是这么做的啊，但是Mini的时候很好用，Midi的时候怎么都不行
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H*N
28 楼
看来工科教授们发论文真不要脸。自己一点贡献都没有都恬不知耻地做第一作者。 看
来还是管理经济学科在这方面严谨。
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s*0
29 楼
好的，今天就追肥，谢谢了～～

【在 z**********n 的大作中提到】
: 养分、水分不够，施肥，浇水，可以试试
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C*e
30 楼
唉，被鄙视了～
可是MINI用的就是好的啊
而且我们实验室另外一个博后也一样
我们两个一致认为MIDI Kit sucks
Isopropanal沉淀以后看不到pellet
我确信要均匀了，绝对均匀，虽然没有震荡
然后因为没有pellet（我知道哪边冲上）
每次都是用EB一遍一遍吹洗管壁，吹洗那“看不见的”DNA pellet
BTW，我这一步用的玻璃试管
会有关系么？

【在 o**i 的大作中提到】
: isopropanal 沉淀 离心以后 你能否看见DNA pellet？
: 如果没有 加入isop以后要震荡混匀 不能简单摇摇了事
: 用kit提质粒 出不来还真不多见啊
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c*d
31 楼
我老板也这样，经常自己改完一遍，之后再改就把他之前的都给改了又。

【在 q****w 的大作中提到】
: 我有一个关于修改学生文章的问题，不知道大家怎么看。
: 我的实验室学生的文章，无论谁写的，我都觉得没法投出去。一般都必须重新写。特别
: 是introduction, conclusion and key discussions。但是这个总是要花很多时间和精
: 力，也影响进度。想想我当年做博后的时候，老板基本不怎么修改我们的文章。最近我
: 恰好审老板的一篇文章。是一个中国博后的第一作者。文章写的那叫一个烂。奇怪的是
: ，这些文章最后都发表了。杂志有好有坏，至少是中等吧(IF>4)。
: 我的问题是，为什么我对我的学生的文章怎么也看不惯。到底是我的眼光和感觉有问题
: ，还是所有学生的文章必须这样反复修改？我怎么就做不到象前老板一样把写得不好的
: 文章投出去？有时候，我自己就想试试，把学生这样的文章直接投出去，看看如何，也
: 可以让那些审稿人来教育教育学生。但是最终还是忍不住把文章修改后再发出去。
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r*9
32 楼
庄稼地不肥把
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o*i
33 楼
没辙 那你只能把每步的sample收集跑胶了

【在 C*******e 的大作中提到】
: 唉，被鄙视了～
: 可是MINI用的就是好的啊
: 而且我们实验室另外一个博后也一样
: 我们两个一致认为MIDI Kit sucks
: Isopropanal沉淀以后看不到pellet
: 我确信要均匀了，绝对均匀，虽然没有震荡
: 然后因为没有pellet（我知道哪边冲上）
: 每次都是用EB一遍一遍吹洗管壁，吹洗那“看不见的”DNA pellet
: BTW，我这一步用的玻璃试管
: 会有关系么？
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a*9
34 楼
你导师还和学生抢第一作者? 不知道为什么, 看到这种教授我就有一点鄙视(确实见过
个别牛人总是自己第一作者; 此外, 某些领域按照姓名排序). 作为导师, 通讯作者的
credit就足够了, 得给学生留一些credit. 我自己写的文章, 也是让学生做第一作者,
我只要保证最后一位就行了.

【在 y****s 的大作中提到】
: 我感觉可能是每个人的习惯问题吧。我导师和你一样，我们学生写的文章他都说不行，
: 不合乎逻辑，贡献不突出，等等。然后有的文章他也重新写。有时候文章太多了，他改
: 不过来，就直接投出去了，也中了，如果杂志一般，他就说，杂志水平差；如果杂志好
: ，他就说，肯定是我的朋友审稿的。刚开始我们都以为他这么做只不过为了突出他的贡
: 献（因为我们的文章都是自己的想法，自己做的，老板一点贡献都没有，我们不需要做
: 实验），以便他可以名正言顺地做第一作者。但是看了你的情况，我想可能是每个人都
: 有自己的思维和逻辑习惯，所以觉得别人写的都是垃圾。我也能够理解我的老板了。
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s*0
35 楼
呵呵，老乡你怎么也跑来了啊～～你真是个热闹人啊～～

【在 r********9 的大作中提到】
: 庄稼地不肥把
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C*e
36 楼
版上除了我没有人用Midi Kit有问题么？
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M*n
37 楼
你怎么可以审你老板的文章?
你应该decline，这个有conflict of interest

【在 q****w 的大作中提到】
: 我有一个关于修改学生文章的问题，不知道大家怎么看。
: 我的实验室学生的文章，无论谁写的，我都觉得没法投出去。一般都必须重新写。特别
: 是introduction, conclusion and key discussions。但是这个总是要花很多时间和精
: 力，也影响进度。想想我当年做博后的时候，老板基本不怎么修改我们的文章。最近我
: 恰好审老板的一篇文章。是一个中国博后的第一作者。文章写的那叫一个烂。奇怪的是
: ，这些文章最后都发表了。杂志有好有坏，至少是中等吧(IF>4)。
: 我的问题是，为什么我对我的学生的文章怎么也看不惯。到底是我的眼光和感觉有问题
: ，还是所有学生的文章必须这样反复修改？我怎么就做不到象前老板一样把写得不好的
: 文章投出去？有时候，我自己就想试试，把学生这样的文章直接投出去，看看如何，也
: 可以让那些审稿人来教育教育学生。但是最终还是忍不住把文章修改后再发出去。
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y*l
38 楼
欢欢太客气拉.

～～

【在 s**********0 的大作中提到】
: 谢谢小阳伞，那么大一个冬瓜要的养分估计太多了。。。。等熟了就赶紧把它摘下来～～
avatar
a*k
39 楼
除了有一次最后一步把溶液洒了，其他时候都挺好

【在 C*******e 的大作中提到】
: 版上除了我没有人用Midi Kit有问题么？
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d*a
40 楼
我觉得这很正常，特别是新学生写的文章。

【在 q****w 的大作中提到】
: 我有一个关于修改学生文章的问题，不知道大家怎么看。
: 我的实验室学生的文章，无论谁写的，我都觉得没法投出去。一般都必须重新写。特别
: 是introduction, conclusion and key discussions。但是这个总是要花很多时间和精
: 力，也影响进度。想想我当年做博后的时候，老板基本不怎么修改我们的文章。最近我
: 恰好审老板的一篇文章。是一个中国博后的第一作者。文章写的那叫一个烂。奇怪的是
: ，这些文章最后都发表了。杂志有好有坏，至少是中等吧(IF>4)。
: 我的问题是，为什么我对我的学生的文章怎么也看不惯。到底是我的眼光和感觉有问题
: ，还是所有学生的文章必须这样反复修改？我怎么就做不到象前老板一样把写得不好的
: 文章投出去？有时候，我自己就想试试，把学生这样的文章直接投出去，看看如何，也
: 可以让那些审稿人来教育教育学生。但是最终还是忍不住把文章修改后再发出去。
avatar
r*9
41 楼
丫头嫩认错人鸟， 莫吓任老乡啊

【在 s**********0 的大作中提到】
: 呵呵，老乡你怎么也跑来了啊～～你真是个热闹人啊～～
avatar
C*e
42 楼
奇怪了，难道是试剂过期了？
不是我一个人的问题，实验室另外一个博后也用过，一样的结果
avatar
a*y
43 楼
只要过去几年没有合作都可以。我被要求去审一篇我师弟的文章，我表示了回避的意思
，结果editor只要你们最近没合作，都可以，it's a small circle, 如果这样回避就
很难找人review了。

【在 M*****n 的大作中提到】
: 你怎么可以审你老板的文章?
: 你应该decline，这个有conflict of interest
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s*0
44 楼
冒错冒错，就是你～～～

【在 r********9 的大作中提到】
: 丫头嫩认错人鸟， 莫吓任老乡啊
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R*w
45 楼
把别人的试剂（知道肯定行的）借过来，自己再做一次。用试剂盒出不来还真是怪事。
要不就是你的细菌有问题，换个质粒试一下。这种情况我也遇到过几次，有时同时提的
几个质粒有的有，有的啥都没有。重新转化其他感受态细胞，再提又有了。

【在 C*******e 的大作中提到】
: 奇怪了，难道是试剂过期了？
: 不是我一个人的问题，实验室另外一个博后也用过，一样的结果
avatar
d*a
46 楼
审你导师文章的时候，你专门问过编辑了吗？NSF proposal review的规定中，师兄弟
之间并没有conflict of interests，但导师和学生是lifetime COI。

【在 a**********y 的大作中提到】
: 只要过去几年没有合作都可以。我被要求去审一篇我师弟的文章，我表示了回避的意思
: ，结果editor只要你们最近没合作，都可以，it's a small circle, 如果这样回避就
: 很难找人review了。
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r*9
47 楼
晕啊， 嫩不小的现在是刀光贱影？ 跟我任了老乡， 嫩下次发问毛的人喏的

【在 s**********0 的大作中提到】
: 冒错冒错，就是你～～～
avatar
R*w
48 楼
mini你也用P1,P2,P3的吗？
QIAGEN有种QuickLyse Miniprep Kit比这种快多了。我强烈推荐这种Mini kit。

【在 C*******e 的大作中提到】
: 我就是这么做的啊，但是Mini的时候很好用，Midi的时候怎么都不行
avatar
a*y
49 楼
我倒是没有审过导师的文章，也没有被他审过，就是师兄弟

【在 d***a 的大作中提到】
: 审你导师文章的时候，你专门问过编辑了吗？NSF proposal review的规定中，师兄弟
: 之间并没有conflict of interests，但导师和学生是lifetime COI。
avatar
s*0
50 楼
额。。。原来是这样啊。。。偶不晓得江湖险恶啊。。。
那我不认得你啊～～88

【在 r********9 的大作中提到】
: 晕啊， 嫩不小的现在是刀光贱影？ 跟我任了老乡， 嫩下次发问毛的人喏的
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C*e
51 楼
....我原帖都写清楚了吧，mini的很好用，midi的不行
都是P1,P2,N3
本来是因为质粒是low copy number，mini提，3ml只出来10ng/ul*30ul，
所以改用midi，不是现买的，以前实验室走了的人留下来的，但是P1,P2,我用的是Mini的
但是这样提50ml也只出来20ng/ul*100ul的样子
所以一气之下以后都是mini小提好几个，然后乙醇沉淀
就是很疑惑为什么mini好使，midi不好使，所以上来问问大家
另外现在实验室里没有谁midi用起来提得效果好的，都跟我一样的困惑，为什么mini好
用midi不好用

【在 R*****w 的大作中提到】
: mini你也用P1,P2,P3的吗？
: QIAGEN有种QuickLyse Miniprep Kit比这种快多了。我强烈推荐这种Mini kit。
avatar
d*a
52 楼
不好意思，我以为是楼主在回答呢。

【在 a**********y 的大作中提到】
: 我倒是没有审过导师的文章，也没有被他审过，就是师兄弟
avatar
r*9
53 楼
气４我了

【在 s**********0 的大作中提到】
: 额。。。原来是这样啊。。。偶不晓得江湖险恶啊。。。
: 那我不认得你啊～～88
avatar
s*y
54 楼
每100毫升细菌液我一般能提出200~500ng

【在 C*******e 的大作中提到】
: Qiagen Mini Prep很好用
: 可是Midi Kit我用过很多次了，没有哪次能成功的
: 提出来的量如果计算ng DNA/ml culture的话比Mini Kit少了近10倍啊
: 搞得我还不如Mini提好多，然后乙醇沉淀呢
: 可是每次看到有Midi Kit放在那里闲置，又会觉得是不是该物尽其用
: 版上经常用Midi Kit的来说说有没有什么trick？
: 我是严格按照protocol做的
avatar
M*n
55 楼
i think this makes sense.
俺一致认为mentor和mentee是不能互相审稿的。

【在 d***a 的大作中提到】
: 审你导师文章的时候，你专门问过编辑了吗？NSF proposal review的规定中，师兄弟
: 之间并没有conflict of interests，但导师和学生是lifetime COI。
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s*0
56 楼
哈哈哈，你太好玩了～～

【在 r********9 的大作中提到】
: 气４我了
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O*e
57 楼
应该是ug吧

【在 s******y 的大作中提到】
: 每100毫升细菌液我一般能提出200~500ng
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v*a
58 楼
读博士开始的时候老板说写的差，不是英文
头毕业的时候老板说就是写作风格不一样
自始至终老板都是通篇改。。。

【在 y****s 的大作中提到】
: 我感觉可能是每个人的习惯问题吧。我导师和你一样，我们学生写的文章他都说不行，
: 不合乎逻辑，贡献不突出，等等。然后有的文章他也重新写。有时候文章太多了，他改
: 不过来，就直接投出去了，也中了，如果杂志一般，他就说，杂志水平差；如果杂志好
: ，他就说，肯定是我的朋友审稿的。刚开始我们都以为他这么做只不过为了突出他的贡
: 献（因为我们的文章都是自己的想法，自己做的，老板一点贡献都没有，我们不需要做
: 实验），以便他可以名正言顺地做第一作者。但是看了你的情况，我想可能是每个人都
: 有自己的思维和逻辑习惯，所以觉得别人写的都是垃圾。我也能够理解我的老板了。
avatar
s*y
59 楼
啊，对，不小心打错了。呵呵

【在 O******e 的大作中提到】
: 应该是ug吧
avatar
b*o
60 楼
猥琐的中国faculty,没有任何道德可言。
做lz的学生绝对倒了八辈子霉

【在 q****w 的大作中提到】
: 我有一个关于修改学生文章的问题，不知道大家怎么看。
: 我的实验室学生的文章，无论谁写的，我都觉得没法投出去。一般都必须重新写。特别
: 是introduction, conclusion and key discussions。但是这个总是要花很多时间和精
: 力，也影响进度。想想我当年做博后的时候，老板基本不怎么修改我们的文章。最近我
: 恰好审老板的一篇文章。是一个中国博后的第一作者。文章写的那叫一个烂。奇怪的是
: ，这些文章最后都发表了。杂志有好有坏，至少是中等吧(IF>4)。
: 我的问题是，为什么我对我的学生的文章怎么也看不惯。到底是我的眼光和感觉有问题
: ，还是所有学生的文章必须这样反复修改？我怎么就做不到象前老板一样把写得不好的
: 文章投出去？有时候，我自己就想试试，把学生这样的文章直接投出去，看看如何，也
: 可以让那些审稿人来教育教育学生。但是最终还是忍不住把文章修改后再发出去。
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C*e
61 楼
对啊，那个才正常嘛，所以我才来问问为什么midi在我们实验室不work
是不是有什么trick，或者我们忽视了的东西

【在 s******y 的大作中提到】
: 啊，对，不小心打错了。呵呵
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s*d
62 楼
你试过几个plasmids，所有的都这样吗。我一般提10个里面会出现1到2个产量特别低的
，重新转化，或者换不同的e.coli strain。invitrogen有一个叫什么stable之类的
competent cell，据说很好用。
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o*i
63 楼
mini P1 P2 N3
midi or maxi P1 P2 P3 (P3 is cold)

【在 O******e 的大作中提到】
: 应该是ug吧
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C*e
64 楼
P3和N3有什么区别啊？说起来我的P3不是放冰箱的呢，会不会是因为这个？

【在 o**i 的大作中提到】
: mini P1 P2 N3
: midi or maxi P1 P2 P3 (P3 is cold)
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o*i
65 楼
duh!

【在 C*******e 的大作中提到】
: P3和N3有什么区别啊？说起来我的P3不是放冰箱的呢，会不会是因为这个？
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C*e
66 楼
3个plasmid用过中提
我不知道和strain会不会有关系
但是我同样的plasmid同样的strain，同一批转化的菌，小提得到的ng DNA/ml culture
就是比中
提的多，这种情况我觉得还是跟kit或者kit的使用比较有关系吧

【在 s**********d 的大作中提到】
: 你试过几个plasmids，所有的都这样吗。我一般提10个里面会出现1到2个产量特别低的
: ，重新转化，或者换不同的e.coli strain。invitrogen有一个叫什么stable之类的
: competent cell，据说很好用。
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s*y
67 楼
P3不放冰箱的话，很多蛋白会沉淀不彻底，会有可能堵住柱子，从而导致
plasmid回收率下降

culture

【在 C*******e 的大作中提到】
: 3个plasmid用过中提
: 我不知道和strain会不会有关系
: 但是我同样的plasmid同样的strain，同一批转化的菌，小提得到的ng DNA/ml culture
: 就是比中
: 提的多，这种情况我觉得还是跟kit或者kit的使用比较有关系吧
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j*b
68 楼
玻璃会吸附DNA？

【在 C*******e 的大作中提到】
: 唉，被鄙视了～
: 可是MINI用的就是好的啊
: 而且我们实验室另外一个博后也一样
: 我们两个一致认为MIDI Kit sucks
: Isopropanal沉淀以后看不到pellet
: 我确信要均匀了，绝对均匀，虽然没有震荡
: 然后因为没有pellet（我知道哪边冲上）
: 每次都是用EB一遍一遍吹洗管壁，吹洗那“看不见的”DNA pellet
: BTW，我这一步用的玻璃试管
: 会有关系么？
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s*y
69 楼
啊呀，好像是哦
玻璃一般都是带正电的。

【在 j*b 的大作中提到】
: 玻璃会吸附DNA？
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v*a
70 楼
以前听说过有的东西在特定的地方就是不work
看来是你们lab的风水问题。。。

【在 C*******e 的大作中提到】
: 奇怪了，难道是试剂过期了？
: 不是我一个人的问题，实验室另外一个博后也用过，一样的结果
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C*e
71 楼
我是隐约记得玻璃会吸附DNA
但是如果用我们实验室的塑料管子，那就什么都看不到了
完全不透明

【在 s******y 的大作中提到】
: 啊呀，好像是哦
: 玻璃一般都是带正电的。
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g*r
72 楼
反应体系大 单位产量肯定低呀

【在 C*******e 的大作中提到】
: Qiagen Mini Prep很好用
: 可是Midi Kit我用过很多次了，没有哪次能成功的
: 提出来的量如果计算ng DNA/ml culture的话比Mini Kit少了近10倍啊
: 搞得我还不如Mini提好多，然后乙醇沉淀呢
: 可是每次看到有Midi Kit放在那里闲置，又会觉得是不是该物尽其用
: 版上经常用Midi Kit的来说说有没有什么trick？
: 我是严格按照protocol做的
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i*m
73 楼
I use Qiagen maxi and it works perfect.
BTW, I use QIAGEN not Qiafilter

【在 C*******e 的大作中提到】
: Qiagen Mini Prep很好用
: 可是Midi Kit我用过很多次了，没有哪次能成功的
: 提出来的量如果计算ng DNA/ml culture的话比Mini Kit少了近10倍啊
: 搞得我还不如Mini提好多，然后乙醇沉淀呢
: 可是每次看到有Midi Kit放在那里闲置，又会觉得是不是该物尽其用
: 版上经常用Midi Kit的来说说有没有什么trick？
: 我是严格按照protocol做的
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R*w
74 楼
如果一次性培养的细菌取一部分小提，另外一部分大提，小提出来了、大提没出来，才
能说明细菌没问题。
如果小提之后，剩下的菌液再扩大培养，这中间还是有可能有变化。即使小提出来了、
不一定大提肯定有。尤其是如果冰箱放几天后再扩大培养。
如果你不死心就多试几次吧，否则就放弃，用你的小提吧mini, midi, max用了不少，
也只是偶尔提不出来，还没出现过像你一样的。
可能是风水不好。

Mini的

【在 C*******e 的大作中提到】
: ....我原帖都写清楚了吧，mini的很好用，midi的不行
: 都是P1,P2,N3
: 本来是因为质粒是low copy number，mini提，3ml只出来10ng/ul*30ul，
: 所以改用midi，不是现买的，以前实验室走了的人留下来的，但是P1,P2,我用的是Mini的
: 但是这样提50ml也只出来20ng/ul*100ul的样子
: 所以一气之下以后都是mini小提好几个，然后乙醇沉淀
: 就是很疑惑为什么mini好使，midi不好使，所以上来问问大家
: 另外现在实验室里没有谁midi用起来提得效果好的，都跟我一样的困惑，为什么mini好
: 用midi不好用
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C*e
75 楼
谢谢提醒！已经放冰箱去了
下次有机会试试
因为瓶子上写15-25度，就没放冰箱
而且以前看别人自己配P1,P2,P3也都是放室温的
所以没想到

【在 s******y 的大作中提到】
: P3不放冰箱的话，很多蛋白会沉淀不彻底，会有可能堵住柱子，从而导致
: plasmid回收率下降
:
: culture
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v*a
76 楼
那你不就是没有严格按照protocol造成的问题
是用之前放4度吧

【在 C*******e 的大作中提到】
: 谢谢提醒！已经放冰箱去了
: 下次有机会试试
: 因为瓶子上写15-25度，就没放冰箱
: 而且以前看别人自己配P1,P2,P3也都是放室温的
: 所以没想到
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C*e
77 楼
protocol上没有写P3要4度
瓶子上也没有写P3要4度，写的是15-25度
是附录里写P3保存温度15-25度或2-8度

【在 v***a 的大作中提到】
: 那你不就是没有严格按照protocol造成的问题
: 是用之前放4度吧
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C*e
78 楼
“还没出现过像你一样的”
什么意思嘛
我这不是在这里虚心求教，因为自己也觉得奇怪为什么midi kit不好用，如果那么不好
用，这个产品早
挂了。而且又不是我一个人的问题。我们实验室常规用mini，midi实验室别的成员也说
不好用，所以才
一直闲置的。

【在 R*****w 的大作中提到】
: 如果一次性培养的细菌取一部分小提，另外一部分大提，小提出来了、大提没出来，才
: 能说明细菌没问题。
: 如果小提之后，剩下的菌液再扩大培养，这中间还是有可能有变化。即使小提出来了、
: 不一定大提肯定有。尤其是如果冰箱放几天后再扩大培养。
: 如果你不死心就多试几次吧，否则就放弃，用你的小提吧mini, midi, max用了不少，
: 也只是偶尔提不出来，还没出现过像你一样的。
: 可能是风水不好。
:
: Mini的
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s*d
79 楼
小抽有东西中抽抽不出来其实很常见，我做了over 50 mutants，用midi很多。重新转
化吧，我就是这么解决问题的。
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C*e
80 楼
好的，谢谢建议
下次一定记得试一下

【在 s**********d 的大作中提到】
: 小抽有东西中抽抽不出来其实很常见，我做了over 50 mutants，用midi很多。重新转
: 化吧，我就是这么解决问题的。
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r*m
81 楼
P3不放冰箱没关系，但用成N3就肯定不行。。。
难道你们整个实验室都没这个常识？
另外mini和midi其实根本没有可比性，column构造差太远了吧。。。不能因为都是
qiagen出的kit就拿来比吧。。。
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C*e
82 楼
不要一上来就随便鄙视别人行不行
1.midi kit我没用N3，不知道你从哪里看来的；
什么叫“整个实验室都没常识”？！
有实验室常规不用midi，不需要大提，难道很不可思议么
2.谁也没说mini和midi column是一样的
midi出来产量少得不正常，所以问问大家看可能是怎么回事
这样也很奇怪么

【在 r*****m 的大作中提到】
: P3不放冰箱没关系，但用成N3就肯定不行。。。
: 难道你们整个实验室都没这个常识？
: 另外mini和midi其实根本没有可比性，column构造差太远了吧。。。不能因为都是
: qiagen出的kit就拿来比吧。。。
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r*m
83 楼
这里看来的。。。
看来是我老眼昏花了。。。

Mini的

【在 C*******e 的大作中提到】
: ....我原帖都写清楚了吧，mini的很好用，midi的不行
: 都是P1,P2,N3
: 本来是因为质粒是low copy number，mini提，3ml只出来10ng/ul*30ul，
: 所以改用midi，不是现买的，以前实验室走了的人留下来的，但是P1,P2,我用的是Mini的
: 但是这样提50ml也只出来20ng/ul*100ul的样子
: 所以一气之下以后都是mini小提好几个，然后乙醇沉淀
: 就是很疑惑为什么mini好使，midi不好使，所以上来问问大家
: 另外现在实验室里没有谁midi用起来提得效果好的，都跟我一样的困惑，为什么mini好
: 用midi不好用
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C*e
84 楼
Sorry
那是我没写清楚
我的意思是P1,P2,Neutralization buffer 3
总之P3、N3没有混用

【在 r*****m 的大作中提到】
: 这里看来的。。。
: 看来是我老眼昏花了。。。
:
: Mini的
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F*6
85 楼
最关键的一步是沉淀，不要在50ML的大管子里沉淀，我一般把分装到1.5ML管子里沉淀
。然后在70%的酒精清洗这步再集中到一起。这样做，保你万无一失！
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s*s
86 楼
1.首先你要保证你大瓶摇出来的菌和小摇出来的有一样多的质粒，
用大摇的菌取出来小抽一下看看？
2.不放心iso-pro沉淀的时候－70放一个小时先
3.强烈建议用50ml falcon tube做收集离心，干净，pellet清楚
注意速度不要超过6k，可以时间延长一些
Qiagen的Midi简直是最好的plasmid kit, 质粒绝对干净。以前实验
室做transgenic fly, 只有这个做出来的质粒打embryo不会有很高的
致死率

【在 C*******e 的大作中提到】
: Qiagen Mini Prep很好用
: 可是Midi Kit我用过很多次了，没有哪次能成功的
: 提出来的量如果计算ng DNA/ml culture的话比Mini Kit少了近10倍啊
: 搞得我还不如Mini提好多，然后乙醇沉淀呢
: 可是每次看到有Midi Kit放在那里闲置，又会觉得是不是该物尽其用
: 版上经常用Midi Kit的来说说有没有什么trick？
: 我是严格按照protocol做的
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l*d
87 楼
看来是过期了的，上面应该有日期吧

Mini的

【在 C*******e 的大作中提到】
: ....我原帖都写清楚了吧，mini的很好用，midi的不行
: 都是P1,P2,N3
: 本来是因为质粒是low copy number，mini提，3ml只出来10ng/ul*30ul，
: 所以改用midi，不是现买的，以前实验室走了的人留下来的，但是P1,P2,我用的是Mini的
: 但是这样提50ml也只出来20ng/ul*100ul的样子
: 所以一气之下以后都是mini小提好几个，然后乙醇沉淀
: 就是很疑惑为什么mini好使，midi不好使，所以上来问问大家
: 另外现在实验室里没有谁midi用起来提得效果好的，都跟我一样的困惑，为什么mini好
: 用midi不好用
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C*e
88 楼
非常感谢
你说的tube是这个
还是这个
http://2.bp.blogspot.com/_rbjgqdXMI-Q/Svxno8h8-
iI/AAAAAAAABng/4AoiF9Jht4A/s320/502px-falcon_tubes1.jpg
另外6k g还是6k rpm转多久呢

【在 s******s 的大作中提到】
: 1.首先你要保证你大瓶摇出来的菌和小摇出来的有一样多的质粒，
: 用大摇的菌取出来小抽一下看看？
: 2.不放心iso-pro沉淀的时候－70放一个小时先
: 3.强烈建议用50ml falcon tube做收集离心，干净，pellet清楚
: 注意速度不要超过6k，可以时间延长一些
: Qiagen的Midi简直是最好的plasmid kit, 质粒绝对干净。以前实验
: 室做transgenic fly, 只有这个做出来的质粒打embryo不会有很高的
: 致死率
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c*o
89 楼
别想了，直接上maxi
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m*o
90 楼
先看看质粒是高copy还是低copy,copy高低不同，加入buffer量不同
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s*s
91 楼
第二个。
应该时6k rcf,转到8k会有裂纹，不过不会漏，再高没试过。
大离心机6k这个数量级上大概rcf和rpm差的不多。

【在 C*******e 的大作中提到】
: 非常感谢
: 你说的tube是这个
: 还是这个
: http://2.bp.blogspot.com/_rbjgqdXMI-Q/Svxno8h8-
: iI/AAAAAAAABng/4AoiF9Jht4A/s320/502px-falcon_tubes1.jpg
: 另外6k g还是6k rpm转多久呢
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s*s
92 楼
最可能的原因时接种方法不对，导致medium里面amp被大量破坏，所以不长质粒。
可以试一下先长到2ml，离心下来然后再接种100－500ml,可能会好很多。

【在 m***o 的大作中提到】
: 先看看质粒是高copy还是低copy,copy高低不同，加入buffer量不同
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s*x
93 楼
We met similar problem before, later we foundit by simply using more lysis
buffer, such as triple the quantity would solve the problem.
The lysis process is much less efficient in large system.
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C*e
94 楼
我试的是卡纳抗性的，不是安卞的
不过谢谢提醒

【在 s******s 的大作中提到】
: 最可能的原因时接种方法不对，导致medium里面amp被大量破坏，所以不长质粒。
: 可以试一下先长到2ml，离心下来然后再接种100－500ml,可能会好很多。
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C*e
95 楼
学到了，谢谢！

lysis

【在 s********x 的大作中提到】
: We met similar problem before, later we foundit by simply using more lysis
: buffer, such as triple the quantity would solve the problem.
: The lysis process is much less efficient in large system.
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s*n
96 楼
我用的是QIAGEN Plasmid Plus Midi Kit，效果很好，P3不用放4度，最后用100-200
ul的EB洗脱，low copy的质粒可以得到大概300-600 ng/ul，不用浓缩。
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C*e
97 楼
ft，Plus和非Plus的区别是什么啊？

【在 s********n 的大作中提到】
: 我用的是QIAGEN Plasmid Plus Midi Kit，效果很好，P3不用放4度，最后用100-200
: ul的EB洗脱，low copy的质粒可以得到大概300-600 ng/ul，不用浓缩。
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s*n
98 楼
Protocol比较简单，不用沉淀浓缩。具体的你可以查一下Qiagen的manual。

【在 C*******e 的大作中提到】
: ft，Plus和非Plus的区别是什么啊？
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s*a
99 楼
有很大的不同，要不然为啥P2和P3是等体积，N3要加的比P2多！

【在 C*******e 的大作中提到】
: P3和N3有什么区别啊？说起来我的P3不是放冰箱的呢，会不会是因为这个？
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